hst6 突變株所生成的傳統生物膜 (conventional biofilms) 與野生株相似

為了適應不同的環境因子，C. albicans 發展出兩種形式的生物膜：費洛蒙誘 導之生物膜 (pheromone-induced biofilms) 及傳統生物膜 (conventional biofilms)。

兩者在型態結構上十分相似，但卻扮演全然不同的角色。費洛蒙誘導之生物膜對 表現[1]。本實驗室先前研究發現，Hgc1 蛋白質 (Hypha-specific G1 cyclin-related protein) 會同時參與於費洛蒙誘導之生物膜以及傳統生物膜的形成[53]。由先前

2. hst6 突變株之傳統生物膜的 TEC1 及 NDT80 基因表現並未產生改變

先前實驗結果發現，hst6 突變株形成的傳統生物膜之乾重與野生株相比沒 有顯著差異，且皆能於矽膠片上產生完整的生物膜，顯示 Hst6 運輸蛋白質可能 並不參與在傳統生物膜的生成。由研究指出，傳統生物膜主要受到六個轉錄因子 (Bcr1、Brg1、Efg1、Rob1、Ndt80 及 Tec1) 構成的轉錄網絡所調控，只要缺乏 其中任一個轉錄因子，皆無法形成完整的生物膜[65]。本研究欲藉由 qRT-PCR 觀 測野生株及 hst6 突變株於傳統生物膜培養條件下，NDT80 及 TEC1 基因表現 是否出現差異。實驗直接以 12 孔盤作為生物膜的附著平台，將定量菌液加入 Spider 培養液，於 37°C、125 rpm 震盪培養 24 小時後，收集細胞並萃取 RNA，

反轉錄為互補 DNA (cDNA)，再以 qRT-PCR 分析菌株的 TEC1 及 NDT80 基 因表現程度。本實驗先以 ACT1 基因作為內部校正點 (internal control)，去除各 樣品之間非實驗所產生的差異。而後將野生株的基因表現值設為實驗基準點，與 hst6 突變株進行比較後，即可知 TEC1 及 NDT80 基因表現是否發生改變。實 驗結果如圖九，hst6 突變株不論是 TEC1 或是 NDT80 的表現程度，皆與野生 株相似，顯示兩菌株的基因表現並無太大差異。因此，由 qRT-PCR 的分析結果 可再次驗證， Hst6 運輸蛋白質並不會影響傳統生物膜之形成。

肆、探討 Hst6 運輸蛋白質與 white-opaque 型態轉換之關係

hst6 突變株在 NAG 誘導下，white-opaque 表現型轉換受到抑制

環境之中有許多外在因子會影響 C. albicans 的 white-opaque 型態轉換，過去 研究指出 NAG (N-Acetylglucosamine) 會促使野生型菌株的 white 細胞轉變為 opaque 細胞[30-31]。以 NAG 培養基進行型態轉換測試時，意外發現 hst6 突變株 的 white-opaque 轉換率大幅下降。實驗分別將 MTLa/a 的 hst6 突變株、hst6 互補 株及野生株之 white 細胞均勻塗盤於含有 Phloxine B 染劑的 Lee's NAG 培養基，

於 25 °C 培養 4-5 天後，利用統計分析得到菌株的 white-opaque 型態轉換比率，

其中僅有 opaque 細胞所形成的菌落會被 Phloxine B 染成粉紅色。實驗至少獨立 操作三重複，而每片培養基上皆約有 200 顆細胞，統計所得的轉換率平均值及標 準差如圖十。野生株於 NAG 誘導下，菌株的 white-opaque 型態轉換率為 34.34 ± 20.16% 。而 hst6 互補株的轉換率與野生株相近，約為 41.88 ± 14.69% 。但 hst6 突變株僅有 1% 至 5% 的轉換率，與野生株相比明顯下降 (圖十) 。由結果得 知，hst6 突變株於 NAG 誘導時 white-opaque 型態轉換率比野生株低，表示其型 態轉換受到抑制。

伍、探討 Hst6 運輸蛋白質的調節作用與菌株專一性之關係