Western blot

實驗以夏枯草處理細胞並收集其上清液，再以抽氣離心機進行濃 縮處理，取濃縮完成的樣品進行 western blot，實驗使用 MMP-2、

MMP-9 的單株抗體做分析。

以夏枯草處理 A549 細胞時， MMP-9 的表現量隨著夏枯草濃度 上升而降低，MMP-2 則是在未加藥的控制組與夏枯草濃度為 1 mg / ml 有相近的表現量，當夏枯草濃度升高到 2.5 mg/ml 時，則 MMP-2 表現量大幅降低(Figure. 10)。

以夏枯草處理 H460(Figure. 11)及 H1299(Figure. 12)時，其結果與 A549 時相近。顯示夏枯草處理對於 MMP-9 與 MMP-2 的表現量都有 抑制的效果，但是夏枯草對於 MMP-2 的影響較對 MMP-9 的影響更 明顯。

5. Invasion assay

實驗分別將細胞株種於以 BME 披覆的 24-well transwell 中。待固 定之後，加入不同濃度的藥物，培養隔夜以觀察細胞分解 BME，侵 入底層的能力是否會因處理而受到影響。

結果顯示，肺癌細胞經夏枯草處理後，侵入 24 孔盤的細胞數明 顯低於未加藥的控制組(Figure. 13)。但是由於實驗次數不夠多，目前 仍未看出任何的顯著差別。

討論

血管新生是維持癌細胞生長以及轉移是一個不可或缺的程序。

MMP-9 與 MMP-2 是細胞降解 ECM 的主要酵素，與血管新生息息相 關。癌症患者體內發現 MMP-9 與 MMP-2 的表現量遠高於正常細胞 (Elena and James, 2006)。本論文的目的便是探討中藥處理的肺癌細 胞，是否能抑制 MMP-2 及 MMP-9 活性，並進一步評估肺癌細胞的

結果顯示，經過鴉膽子與苦參處理後，細胞的 MMP-9 與 MMP-2 活 性與控制組相比沒有變化；但是在以夏枯草處理時細胞時，其活性會 明顯受到抑制，而且其活性會隨藥物濃度增加而降低。三種細胞中，

以 A549 與 H460 的活性下降較顯著。以 10 mg/ml 夏枯草處理 48 小 時，其活性會低於約 20%以下，相對於其它兩種細胞，H1299 對於夏 枯草較不敏感。最高濃度(10 mg/ml)的夏枯草處理 48 小時後，MMP-9 與 MMP-2 的活性仍維持在 20%以上。

接著進行活細胞計數以判斷夏枯草是否會對肺癌細胞具有細胞 毒性。實驗結果顯示，在以各個濃度處理 A549(Figure. 4)、H460(Figure.

5)與 H1299(Figure. 6)三種肺癌細胞後，細胞的存活率並沒有因為藥物

細胞培養液樣品中 MMP-9 以及 MMP-2 的表現，可以由 western blot 辨別夏枯草對於 MMP 活性的影響是否酵素表現。結果顯示經過 夏枯草處理後，A549(Figure. 10)、H460(Figure. 11)及 H1299(Figure. 12) 的細胞培養液樣品中 MMP-9 與 MMP-2 表現隨夏枯草濃度提升而有 不同程度的下降。其中以 H460 最明顯，與 zymograpy 結果附和。

以 invasion assay 觀察細胞的侵入能力是否會受到夏枯草處理的 影響。結果這三種細胞在經過夏枯草處理後穿過 BME 侵入下層的細

討。未來也可以發展動物模式，在活體中驗證夏枯草抑制腫瘤轉移能 力，進一步確認細胞模式的結果。