含中草藥化妝品之製劑研究; The Preformulation Study of Chinese Herbal Cosmeceutics
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(2) 分的量最高，其次是根部 5。 在最近的研究，發現紅景天有抗缺氧、抗疲勞 6、抗腫瘤 7、 抗病毒 8、抗老化、抗氧化及抗輻射 9 的作用，對身體有雙向調節 作用。. 1-2-2. 紅景天用藥歷史 紅景天，素有“高原人參”和“雪山仙草”之稱，為民間治病和補 品，高原藏族人應用較廣 10。其根莖熬水、泡酒可消除疲勞，抵 禦嚴寒。清康熙時，紅景天作為貢品，康熙賜名“仙賜草”，軍隊用 於抗疲勞、增體力、健身益神、增強戰鬥力. 4， 11. 。. 對於古今紅景天於醫書上的記載及發展情形:. 1.唐代: 漢醫僧悟慎和藏維洛劄那的《月王藥診》11 記載紅景天 “性平，扶正固本、理氣養血、潤肺補腎、健腦益智、滋 補強身之功效。其後，雲登貢布的著名藏醫經典《四部 醫典》10 中記載紅景天“性涼、清熱、滋補元氣”。稱紅 景天對治病具有神效。 2. 明代: 李時珍《本草綱目》10 草部第二十卷中，指出紅景天 為“草本上品”。功效為扶正固本、補氣養血、清熱潤肺。 3. 清代: 丹增彭措的《晶珠本草》12 雲: “索羅瑪寶生長在高山、. 2.
(3) 石山、草地、水邊等。無論生長於何處，莖均為紅色， 根色如人肺；皮厚，氣味大，莖多數，紅色，較硬，全 莖被葉。葉厚，簇生，有銀色露狀物。秋天葉、花、果 實及種子皆紅，粗糙，尖端截形”。 功效為補肺氣、治 肺熱。 4. 現代: 蘇聯於 1960 年代開始紅景天的研究 10。近年來，發 現紅景天具有與人參、刺五加類似的“適應原樣” (Adoptogen)作用 3，而且在某方面更優於前兩種藥物， 如人參興奮作用過強，刺五加會引起便秘，均不宜久 服，而紅景天則無上述副作用 盧希賢等人. 14. 13. 。. 以採自長白山地區的高山紅景天所作之. 研究顯示，中國高山紅景天的紅景天? 與? 元，與國外 發現的一致。 大陸衛生部 1995 年所編著《藏藥》4 第一冊記載，紅景 天用於治療高原適應不全症、噁心、嘔吐、嘴唇和手心 發紫、全身無力、胸悶、難於透氣、身體虛弱等症。人 們對紅景天的認識也不斷加深、越受重視。. 1-2-3. 紅景天品種分類及產地分佈 紅景天主要分佈在北半球高寒地帶，在中國主要分佈在東 3.
(4) 北、華北、西北及西南等區，多數生長在海拔 1500-4000 米的高 山地區，種類雖多，但作為藥用只有高山紅景天、薔薇紅景天、 小叢紅景天、狹葉紅景天等數種，以高山紅景天、薔薇紅景天藥 用價值較高. 15. 。以下為各藥用紅景天之簡介:. 1. 薔薇紅景天 (玫瑰紅景天)16-18 (1). 學名: Rhodiola rosea L. (2). 植物形態: 多年生草本。莖粗壯，直立。主軸粗短，有 鱗片。花莖長 20-30 釐米。葉疏生，橢圓形、橢圓狀卵 形、倒披針形至矩圓形，長 7-35 毫米，寬 5-15 毫米，頂 端急尖或漸尖，全緣或有少數牙齒，無柄。花序傘房狀， 密集多花，寬 3-4 釐米，高 2 釐米，分枝多；雌雄異株； 萼片 4，披針狀條形，長約 1 毫米，頂端鈍，黃綠色；花 瓣 4，黃色或帶綠色，條狀倒披針形至矩圓形，長 3 毫米， 頂端鈍；雄花中雄蕊較花瓣為長，花藥黃色；鱗片矩圓形， 長 1-1.5 毫米；心皮 4。蓇葖 4，披針形，長 6-8 毫米。 (見 圖一、圖二) (3). 分佈與生境: 分佈在北歐、前蘇聯、蒙古、朝鮮及日本； 中國分部在西藏、新疆、晉、冀、遼寧、吉林等 1700-2200 米的高山草地、砂石地、疏林下或溝邊。 4.
(5) 2. 高山紅景天 (庫頁紅景天) 17 (1). 學名: Rhodiola sachalinensis A. Bor. (2). 植物形態: 多年生草本。主軸短粗，頂部直徑 3-15 釐 米，先端被多數棕褐色膜質鱗片狀葉。根莖頂部多分枝， 單個根莖長 1-4 釐米，粗 1-2 釐米，根莖頂端常見多數圓 形、半圓形花莖殘跡。根粗壯，通常直立，不分枝，高 10-30 釐米，單株花莖 20-70 個，多者 300 餘個。花莖 下部的葉較小，疏生，葉片圓形或長圓形，上部葉部較? ， 互生，葉部呈長圓狀匙形、長圓狀菱形或長圓狀披針形， 長 2-4.5 釐米，寬 0.4-1.3 釐米，基部楔行，末端急尖或 漸尖，上部邊緣具粗齒狀，下部近全緣。聚傘花序頂生， 密集多花，寬 1.5-3.0 釐米，下部托以葉，總花梗 4-6 釐 米，花梗長 0.3-0.6 釐米。雌雄異株，雄株較多；萼片 4 (稀 5)，淡黃色或黃綠色，線狀倒披針形或長圓形，長 0.4-0.6 釐米，末端鈍；雄花中雄蕊 8，較花瓣長，4 枚著生花瓣 基部，花藥黃色，具 3-4 個退化心皮，多數不發育，少數 發育成果實；雌花中心皮 4 (稀 5)，長圓形，長約 1 毫米， 橘黃色，先端微缺。蓇葖果披針形，直立，長 0.6-0.8 釐 米，果實成熟前紫色或紫褐色，成熟後棕色或棕褐色；種 5.
(6) 子長圓形至披針形，長約 2 毫米，棕色或淡棕色。 (見圖 三、圖四) (3). 分佈與生境: 主要分部在遼北的吉林省長白山區，少數 分部在黑龍江省，內蒙古也有少數分部。一般生長在海拔 1700-2300 米的高山頂部岳樺林帶及碎石山坡、石塘內、 天池內壁、岩石縫及灌叢中。. 3. 狹葉紅景天 (大株紅景天)16， 17 (1). 學名: Rhodiola kirilowii (Regel) Maxim. (2). 植物形態: 多年生草本。根粗狀，直立。主軸短，直徑 1.5 厘米，頂端有鱗片；花莖 1-2，高 40-50 釐米，粗 4-5 毫米。葉互生，無柄，條行至條狀披針形，長 4-6 釐米， 寬 2-5 毫米，頂端急尖，邊緣有疏鋸齒，或幾為全緣。花 序傘房狀，多花，寬 7-10 釐米；雌雄異株，花一般為 5 基數的，少有 4 基數的；萼片 4-5，條形，長 2-2.5 毫米； 花瓣 4-5，綠黃色，條狀倒披針形，長約 3-4 毫米；雄花 的雄蕊 8-10，與花瓣等長或稍超出，花藥黃色；鱗片矩 圓形；心皮 4-5，直立。 (見圖五) (3). 分佈與生境: 分佈自滇、蜀、新疆、冀；緬甸也有。生 長於海拔 2000-4000 米山地多石坡上。 6.
(7) 圖一 薔薇紅景天雄株. 17. 圖二 薔薇紅景天雌株. 17. 圖三 高山紅景天雄株. 17. 圖四 高山紅景天雌株. 17. 7.
(8) 4. 小叢紅景天 (鳳尾草)16， 17 (1). 學名: Rhodiola dumulosa (Frod) S. H. Fu (2). 植物形態: 多年生草本。主軸粗狀，分枝，地上部分常 有殘存的老枝。一年生花莖聚生在主軸頂端，長 10-24 釐米。葉互生，條形至寬條形，長 7-10 毫米，寬 1-2 毫 米，頂端急尖，基部無柄，全緣。花序頂生；花兩性，雌 雄異株；萼片 5，條狀披針形，長約 4 毫米，寬不及 1 毫 米，頂端漸尖，基部最寬；花瓣 5，紅色或白色，披針狀 矩圓形，直立，長 8-11 毫米，頂端漸尖，有長的短尖頭； 雄蕊 10，較花瓣為短，花藥? 後棕紫色；鱗片扁長；心 皮 5，卵狀矩圓形，長 6-10 毫米。蓇葖內有種子少數。 (見 圖六) (3). 分佈與生境: 分佈在蜀、甘肅、陜西、晉、冀。生長在 海拔 1600-3000 米高山頂部的山、山梁的岩石下或山脊 處的向陽岩石縫中。. 5. 巠地紅景天 (全瓣紅景天)17， 19 (1). 學名: Rhodiola saca (Prain ex Hamet) S. H. Fu (2). 植物形態: 多年生草本。根莖肥後，外被多數窄披針形 或寬線形鱗片，黑褐色，長約 1 釐米。一年生莖 3-5，圓 8.
(9) 柱狀，高約 30 釐米，無毛，下部無葉，中、上部具多數 葉片。葉線形，長約 2 釐米，無柄，光滑，邊緣微具齒， 腹面深綠色，背面黃綠色。花序頂生，近傘房狀，外被葉 狀苞片，花黃綠色，長 1.2 釐米，具梗；萼線狀錐形，黃 褐色，長約 8 毫米；花瓣黃綠色，長約 1 釐米，窄披針 形，具 3 脈，有少數支脈，全緣，先端鈍尖；雄蕊著生 於花瓣基部，對萼的較短，對花瓣的較長，花藥卵形，小， 褐色；線體矩形，小，黑褐色；紫房直立。果實近矩形， 有直立細長的啄，長約 8 毫米；種子多數，扁平，未成 熟時黃綠色。花果期 7-8 月。 (見圖七) (3). 分佈與生境: 分佈於滇省西北部及西藏。生長於海拔 2700-4700 米的山坡岩石縫中、礫石中、山坡草地。. 6. 大花紅景天 (圓齒紅景天)17 (1). 學名: Rhodiola crenulata (Hk. f. et Thoms.) H. Ohba (2). 植物形態: 多年生草本。地上主軸短。殘存花枝莖少數， 高 5-20 釐米，黑色。不育枝直立，高 5-17 釐米，先端密 著葉，葉片呈倒卵圓形，長 1-3 釐米。花莖多，直立或扇 狀排列，高 5-20 釐米，鮮時呈稻桿色至紅色。葉有短的 假柄，橢圓狀圓形至近似圓形，長 1.2-3 釐米，寬 1.0-2.2 9.
(10) 釐米，先端鈍或有尖端，全緣或波狀或有圓齒。花序傘房 狀，有多花，長 2 釐米，寬 2-3 釐米，有苞片；花大形， 有長梗，5 基數；雌雄異株；雄花萼片 5，狹三角形至披 針形，長 2-2.5 毫米；花瓣 5，倒披針形，紅色，長 6-7.5 毫米，寬 1-1.5 毫米，有長爪，先端鈍；雄蕊 10 個，與 花瓣等長或稍長；鱗片 5，近正方形至長方形，長約 1 毫 米，寬 0.5-0.8 毫米，先端有微缺；心皮 5，披針形，長 3-3.5 毫米，不育；雌花蓇葖 5，直立，長 8-10 毫米，花 柱短，乾後紅色；種子倒卵形，長 1.5-2 毫米，兩端有翅。 花期 6-7 月，果期 7-8 月。 (見圖八) (3). 分佈與生境: 主要分佈在滇省西北部、蜀省西部及西北 部、以及西藏。一般多生長在海拔 2800-5600 米的山坡 草地、灌叢及石縫中。. 10.
(11) 圖五 狹葉紅景天外觀. 圖七 巠地紅景天. 17. 圖六 狹葉紅景天外觀. 17. 圖八 大花紅景天. 11. 19. 17.
(12) 除了以上所述之紅景天外，在中國境內還有幾種常見的紅景天品 種 (表一):. 表一 紅景天主要種類之中文名、學名及產地分佈表 中文名 唐古特紅景 天. 學名. 20. 產地分佈. Rhodiola algida (Ledeb.) Fisch. 蜀、甘、遼寧、 et Mey.var. tangutica (Maxim.) S.H.Fu 青海. 西川紅景天. R.alsia (Frod.) S.H. Fu. 蜀. 互生紅景天. R. alterna S. H. Fu. 西藏東北部. 長白紅景天. R.angusta Nakai. 吉林、黑龍江. 大苞紅景天. R.aporontica (Frod.) S.H.Fu. 四川道孚. 德欽紅景天. R.atuntsuensis (Praeg.) S. H. Fu R.brevipetiolata (Frod.)S.H.Fu. 四川德欽. 短柄紅景天. 蜀西. R.bupleuroides (Wall. ex 西藏、蜀、滇 HK.f.et Thoms.) S.H. Fu R.calliantha (H. Ohba) H. Ohba 美花紅紫天 西藏 柴胡紅景天. 菊葉紅景天 優美紅景天. R. chrysanthemifolia (Levl.) S.H.Fu R. concinna (Praeg.) S.H.Fu. 滇、蜀 滇麗江玉龍山. R. crenulata (HK. f. et Thoms.) 西藏、蜀、滇 H. Ohba R.cretinii (Hamet) H. Ohba ssp. 根出紅景天 西藏 cretinii 大花紅景天. 12.
(13) R.cretinii (Hamet) H. ohba ssp. sino-alpina R.dielsiana (Limpr.f.)S.H. Fu. 滇西北部. 異色紅景天. R.discolor (Franch.) S.H. Fu. 西藏、蜀、滇. 小叢紅景天. R.dumulosa (Franch.) S. H. Fu. 陜、甘、青、蜀、. 高山紅景天 川西紅景天. 蜀西. 鄂、晉、冀、內 蒙、吉林 寬果紅景天. R.eurycarpa (Frod.) S. H. Fu. 長鞭紅景天. R.fastigiata (HK.f. et Thoms.) 滇、西藏、蜀 S.H. Fu. 陜、甘、青、蜀. 長圓紅景天. R. forrestii (Hamet) S. H. Fu. 滇、蜀. 長鱗紅景天. R. gelida Schrenk. 新疆. 菱葉紅景天. R. henryi (Diels) S. H. Fu. 蜀、甘、陜、豫、 鄂. 異齒紅景天 喜馬紅景天. R.heterodonta (HK.f. et Thoms.) S.H.Fu R.himalensis (D. Don)S.h.Fu. 西藏、新疆 西藏、蜀、滇. 背藥紅景天. R.hobsonii (Prain ex Hamet) S. H. Fu. 西藏. 矮生紅景天. R. humilis (HK. f. et Thoms.). 西藏. 圓叢紅景天. R.juparensis (Frod.) S. H. Fu. 青、甘. 13.
(14) 喀什紅景天. R.kaschgarica A.Bor. 新疆. 狹葉紅景天. R. kirilowii (Regel.) Maxim.. 藏、陜、甘、青、 蜀、雲、晉、冀、 新疆. R. kirilowii (Regel) Maxim. var. latifolia S. H. Fu. 雲南麗江. 崑明紅景天. R. liciae (Hamet) S. H. Fu. 雲南昆明西山. 麗江紅景天. R.likiangensis (Frod.) S. H. Fu. 滇. 條葉紅景天. R.linearifolia A.Bor. 新疆. 黃萼紅景天. R.litwinowii A. Bor. 新疆托木爾. 大果紅景天. R.macrocarpa (Praeg.) S. H. Fu. 西藏、滇. 大鱗紅景天. R.macrolepis (Franch.)S. H. Fu. 蜀西. 優秀紅景天. R.nobilis (Franch.) S. H. Fu. 滇. 線萼紅景天. R. ovatisepala (Hamet) S. H. Fu var.chingii S. H. Fu. 西藏、滇. 卵萼紅景天. R. ovatisepala (Hamet) S. H. Fu var. ovatisepala. 西藏. 寬狹葉紅景 天. 14.
(15) 帕米紅景天. R.pamiro-alaica A. Bor. 新疆托木爾峰. 腫果紅景天. R.papillocarpa (Frod.) S. H. Fu. 雲南中甸. 有柄紅景天. R. petiolata (Frod.) S. H. Fu. 西藏. 羽裂紅景天. R. pinnatifida A.Bor. 新疆阿爾泰. 四輪紅景天. R. prainii (Hamet) S. H. Fu. 西藏. 報春紅景天. R. primuloides (Franch.) S.H.Fu ssp.kongboensis. 滇、蜀. 工布紅景天. R. primuloides (Franch.) S.H.Fu ssp.Primuloides. 西藏. 紫綠紅景天. R. purpureoviridis (Praeg.) S. H. Fu. 滇、蜀. 四裂紅景天. R. quadrifida (Pall.) Fisch. et 藏、蜀、甘、青、 Mey 新疆. 壯健紅景天. R. robusta (Praeg.) S.H.Fu. 滇西北部. 薔薇紅景天. R.rosea L.. 新疆、晉、冀. 小葉紅景天. R. rosea L.var. microphylla (Frod.) S.H.Fu R. rotundifolte (Frod.) S. H. Fu. 甘肅. 圓葉紅景天. 15. 雲南麗江.
(16) 庫頁紅景天. R. sachalinensis A.Bor. R. scara (Prain ex Hamet) S. H. Fu R. scara S. H. Fu var. tsuiana 長毛巠地紅 S. H. Fu. 巠地紅景天. 吉林、黑龍江. 西藏、滇 西藏. 景天 粗糙紅景天. R.scabrida (Franch.) S. H. Fu. 蜀、滇西北部. 柱花紅景天. R. semenovii (Regel et Herd.) A. Bor R. serrata H. Ohba. 新疆. 六葉紅景天. R. sexifolia S. H. Fu. 西藏. 裂葉紅景天. R. sinuata (Royle ex Edgew.) S. H. Fu R. smithii (Hamet) S. H. Fu. 西藏、滇. R. stapfii (Hamet) S. H. Fu. 西藏. 齒葉紅景天. 異鱗紅景天 托花紅景天. R. stephanii (Cham.)Trantv. et Mey. R. subopposita (Maxim.) 對葉紅景天 Jacobsen R. taohoensis S. H. Fu 洮河紅景天 興安紅景天. 西藏紅景天 粗莖紅景天 巴塘紅景天. 西藏. 西藏. 內蒙呼盟 青海大通河 甘肅臨潭. R. tibetica (HK.f.et Thoms) S. H. Fu R. tieghemii (Hamet) S. H. Fu. 西藏西南部. R. wallichiana (HK.) S. H. Fu. 西藏、滇. 16. 蜀西巴塘.
(17) 大株粗莖紅. R. wallichiana (HK) S. H. Fu var. cholaensis. 滇西北部. 景天 滇紅景天. R. yunnanensis (Franch.) S. H. 藏、蜀、雲、貴、 Fu 鄂. 17.
(18) 1-2-4. 紅景天之化學成分 紅景天的化學成分研究，目前已分離出 40 多種化合物 8，13，17， 21-23. ，分成以下幾大類:. 1. 醇及其? 類: 酪醇 (p-tyrosol)、紅景天? (salidroside)、pharienside、 crenulatin、rosin、6-O-galloyl-salidroside、肉桂醇 (trans-cinnamic alcohol.)、rosavin、rozarin、rosiridin 及 isopentenyl-3-O-ß-D-glucopyranoside。 2. 黃酮類: rhodalgin、acetylrodalgin、diacetylrodalgin、anthocyan、 triacetylrodalgin、alginin、rodalginin、queretin、kaempferol、 rodiolin、rodionin、rodiosin 及 tricin。 3. 酚及其? 類: 1，2，3，4，6-penta-O-galloyl-ß-D-glucopyranoser、gallic acid 及熊果?. (arbutin)。. 4. 生氰? 類: rodiocyanoside A 及 rodiocyanoside B。 5. 內酯類: alginoside 及 bergenin。 18.
(19) 6. ? 類、固醇類: ducosterol、ß-sitosterol、rosiridol 及 rosaridin。 7. 糖類: 蔗糖 (sucrose)、麥芽糖 (maltose)及 3-D-altrofuranoheptulose。 8. 有機酸類： ferulic acid、caffeic acid、succinic acid 等。以及一些無機 元素 (Al、Si、Mn、Ba、V、Cu、Cr)、氨基酸、蛋白質類、 脂肪酸類. 14. 。. 而近年來，紅景天? (salidroside)及酪醇 (p-tyrosol)，經過藥 理研究，證明是有生理功能的有效成分. 12. 。 (結構式圖九所示). 1-2-5. 紅景天之藥理作用 1. 耐缺氧作用: (1). 動物試驗: 以紅景天乙醇提取物 0.3 g/kg 灌胃給藥，可顯著提高小 鼠抗窒息性缺氧力，在減壓缺氧的環境下，增加小鼠存活 率. 11， 24. 。. (2). 臨床試驗: 在模擬海拔 4300m 高度，紅景天水提取物可以顯著提高 19.
(20) 人體的無氧閥，降低心率，增強人體低氧勞動能力。紅景 天之紅景天? (salidroside)對缺氧後，給氧造成的心肌損 傷具有保護作用，主要作用機制在於維持心肌細胞膜的安 定性與完整性，使心肌細胞的博動功能維持正常. 21. 。. 2. 抗疲勞作用: (1). 動物試驗: 處於緊張的環境下，注射紅景天素 0.1ml/20g 後可觀察到 興奮作用 13。小鼠抓桿及負重抓桿試驗時，使用紅景天製 劑的試驗組均能明顯增加持續時間，而負荷游泳耐力尤為 顯著. 11， 24. 。. (2). 臨床試驗: 張等人 25，對 30 名運動員作試驗，發現紅景天乙醇提取 物可提高運動員體能及恢復疲勞。而 Shevtsov 等人 6 對 19 到 21 歲的 161 位受試者作試驗，發現紅景天有明顯 抗疲勞功能。 3. 對肝臟作用: 在使用四氯化碳 (CCl4)誘導大白鼠肝損傷後，口服紅景天水 提取液，可使肝損傷獲得回復 26。Laremii 等人 27 在有肝毒 性老鼠上實驗，發現紅景天水提取物具有保護肝的作用。. 20.
(21) 4. 對中樞神經系統的作用: 紅景天製劑有類似人參對大腦和脊髓的興奮作用，也有一定 的鎮靜作用。錢錦康 28 以中樞神經介質的變化對紅景天屬植 物的作用機理進行探討，發現紅景天能使在游泳條件下，小 鼠之 5-羥色胺 (5-HT)含量正常化，即使已偏離正常水平的 中樞神經系統介質含量，得到糾正或達到正常水平，這是機 體整體功能健全和提高對不利因素耐力的重要條件。對學 習、思考的效率與注意力集中有顯著提高。Pogorelyi.29 證 實紅景天水提取物對腦循環有幫助。 5. 對心臟作用: Maimeskulova30 利用 adrenaline 和氯化鈣誘導老鼠發生心 律不整的狀況下，使用紅景天水提取物 (1 ml/kg； ED50= 0.43 ml/kg) 比 n-tyrosol (16 mg/kg) 較有抗心律不整的作 用；並在後來證實紅景天提取物，可作用於心肌受損老鼠的 opiate 受體上，達到抗心律不整的效果. 31,32. 。. 6. 抑制血糖升高作用: 多糖是紅景天降血糖作用的有效成分，多途徑給藥證明，經 胃腸吸收不能發揮降血糖作用，但經肌肉、腹腔及靜脈注射 均可產生明顯的降血糖作用 7，對血糖水準之正常化有效 33。. 21.
(22) 7. 抗微波輻射作用: 小鼠受微波輻射後，體內單胺類傳遞物質、脾臟及胸腺內之 環磷酸腺?. (cAMP)、淋巴細胞轉換率、血清溶血素等所出. 現之抑制性變化，使用合成紅景天?. (salidroside)可恢復正. 常，具有扶正作用 13, 28。鄭等人 34 也指出在小鼠經過 Gamma 射線照射後，服用紅景天乙醇提取物的小鼠，存活率及對白 血球細胞的保護都較高。 8. 輔助抑制腫瘤: 動物試驗發現，紅景天可以抑制抗癌藥如 rubomycin、 adriamycin、cyclophosphamide 的毒性，並可增加抗癌的 效果 18，而且對於在被移植 NK/LY 腫瘤細胞、Ehrlich 腺癌、 黑色素瘤 B16 及 Lewis 肺癌的小鼠身上發現，紅景天製劑 與抗腫瘤藥 (sarcolysin)並用，可延長小鼠生存期限. 35. 。. 9. 抗衰老及抗氧化作用: 根據 Harman 的理論認為衰老是自由基引起的副作用。紅景 天可有效清除自由基，達到抗衰老作用 21。紅景天含有豐富 的酚類化合物有很強的抗氧化作用. 18. 。. (1). 體外試驗: 大杉等人從 70 個傳統草藥，利用電子自旋共振 (Electron. 22.
(23) Spin Resonance，ESR)來評估具有清除活性氧的天然 物，結果顯示紅景天水或甲醇之提取物有強清除超氧自由 基的能力. 36. (2). 動物試驗. 。. 7, 21, 28. :. 體外培養人胚肺二倍體成纖維細胞 (2BS)和大鼠肝臟的 實驗研究證明，紅景天水提取物有促進 2BS 細胞生長增 殖和降低細胞死亡率的作用，阻抑肝細胞內脂褐素 (lipofuscin)的形成和降低酸性磷酸? 活性；抑制大鼠肝細 胞脂質過氧化物 (lipid peroxides，LPO)形成和增強血清 超氧歧化?. (SOD)的活性。. (3). 臨床試驗: 1994 年武等人 9 發現研製之”紅景天人參製劑”，有明顯的 抗老化效果。用藥組:25∼39 歲 35 例，40∼65 歲 30 例， 觀察用藥時間 3∼6 個月不等。用藥後，皮膚表面光滑、 濕潤、有彈性、細小皺紋消退、皮溝皮丘展平、膚澤潤白、 皮膚外觀變化與原皮膚基礎狀態和用藥時間成正比。 Wing 等人. 37. 於 15 名受試者 (年紀 20-33 歲)，在模擬海. 拔 4600 米狀況下進行氧化逆境 (oxidative stress)的實 驗，結果發現經紅景天治療組，血中的 LPO 有下降的趨 23.
(24) 勢，顯示有清除自由基的現象。. 1-2-6. 紅景天之毒性試驗. 17,18,21. 1. 小鼠皮下注射紅景天? LD50 ? 28.6 ml/kg，相當於 3360 mg/kg。 2. 小鼠靜脈注射紅景天? ，LD50 ? 1130±23 mg/kg。 3. 臨床用量為 200-600 mg/day，安全範圍寬廣。 4. 紅景天水提取物經 Ames 試驗，無致突變性。體外染色體畸 變試驗，無致畸作用。. 1-3. 欖仁 樹 之介紹 1-3-1. 欖仁樹簡介 欖仁樹 (Terminalia catappa L.)為使君子科 (Combretaceae) 植物。別名為枇杷樹、古巴梯斯 38。在藥用植物學上，其樹皮可 用來止痢、治腫毒；而葉可用來治皮病 39。民間用藥上，葉及果 可用於去熱、止血和治療肝病有效. 40. 1-3-2. 欖仁樹之外觀形態及產地分佈 1. 學名: Terminalia catappa Linn 2. 植物形態: 24. 。. 16， 38.
(25) 落葉性或半落葉性喬木。葉叢生枝頭，短柄，內側具溝，偶 具蜜槽 1 對。葉柄及中肋偶被毛，其他光滑無毛，葉片倒卵 形，長 15-25 厘米，基部漸狹，先端鈍或近圓形，全緣。穗 狀花序，腋生，雄蕊在上方，雌花或兩性花在下方。萼鐘狀， 內部密生長毛，5 齒緣，早落性，無花瓣，雄蕊 10 枚，2 列。子房下位，1 室，胚珠 2-3 粒。核果扁平狀橢圓形，長 5-6 厘米，寬 4 厘米，周圍呈龍骨狀突起，果皮纖維質，中 果 1 室，常藉海水漂浮播佈。4-5 月間開花。 (圖十) 3. 分佈與生境: 印度、馬來西亞、菲律賓、太平洋諸島原產。今廣東、琉球、 日本皆有分佈。台灣於恆春半島、蘭嶼自生，今在各平地庭 園處、風景區及行道木栽培。. 1-3-3. 欖仁葉之化學成分 欖仁葉的成分已報導者有. 40， 41. punicalin、punicalagin、. chebulagic、geraniin、terflavins A、terflavins B、tercatein、 squalene 等。其中 punicalin 及 punicalagin 藥理上的研究較多。. 1-3-4 欖仁葉藥理作用 1. 保肝作用: 25.
(26) 除民間使用欖仁葉水煎劑來治療肝病之外，最近的林等人 42 研究發現，欖仁葉的成分 punicalin 及 punicalagin，試驗對 使用 acetaminophen 來誘導肝受損的大白鼠，有抗肝毒性 的作用，但在大劑量下，則會增加肝臟受損。 2. 抗菌作用: Goun.等人 43 研究欖仁葉甲醇提取物，發現有抗細菌及抗霉 菌作用。Fusae 等人. 44. 研究發現，它具有抗 MRSA. (methicillin-resistant S. aureus)的作用，而且效果比 cloxacillin、cefazoline、erythromycin 及 gentamicinc 還好， 但比 vancomycin 差。 3. 抗糖尿病作用: 欖仁樹果的水、甲醇及石油醚提取物，對於降低糖尿病鼠的 血糖有功效. 45. 。. 4. 抗遺傳毒性: 欖仁葉水提取物，in vitro 及 in vivo 研究可抑制 mitomycin C 所誘發的細胞毒性. 46. 。. 5. 抗發炎作用: 欖仁葉中成分 punicalin 及 punicalagin 具有抗發炎作用，但 如果 punicalin 劑量太大，反而會造成一些細胞毒性. 26. 47. 。.
(27) CH2OH. CH2CH2OH. O OCH2CH2 OH OH. OH. H. HO. OH. p-tyrosol salidroside. 圖九 紅景天?. (salidroside)及酪醇 (p-tyrosol)之結構式. 圖十 欖仁樹外觀. 38. 27.
(28) 6. 抗氧化作用: 欖仁葉中具有很好的抗氧化力成分. 40,42,48. ，例如: ellagic. acid、punicalin、squalene、punicalagin 等可以避免自由基 對於組織機體的傷害。. 1-4. 皮膚與乳霜 1-4-1. 皮膚組織結構及生理功能 皮膚包覆身體，防止外來的刺激、傷害或乾燥等因素，而發 揮保護人體 49，順應周遭環境的變化 50。65 公斤的成人，全身皮 膚面積大約是 1.8 平方公尺 51。皮膚主要分為表皮、真皮和皮下組 織三大結構。. 1. 皮膚的組織結構. 49-53. :. (1). 表皮 (Epidermis): 位於皮膚的淺層，由角質化的複層鱗狀上皮構成。表皮的厚 度一般為 0.07-0.12 mm，手掌、足底最厚。而從基底到表 面可分為五層: a. 基底層 (Stratum basale): 位於表皮的最深層，藉基膜與真皮相連，基底層是一層柱 28.
(29) 狀細胞，胞質中常含有黑色素顆粒。黑色素顆粒是由體內 溶? 體分解後的產物，為殘質體在此類細胞中形成的一種 色素。基底層沒有血管，但有營養物質，抗體及白血球可 經基底膜 (basal membrane)進入表皮，進行物質交換及發 炎反應。. b. 棘細胞層 (Stratum spinosum): 位於基底層淺部，一般有 4-10 層，由基底細胞分化而來， 細胞呈多邊形，在向淺層推移，細胞漸變扁平，伸出許多 細短的棘狀突起，故稱為棘細胞。棘細胞亦有分裂能力， 參與創傷癒合。 c. 顆粒層 (Stratum granulosum): 位於棘細胞層上面，顆粒層是由 2-3 層扁平細胞所組成， 是進一步向角質層分化的細胞。顆粒層細胞含透明角質 (keratohyaline)。 d. 透明層 (Stratum lucidum): 在厚的表皮內，特別是手掌和足底，此層較明顯，位於顆 粒層的淺面，由透明嗜酸性無核扁平細胞所組成。 e. 角質層 (Stratum corneum): 位於表皮的最淺層，由幾層或幾十層扁平無核的角質細胞 29.
(30) 組成。細胞互相交錯、重疊，成平板狀，形成一個完整的 半通透膜，其深層的細胞互相緊密連接，最表面的細胞彼 此連接不牢，逐漸脫落，形成皮屑。而深層細胞不斷分化 增生予以補充，使角質層為持一定的厚度，角質層具有耐 摩擦、阻擋外物入侵的功用。 (2). 真皮 (Dermis): 位於表皮的深面，主要由纖維母細胞及其產生的膠原纖維、 彈力纖維、網狀纖維及基質組成。真皮組織的膠原是血管、 淋巴管、神經、皮膚附屬器的支架，是皮膚代謝和物質交換 的場地。真皮分為兩層，上部為較薄的乳頭層 (papillary)， 下部為較厚的網狀層 (reticular layer)。真皮乳頭層與表皮突 互相交錯，表皮也藉助於真皮內，緻密結締組織使皮膚具有 舒展性和平整度。若結締組織中膠原纖維和彈力纖維退化， 真皮緻密度、彈性減弱，表現在表皮的舒展性和平整性的相 應減退，就會出現皮膚的皺紋。 (3). 皮下組織 (Hypodermis): 在真皮下方，又稱皮下脂肪層，有汗腺、毛根。其結締組織 為真皮下部延續而來，但較疏鬆。皮下組織深部與筋膜、腱 膜或骨膜相連續。而皮下脂肪層的厚度因性別、營養狀態及. 30.
(31) 身體部位的不同而異。 2. 皮膚生理功能. 50-53. :. (1). 保護作用: 皮膚最外層的角質層與體表脂質，能避免水分過度滲入或過 度蒸散。皮脂中含有不飽和脂肪酸，具殺菌效果，可抑制皮 膚上細菌生長。真皮的彈性纖維與真皮下方的皮脂組織，具 有緩衝效果，能使外界來的機械力，不直接傷害到身體內 部。另外皮膚具有鹼性中和能，可避免皮膚受到有害的化學 刺激，並將皮膚表面維持在弱酸性。而且表皮上的黑色素可 吸收紫外線，避免人體受到紫外線的傷害。 (2). 體溫調節作用: 皮膚具有調節體溫的功能。當溫度高時，而它是藉由皮膚微 血管的擴張，使流經皮膚血流加快，導致汗液分泌增加，來 達成散熱的；當溫度低時，則皮膚微血管收縮，流經皮膚血 流減慢，汗液分泌減少，使散熱減少。 (3). 感覺作用: 皮膚一般感覺分為壓覺、觸覺、溫覺及痛覺。其中觸覺受器 有麥斯納氏小體 (Meissner’s corpuscle)、美克爾氏盤 (Merkel’s disk)及高基-馬茲尼氏小體 (Golgi-Mazzoni. 31.
(32) corpuscle)；壓覺受器有巴齊尼氏小體 (Pacinia corpuscle)；冷覺受器有克勞澤氏 (Krause’s)小體；溫覺受器有魯 菲尼氏 (Ruffinian)小體；而痛覺與遊離神經末梢有關。 (4). 吸收作用:. 皮膚只要的吸收途徑有三: a. 經角質層細胞膜滲透進入，然後再經表皮其他各層吸收。 b. 少量的不易透過水溶性物質和大分子，可以經毛囊口、毛 囊，再經皮脂腺及毛囊壁進入真皮內而被吸收。 c. 經過表皮細胞間隙吸收。 (5). 再生功能: 皮膚的再生能力強，表皮淺層受傷時，可由傷面附近的正常 皮膚或殘存於深面的生長層細胞，分裂繁殖與以修復。 (6). 其他功能: 皮膚的外觀、狀態會受到情感變動的影響，而產生潮紅、蒼 白及毛髮倒豎等現象。因此皮膚也是一種感情的表達器官。. 1-4-2. 乳霜之應用 乳霜是自古以來的基礎化妝品，每個時代都有其乳化技術、 獨特的製造方法，促成乳霜產品的多樣化. 32. 50. 。.
(33) 1. 乳霜的定義及目的: 乳霜化妝品為半固體之物理性乳化的產品 49。乳霜保持皮膚 水分、柔軟的機能。乳霜使用方便，可視季節、使用者年齡 及生活環境的不同，再配合膚質、化妝習慣的偏好來調整水 分、保濕劑、油分的含量和種類以設計理想的乳霜配方 50。 2. 乳霜之分類: (1). 依使用機能分類. 54. :. a. 柔膚乳霜 (Emollient cream): 使皮膚保濕柔軟。 b. 按摩乳霜 (Massage cream): 促進皮膚血液循環柔軟。 c. 卸妝乳霜 (Cleansing cream): 清潔皮膚、卸妝。 d. 打底乳霜 (Makeup cream): 化妝前打底。 e. 防曬乳霜 (Sun screen cream): 防紫外線。 f. 脫毛霜 (Hair remover): 脫毛。 g. 美髮霜 (Hair cream): 整髮。 h. 除臭霜 (Dedorant cream): 防臭。 i. 刮鬍霜 (Shaving): 刮鬍用。 (2). 依配方之油相比例不同來分類. 50. :. a. O/W 型: 一般乳化劑有高級脂肪酸肥皂、非離子型界面活性劑、 33.
(34) 蛋白質界面活性劑、肥皂與非離子型界面活性劑及蜜蠟 與硼砂與非離子型界面活性劑，代表的產品有雪花霜、 中性面霜、按摩乳霜、卸妝乳霜及柔膚乳霜。 b. W/O 型: 一般乳化劑為非離子型界面活性劑、有機變性黏土礦物 及肥皂與非離子型界面活性劑。代表的產品有柔膚乳 霜、按摩乳霜、卸妝乳霜、柔膚乳霜。 c. 無水油型: 乳化劑為油性凝膠劑，代表的產品有卸妝乳霜。. 1-5 皮膚美白與抗老化. 1-5-1. 美白原理及方法 皮膚的呈色，主要決定於光線與皮膚的關係，以及皮膚本身 的生理特性，影響膚色的因素有: 黑色素 (Melanin)及紫外光光照 射。目前的美白化妝品，皆是針對解決黑色素對皮膚膚色所造成 的問題. 55. 。. 1. 黑色素的種類: 異黑色素 (Allomelanin)、嗜黑色素 (Phaeomelanin)及真黑. 34.
(35) 色 (Eumelanin)。其中異黑色素存在於植物中；而嗜黑色素 及真黑色素則存在皮膚的表皮層，顏色分別為紅色到黃色 (嗜黑色素)以及咖啡色到黑色 (真黑色素)56。 2. 紫外光照射: 一般紫外光依波長可分為 UVC (200-280 nm)、UVB (280-320 nm)及 UVA (320-400 nm)，太陽照射至地球的紫 外線中，UVC 會在大氣圈上層的臭氧層被吸收，所以皮膚 所接受到最短波長的紫外線為 UVB57。 皮膚在經過紫外線照射後，馬上會變黑而呈現出初級黑化的 現象，這是皮膚內呈淡色的黑色素暫時被氧化所造成的，經 過數小時就會復原，此反應是由 UVA 與可見光引起的。而 若過度暴露於 UVB 及 UVA 的環境下，皮膚會產生發炎反 應，有發紅，現象稱為紅斑 (Erythema)或曬斑 (Sunburn)。 當紅斑消退後第三天左右，皮膚才會漸漸變黑，此過程稱二 級黑化，這時黑色素細胞的 功能較為亢進，並產生許多黑 色素，皮膚一旦變黑，大約要數月之久才會復原 3. 美白的方法. 58. 50,58. 。. :. 最好的美白方法是延遲黑色素的形成，有以下幾個途徑:. 35.
(36) (1). 減少曝露於紫外光下。 (2). 降低酪胺酸?. (tyrosinase)的形成。. (3). 降低黑色素細胞 (melanocyte)的作用。 (4). 使用抗氧化劑。 UV 光照射雖然沒有辦法直接促進 tyrosinase m-RNA 的形 成，但會導至維他命 D3 合成，而活化 tyrosinase 及 melanocyte 促進激素，使黑色素生成。所以習慣性的做好防曬措施，降低皮 膚照射 UV 光的時間是必要的。而且 UV 照射也會造成氧化逆境 (oxidative stress)，使皮膚發炎，而增加色素沉澱，可以使用抗氧 化劑來改善。 目前常用的美白有效成分有. 55, 58. :. (1). 麴酸 (Kojic Acid) (2). 熊果?. (Arbutin). (3). 維他命 C (Ascorbic acid) (4). 阿魏之提取物 (Asafetida extract) (5). 胎盤提取物 (Placental extracts) (6). 甘草提取物 (Licorice extracts). 36.
(37) (7). 檸檬酸 (Citric acid) (8). 對苯二酚 (Hydroquinone). 1-5-2. 皮膚老化及抗老化 1. 皮膚老化的現象及原因: 皮膚老化的現象有皮膚鬆弛、光澤度降低、潤滑度降低、張 力降低、紋理變粗、皮溝紊亂、色素沉著斑增加及皮膚變黃 等 50，而最明顯的變化，即是皮膚產生皺紋。皺紋有主皺紋， 比較寬深，深度約 10-100µm 的皺紋，其旁邊會有較狹窄的 皺紋。而皮膚老化又可分為自然老化及光老化: 55. (1). 自然老化. : 是指皮膚的細胞數目減少與厚度變薄的自. 然性機能退化。 (2). 光老化. 59. : 在日光下長期曝露，造成紫外光的傷害。光. 老化所呈現的症狀為看起來比實際年齡還老、皺紋普遍較 細、膚色變黃、皮膚粗糙不平、皮膚乾燥以及出現各種良 性或惡性腫瘤。光老化也會使生理功能異常，如：不均勻 的曬黑、皮膚容易腫脹、皮膚感覺降低、免疫功能降低而 且皮膚受壓後回復正常較慢。. 37.
(38) 2. 抗皮膚老化的化妝品成分. 55,59. :. 為預防及改善老化，皮膚滋潤霜會添加一些抗老化的成分。 (1). 維他命 A 素 (Retinoids): 改善光老化引起的皺紋，但持 續使用可能會出現皮膚過度乾燥、紅腫、皮膚剝落及刺痛 感等副作用。 (2). 荷爾蒙 (Hormones): 如雄激素 (Androgens)或雌激素 (Estrogens)都可改善光老化現象。 (3). 維他命 C 及維他命 E: 可作為抗氧化劑，可預防皮膚受 紫外線及環境污染，所引起的自由基物質對皮膚所造成的 傷害。 (4). 果酸: 如 Alpha-hydroxy acids 或 Beta-hydroxy acid 可 剝落老化的角質，與促進真皮層纖維組織的成長，進而改 善皺紋皮膚。 (5). 其他: 如 Hydroquinones、Apha-interferon、玻尿酸、 天然的軟骨多糖體以及 Minoxidil 等，對於改善老化及光 老化的症狀都有功效。. 38.
(39) 1-6 研究目的 中草藥化妝品是目前化妝品發展的趨勢。國際上已開始流行中草 藥美容方法。且中國醫藥典籍中也不乏有記載有關中草藥美容之文 獻。然而目前中草藥化妝品所面臨的難題是: 1. 中草藥來源及品質不安定。 2. 基原上的鑑定。 3. 有效成分的確定。 4. 明確可靠的臨床試驗結果。 5. FDA 及國內法規的規範。 本研究主要藉中草藥抗氧化的體外功效評估，包 括擬超氧岐化? 試驗及總抗氧化力試驗，篩選具有美容功效潛力的中草藥。並利用高 效液相層析法，來建立指紋圖譜。對具有潛力的中草藥，做動物之皮 膚及眼球刺激試驗，觀察此藥材的刺激性程度。將具有美容潛力的中 草藥，取其指標成分做品管測試，瞭解品質狀況。並加入篩選評估過 的乳霜基劑，製備成中草藥乳霜化妝品，且評估安定性試驗。 利用以上之研究方法，可評估此中草藥乳霜化妝品，將來是否可 當作皮膚美容製劑，以避免超氧自由基及一些氧化性物質對皮膚的傷 害，使皮膚更能達到美白及抗老化的功效。. 39.
(40) 二. 實驗 2-1. 材料與試藥. 2-1-1. 實驗藥材 美白與抗氧化之體外評估試驗，選用實驗植物材料共 17 種， 包含生毛將軍、台灣黃柏、台灣葛根、紅子莢? 、呂宋莢? 、旱 蓮草、台灣醉魂藤、黑星紫金牛由製藥工業技術發展中心提供。 欖仁葉、桑葉、石蓮等，購自漢強百草店。香菇、柚購自五權市 場。靈芝購自雙鶴企業有限公司。葡萄籽購自加拿大 Organika 公 司。綠藻購自美國 Vitamin-Provider 公司。紅景天由培力藥廠提 供。實驗材料基原如表二所示:. 表二 實驗材料之基原對照表. 植 物. 拉. 丁. 11， 15. 名. 用部. Rhodiola crenulata (Hk. f. et Thoms.) H. Ohba Blumea lacera (Burm. f.) D.C.. 根. 台灣黃柏. Phellodendron amurense Ruper. 葉. 台灣葛根. Pueraria montana (Lour.) Merr.. 葉. 大花紅景天 生毛將軍. 40. 葉.
(41) 紅子莢?. Viburnum formosanum (Hance) Hayata. 葉. 呂宋莢?. Viblirnum luzonicum Roif. 葉. 旱蓮草. Eclipta prostrata (L.). 葉. 台灣醉魂藤. Heterostemma brownii Hayata. 葉. 黑星紫金牛. Ardisia virens Kurz. 葉. 葡萄籽. Procyanidolic Oligomers. 種子. 香菇. Lentinus edodes (Berk.) Sing.. 全株. 綠藻. Chlorella pyrenoidosa. 全株. 柚. Citrus grandis Osbeck. 皮. 欖仁樹. Terminalia catappa L.. 葉. 靈芝. Ganoderma lucidum Karst.. 葉. 桑. Althaea officinalis. 葉. 石蓮. Sinocrassula indica (Decne.) Berger. 葉. 2-1-2. 試藥 1. Methanol (CH3OH)，HPLC 級，Merck，德國。 2. Acetonitrile，HPLC 級，Merck，德國。 3. Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4)，Merck，德國。 4. Disodium hydrogen phosphate (Na2HPO4)，Merck，德國。 41.
(42) 5. Sodium dihydrogen phosphate monohydrate (NaH2PO4)， Merck，德國。 6. Riboflavin，Sigma，美國。 7. Nitroble tertazolium (NBT)，Sigma，美國。 8. L-Methionine，Sigma，美國。 9. 2，2’-azino-bis (3-ethlylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) diammonia salt (ABTS)，Sigma，美國。 10.Dipotassium hydrogen phosphate (K2HPO4)，Merck，德國。 11.Horseradish peroxidase，Type I (HRP)，Sigma，美國。 12.Meta-phosphoric acid (H3PO4)，Merck，德國。 13.Hydrogen peroxide (35% H2O2)，Merck，德國。 14.Sodium Hydroxide (NaOH)，Merck，德國。 15.Citric acid monohydrate (C 6H8O7) ，Merck，德國。 16.Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt (EDTA)，和 光，日本。 17.L-維他命 C，Sigma，美國。 18.Ortho-phosphoric acid (85% H3PO4)，Merck，德國。 19.Stearic acid，Sigma，美國。 20.White wax，Sigma，美國。. 42.
(43) 21.White petrolatum，Sigma，美國。 22.Glycerin (C3H8O3)，Merck，德國。 23.Propylene glycerol，Merck，德國。 24.Sodium laurylsulfate (SLS)，Merck，德國。 25.Tefose 2561 (PEG-6 stearate，Ceteth-20，Glyceryl stearate and Steareth-20)，Gattefosse，法國。 26.Tefose 63 (PEG-6-32 stearate and Glycol stearate)， Gattefosse，法國。 27.Labrafil M2130 CS (Lauroyl macrogol-6 glycerides)， Gattefosse，法國。 28.Labrafil M1944 CS (Oleoyl macrogol-6 glycerides)， Gattefosse，法國。 29.Mineral oil，Merck，德國。 30.Gelot 64 (Glyceryl stearate and PEG-75 stearate)， Gattefosse，法國。 31.Emulium Delta (Cetyl alcohol and Glyceryl stearate and PEG-75 stearate and Ceteth-20 and Steareth-20) Gattefosse，法國。 32.Labrafil M 1944 CS (Oleoyl macrogol-6 glycerides)，. 43.
(44) Gattefosse，法國。 33.Dimethicone，Gattefosse，法國。 34.Cyclomethicone，Gattefosse，法國。 35.MOD (Octydodecyl myristate)，Gattefosse，法國。 36.Sunflower oil，Gattefosse，法國。 37.Salcare SC 95 (Polyquaternium 37 and Paraffinum Liquid and PPG-1 Trideceth-6)，Gattefosse，法國。 38.Macadamia nut oil，Gattefosse，法國。 39.MIHACOL 138 (Acrylamide / Sodium acrylate / Mineral oil / Trideceth 6)，Gattefosse，法國。 40.pH 試紙，Merck，德國。. 2-1-3. 儀器設備 1. 粉碎機：RT-02B，濟生，中華民國。 2. 電子分析天平︰CP 224S，Sartorius，德國。 3. 精密電子超微量天平: SC 2，Sartorius，德國。 4. 超音波振盪器 (Ultrasonic)︰Transsonic-TP690，Elma，德 國。 5. 恆溫箱︰進信，臺北。 6. 酸鹼度計 (pH meter)：Model 6071，Jenco，中華民國。 7. 酵素免疫分析儀 (Microplate Reader)：Multiskan RC， 44.
(45) Labsystems，芬蘭。 8. 離心機：Hettich Zentrifugen D-7200，Tuttlingen，德國。 9. 水壓抽氣機 (Aspirator)：Aspirator A-3S，Eyla，日本。 10. 光度測定計 (Lux meter)：LX-101，Lutron，日本。 11. 觸動式震盪器 (Minishaker)：MS1，IKA® Works (Asia)， 馬來西亞。 12. 可調式定量吸管：Pipetman 20、100、200、1000 µl， GILSON，美國。 13. 純水製造機 (Water Purification Equipment)： Milli-Q-Academic，Millipore，美國。 14. 高效液相層析儀 (High-performance Liquid Chromatography；HPLC)：Hitachi，日本。 本裝置由下列組成： (1) 液相層析溶劑輸送系統 (Solvent Delivery Pump)： L-7100 (2) 紫外光可見光檢測器 (UV Detector)：L-7400 (3) 二極體列陣檢測器 (Diode Array Detector)：L-7455 (4) 自動注射器 (Auto-sampler)：L7200 (5) 除氣系統 (Degas)：DG-2410 15. 層析管柱 Intersil ODS-2 (4.6 x 250 mm)，GL Sciences， 45.
(46) 日本。 16. 層析管柱：LiChrospher® 60 RP-select B column (4 x 250 mm)，Merck，德國。 17. 乳化機 (Homogenizer)：Ultra Turrax® T25 basic，IKA® Labortechnik，德國。. 2-2. 美白與抗氧化? 體外評估試驗 本試驗方法包括擬超氧岐化? (SOD-like) 活性試驗及總抗氧 化力 (Total antioxidant activity)活性試驗兩種:. 2-2-1. 擬超氧岐化? 活性試驗 本試驗的測定原理是採 Beauchamp 和 Fridovich 所提出的 NBT 還原法 60，來分析超氧岐化? 活性。而自由基的生成系統， 是利用 Riboflavin 和 Methionine，在光照系統之下，產生超氧陰 離子自由基 (·O2-)。NBT 為呈色劑，與超氧陰離子反應之後，黃 色的 NBT 迅速被還原成藍紫色 (最大吸收波長為 530-580 nm)的 formazan。測試檢品中若具有類似超氧歧化? 的作用，會將超氧 陰離子自由基歧化，則 NBT 還原為 formazan 的量減少。以抑制 50% NBT 還原反應的濃度定義為一單位 (1U)的 SOD，換算每 mg 中草藥材所含 SOD 的量。. 46.
(47) 1. 檢品製備方法: 將生毛將軍、台灣黃柏、台灣葛根、紅子莢? 、呂宋莢? 、 旱蓮草、台灣醉魂藤、黑星紫金牛、欖仁葉、紅景天、桑葉、 石蓮、香菇、柚皮、靈芝、葡萄籽和綠藻的用部，以粉碎機 打成細粉，每種藥材各取 10g，以 80 ml 之 70%甲醇提取， 於 40℃下超音波震盪 15 分鐘，再 1500 rpm 離心 15 分鐘， 取上清液，重複此步驟 3 次，於室溫下乾燥收集提取物。. 2. 實驗步驟: (1) 以乾燥的中草藥甲醇提取物 10 mg 加入 10 ml 之 50 mM pH 7.8 的磷酸緩衝液中溶解，當作 SOD 活性分析檢品液。 (2) 配製反應液： 取 5 mM Riboflavin 液 20 µl、14.9 mg Methionine 及 1.22 mM NBT 液 820 µl，用 50 µl (pH 7.8) 的磷酸緩衝液補到 8 ml，此為分析盤 40 孔的量。 (3) 每孔加入 200 µl反應液及 50 µl稀釋成五種不同濃度的檢 品液，並以 50 µl 緩衝液當對照組，過程須在避光環境下 進行。將此 96 孔的微量分析盤，置於酵素免疫分析儀中 量測。 (4) 分析儀設定在動力學模式，測定波長 570 nm 的吸光值， 接觸到光源則反應開始。測定 t=0 時的吸光值，光照(800 47.
(48) Lux)達 1 分鐘後，96 孔的微量分析盤隨即進入偵測吸光 值，重複上述步驟至第 6 分鐘。計算 6 分鐘內對照組與 各稀釋濃度於吸光值變化的斜率。 (5) 對檢品中超氧陰離子的抑制程度，可由下列方程式計算 之，將能抑制50% NBT還原的 SOD量定義為 1 Unit 61,62。 Inhibition (%)=[(1-MS/Mb)] × 100% MS=稀釋檢品之時間-吸光值作圖的斜率 Mb=對照組之時間-吸光值作圖的斜率. 2-2-2. 總抗氧化力活性試驗 本實驗採用 Arnao 63 之 ABTS/H2O2/HRP 分析系統。總抗氧化 力活性測定，是測定檢品中的總抗氧化力，而非單一抗氧化物的 能力。利用 ABTS 和過氧化氫，在過氧化氫? 催化下，產生藍綠 色 ABTS 自由基。若測試檢品中含有抗氧化物就可抑制 ABTS 自 由基生成，產生藍綠色的時間就會延遲。標準品為 L-維他命 C， 與測試檢品對照其延遲時間 (lag time)，來換算測試檢品相當於 L-維他命 C 之抗氧化力。. 1. 檢品製備方法: 與 2-2-1 所述檢品製備方法相同。 2. 實驗步驟: 48.
(49) (1). 以乾燥的中草藥甲醇提取物 10 mg 加入 10 ml 之 6% Meta-phosphoric acid 及 1µM EDTA 溶液中使之溶解， 當作分析檢品液。 (2). 酵素免疫分析儀設定為動力學模式，偵測波長 414 nm， 每 10 秒讀取吸光值一次，連續讀值 15 分鐘。 (3). 於 96 孔的微量分析盤，於每個孔加入 50 mM pH 7.0 磷酸緩衝液 160 µl，6.67 mM ABTS 液 75 µl 作為呈色 劑，檢品液 10 µl，46.9 nM horseradish peroxidase 液 5 µl，混合均勻後，最後加入過氧化氫反應液 25 µl。反應 開始，立刻讀取吸光值，計算溶液開始變為綠色的時間 (遲滯時間)。 (4). 以 L-維他命 C 作為標準品。利用不同濃度的 L-維他命 C 和遲滯時間的關係圖，換算每公克的乾燥藥材相當於 L維他命 C 的量。. 2-3. 中草藥層析指紋圖譜之建立與確效. 2-3-1. 藥材取樣之前處理 將經基原鑑定之中草藥藥材，乾燥後以粉碎機研成細末，過 200 號篩後，於低溫下密封貯存。. 49.
(50) 2-3-2. 提取方式 精秤 1 g 粉末，置入 25 ml 檢品瓶中，加入 3 ml 70% MeOH 水溶液後，於 40℃下超音波震盪 15 分鐘，以離心機 1500 rpm 離 心 5 min，取上層液，殘渣再加入 8 ml，重複三次。將三次的上層 液合併，以 70% MeOH 定容至 25 ml 作為檢測液。. 2-3-3. 測定條件 以高效液相層析儀搭配 Photodiode array (PDA)檢測器或 UV 檢測器，做為化學指紋圖譜制定之儀器。配製緩衝溶液及移動相， 使用 Purospher® STAR RP-18e (5µm)，以全波長檢測掃描，再選 取較合適的波長製作化學指紋圖譜。將上述檢測液，先以濾紙過濾， 再經 0.45 µm 濾膜過濾，取濾液 20 µl 注入高效液相層析儀中，檢 測其成分。. 2-4. 中草藥之皮膚及眼球刺激性試驗 2-4-1. 皮膚刺激性試驗 1. 試驗藥材準備：將擬進行之中草藥甲醇提取物溶於水，調整 濃度為 5%，以 0.5ml 進行皮膚刺激性測試。 2. 動物品種：使用大白兔試驗。每組至少 3 隻動物以上，可使. 50.
(51) 用雄性與/或雌性動物。 3. 試驗步驟： (1). 測試前一天，剃除動物背部毛髮，檢查皮表是否完整， 若皮表有刮痕或皮膚病，則不予使用。 (2). 測試當天，擬進行之中藥材，塗抹於動物背部皮表 (約 6cm 2)，並覆蓋上透氣繃帶。在同一隻動物的背部，另選 相同面積之皮表，作為溶劑對照組。 (3). 將擬進行之中草藥材塗抹於透氣繃帶上，再蓋在測試部 位。 (4). 測試約 4 小時後，以水或適當溶劑清除皮表之試驗藥 材。 4. 刺激性評估: 本試驗採用皮膚刺激性計分系統，摘自 OECD (Organization for Economic Cooperation and Development，2001) Guideline for Test of Chemical NO.404: Aute Dermal Irritation/Corrosion)64. 皮膚反應等級 (GRADING OF SKIN REACTION): (1). 紅斑和焦痂的形成 (Erythema and Eschar Formation). 51.
(52) 無紅斑............................................................................ 0. 很輕微的紅斑 (難察覺).................................................. 1 明顯紅斑.......................................… … … … … … … … …. 2. 中度到重度紅................................................................. 3 重度紅斑 (甜菜紅)到焦痂的形成.................................... 4 最大可能程度:4. (2). 水腫的形成 (Oedema Formation). 無水腫............................................................................ 0 很輕微的水腫 (難察覺).................................................. 1 輕微的水腫 (範圍有明顯的情形)................… … … … … .. 2 中度的水腫 (腫脹近 1 mm)............................................ 3 重度的水腫 (腫脹大於 1 mm)......................................... 4. 最大可能程度:4. (1). 給藥後的第 1、24、48 及 72 小時，以皮膚刺激性計分 系統。觀察及記錄敷藥部住的皮膚反應，包括所產生的 紅斑、浮腫情形、刺激作用、腐蝕作用與恢復情形的程 度與性質及其他毒性作用。 52.
(53) (2). 藥材對皮膚引起之刺激反應超過 72 小時，則須持續觀 察及記錄皮膚刺激性反應至第 14 天止，以評估該皮膚傷 害性為可逆性或非可逆性。. 2-4-2. 眼睛刺激性試驗 1. 試驗藥材準備: 將擬進行之中草藥甲醇提取物溶於水，調整 濃度為 5%，以 0.1 ml 進行眼睛刺激性測試。 2. 動物品種: 使用大白兔試驗。每組 3 隻動物以上，可使用雄與/或雌性 動物。 3. 試驗步驟: (1). 將試驗藥材提取液放入動物一隻眼睛的結膜囊中，另一 隻眼睛不作任何處理作為空白對照組。 (2). 若藥材會引起劇痛反應，則在擬進行之中草藥材處理 前，須對實驗動物進行局部麻醉。 (3). 如有需要，試驗動物眼睛經擬進行之藥材給藥 24 小時 後，可以清水清洗眼睛。 4. 刺激性評估: 本試驗採用眼睛刺激性計分系統，摘自 OECD (2001) Guideline for Testing of Chemicals NO.405: Aute Eye Irritation/Corrosion)65。. 53.
(54) 眼睛損傷的等級評估 (Grading for Ocular Lesions):. (1). 角膜 (Cornea) 沒有模糊不清.................................................................. 0. 模糊區域分散 (模糊區域少量且感光正常)..................... 1 可辨識到半透明的區域，虹膜形狀模糊.......................... 2 模糊的區域，虹膜形狀不可見，瞳孔形狀勉強可見........ 3 不透明的角膜，無法從模糊區域見到虹膜...................... 4. (2). 虹膜 (Iris). 正常............................................................................ 0. 可能出現深的皺摺、充血、腫脹、角膜周圍有中度充 血，可能以上症狀之一或兩者以上，虹膜仍然對光有 反應 (呈現較遲鈍反應)............................................. 1. 對光沒反應、出血、明顯有損傷................................. 2. 54.
(55) (3). 結膜 (Conjunctivae). 紅腫的情形 (包括眼瞼、眼球根、結膜、角膜、虹膜). 血管正常..................................................................... 0. 有些血管充血............................................................. 1. 模糊、深紅色、特別幾個血管無法辨識......................... 2. 模糊的深紅色............................................................. 3. (4). 化學病理學 (眼瞼、眼皮的症狀). 沒有紅腫..................................................................... 0. 看起來有點紅腫 (包括眼皮)....................................... 1. 眼瞼外翻有部分紅腫................................................... 2. 眼瞼近一半有紅腫...................................................... 3. 眼瞼過一半有紅腫...................................................... 4. (1). 動物的眼睛經給藥後第 1、24、48 與 72 小時，以眼睛 刺激性計分系統，觀察及記錄眼睛刺激反應，包括檢查眼 角膜 (cornea)、虹膜 (iris)、及結膜 (conjunctiva)。 (2). 若 72 小時後眼睛沒有呈現明顯刺激反應，則可終止此. 55.
(56) 試驗。 (3). 若擬進行之中藥材會引起持久的角膜或其他眼睛刺激 現象，須持續觀察及記錄眼睛刺激性反應至第 21 天止， 以評估該眼睛傷害性為可逆性或非可逆性。 (4). 除結膜、虹膜、及角膜外，其他眼睛組織若出現損傷都 應加以記錄。. 2-5. 乳霜基劑之研究 2-5-1. 乳霜基劑之預配方試驗 乳霜配方組成如表三與表四所示，共 13 個配方。分為熱製法 與冷製法: 1. 熱製法之製程 (配方 1-6): 是傳統的乳霜製造方法，將 A 相 (油相)及 B 相(水相)分別於 水浴鍋加熱至 75°C，待平衡時，將 A 相加入 B 相，並以乳 化機 11000 rpm 攪拌 5-10 分鐘，靜置，待溫度降至室溫即 成乳霜。 2. 冷製法之製程 (配方 7-13): 屬於較新式的乳化方法，採用微粒子增稠系統 (micro particulate thickening system)，如 Salcare 95 或 MIHACOL 56.
(57) 138，這系統包含聚合物 (分散相)、載體 (連續相)及界面活 性劑三部分。 將 A 相及 B 相均勻混合，以乳化機 11000 rpm 攪拌 5-10 分 鐘便能乳化形成乳霜。. 表三 乳霜配方 1-6 號之組成 配方編號 A 相/B 相 A相 1 B相. A相 2 B相 A相 3 B相. A相 4 B相 5 A相. 組成成分. 含量 (g). Stearic acid White wax White petrolatum Glycerin SLS Purified water Tefose 63 Labrafil M2130 CS Mineral oil Propylene glycol Purified water Gelot 64 Labrafil M2130 CS Mineral oil Propylene glycol Purified water Emulium Delta Labrafil M 1944 CS Cyclomethicone Mineral oil Propylene glycol Purified water Tefose 2561 Labrafil M2130 CS Mineral oil. 17 1 2 8 4 68 18 4 4 4 70 16 4 2 10 68 6 5 4 8 7 70 22 4 2. 57.
(58) B相. A相 6 B相. Propylene glycol Purified water Emulium 22 MOD Dimethicone Squalane Propylene glycol Purified water. 5 67 8 5 4 10 5 68. 表四 乳霜配方 7-12 號之組成 A相 7 B相 8. A相 B相. 9. A相 B相 A相. 10 B相 A相 11 B相 A相 12 B相. Salcare 95 Sunflower Propylene glycol Purified water Salcare 95 Mineral oil Propylene glycol Purified water Salcare 95 Squalane Propylene glycol Purified water Salcare 95 Octyldodecyl myristate Propylene glycol Purified water Salcare 95 Macadamia nut oil Propylene glycol Purified water Salcare 95 Squalane Octyldodecyl myristate Propylene glycol Purified water. 58. 3 20 5 72 3 20 5 72 3 20 5 72 3 20 5 72 3 20 5 72 3 10 10 5 72.
(59) A相. MIHACOL 138. 5. B相. Purified water. 95. 13. 2-5-2. 乳霜基劑之評估方法 1. 外觀: 觀察產品其色澤與均勻性。 2. 塗擦: 取少許乳霜塗擦於皮膚上，比較塗擦後 10 秒有無油膩的感。 3. pH 值: 以 pH 試紙測量乳霜基劑之 pH 值。 4. 延展性: 以滾球裝置來評估每個乳霜配方的延展性。(圖十一所示)。 實驗步驟: ↓將不鏽鋼珠 (直徑 10 mm 重量 4.1g)安置於擋板前固定。 ↓將待測的乳霜 (厚度 0.5 mm)，置於玻璃平板上。 ↓軌道 (13 厘米)與玻璃平板之角度為 26°。 ↓擋板拉開，讓不鏽鋼珠下滑，紀錄鋼珠滑行乳霜的距離。 (n=6). 59.
(60) 圖十一 滾球裝置. 5. 有無分層: 於測量時間，取 1g 乳霜置於玻璃試管內，以 4000 rpm 轉 離心 30 分鐘，觀察有無分層現象。. 2-6. 中草藥品管方法 本方法是以中草藥之指標成分進行品管，如下列項目： 2-6-1. 選擇指標成分 利用參考文獻選擇指標成分及其分析條件。再使用 PDA 檢測 器，量測其紫外光光譜圖及對照偵尋指標成分。 2-6-2. 中草藥指標成分之製備 取中草藥提取液，以 Purospher® STAR RP-18e (5µm)層析管 柱，在適當的移動相下，收集適當滯留時間之指標成分的層析峰. 60.
(61) 洗出液。於室溫下，以氮氣吹乾後，微量天平稱重。. 2-6-3. 指標成分之純度試驗 將上節收集的指標成分，溶於移動相後，層析 60 分鐘，計算 指標成分的層析峰面積比，作為指標成分之純度參考值。. 2-6-4. 指標成分之標準曲線建立 將前述所收集的指標成分，分別配製指標成分紅景天? 濃度 為 100、50.0、25.0、12.5、6.25、3.13 及 0.313% 和鞣花酸濃 度為 100、50.0、33.0、25.0、12.5、6.25 及 3.13% 之水溶液， 以高效液相層析法製備指標成分之標準曲線。. 2-6-5. 指標成分之安定性試驗 分別製備指標成分於 3 % H2O2、0.1 N NaOH、0.1 N HCl 及 pH 7.0 之磷酸緩衝液的環境下，並置於 60℃恆溫箱，進行指標成 分之安定性試驗，於每 20 分鐘至 7 天取樣一次，檢品儲存於-20 ℃下，取樣結束後，將檢品解凍後分析之。. 2-7. 含中草藥乳霜製造方法. 2-7-1. 含中草藥乳霜製造過程 1. 中草藥水溶液之製備方法: 61.
(62) 秤取中草藥材之甲醇提取物各 20 g，置於三角錐瓶中，加入 二次水溶解，把中草藥水溶液之濃度調至 3.5%。 2. 中草藥乳霜之製備方法: 將篩選後的乳霜基劑配方，以 3.5%中草藥水溶液來取代去 離子水，製造中草藥乳霜。 步驟如下: ↓把 A 相及 B 相，各原料分別均勻混合。 ↓加入 0.18 % Methylparaben 至 A 相及 0.02 % propylparaben 至 B 相。 ↓混合 A、B 兩相，再以乳化機 11000 rpm 攪拌 5 -10 分鐘。. 2-7-2. 乳霜中之指標成分含量 將 1 g 之中草藥乳霜，加 10 ml 之 MeOH 溶解後，以 3000 rpm 離心 15 分鐘，取上清液並經濾膜 (0.45 µm)過濾。檢品以高效液 相層析法，分析乳霜檢品中指標成分含量。. 2-7-3. 以滾球裝置評估中草藥乳霜 改變不同的油水相比例的中草藥乳霜配方，使用滾球裝置來 評估加入中草藥配方後，是否改變延展性。. 62.
(63) 2-8. 含中草藥乳霜之安定性研究 1. 物理安定性研究: 將含中草藥之乳霜，分別儲存於 25 與 35°C 二種溫度，於適當時間取出少量乳霜，觀察其變化:. (1). 外觀檢查: 取少許乳霜，置於玻璃板上塗開，觀察其色澤、 均勻性與發霉等變化。 (2). pH 測量: 以 pH 試紙測量儲存於 25 與 35°C 之含中草藥乳 霜，其 pH 值之變化。 (3). 油水分層檢查: 於測量時間，取 1.0 g 乳霜置於試管內，以 4000 rpm 離心 30 分鐘，觀察有無分層現象。 2. 指標成分於乳霜中之安定性: 將中草藥乳霜儲存於 25 與 35°C 恆溫箱下，觀察 90 天後，指標成分之安定性變化。. 63.
(64) 三. 結果與討論. 3-1. 美白與抗氧化之體外評估試驗 本方法利用擬超氧岐化? 活性試驗及總抗氧化力活性試驗，來評 估具美白、抗氧化潛力之中草藥。. 3-1-1. 擬超氧岐化? 活性試驗 圖十二至圖十四為檢品濃度與 NBT 抑制率之關係圖，如表五 及圖十五所示，可以發現紅景天、呂宋莢? 及欖仁葉在這組藥材 中超氧歧化? 含量較高。. 3-1-2. 總抗氧化力活性試驗 圖十六為 L-維他命 C 濃度為 50、100、200、400、600 和 1000 µM，於 15 分鐘內 ABTS 自由基延遲時間與吸光值之關係 圖。利用 L-維他命 C 的濃度與延遲時間的關係作標準曲線。決定 係數 (R2)大於 0.999，線性關係良好 (圖十七)。. 圖十八至二十為 15 分鐘內，測試檢品的延遲時間與吸光值 的關係圖。計算延遲時間後，對照 L-維他命 C 的標準曲線圖，計 算產生相同延遲時間之 L-維他命 C 濃度。如表六及圖二十一所. 64.
(65) 示，可以發現總抗氧化力活性大小比較，紅景天、呂宋莢? 及欖 仁葉在這組藥材中總抗氧化力較高。. 表五 測試檢品超氧歧化? 活性 (依活性大小之排列) 中草藥測試檢品 紅景天 呂宋莢? 欖仁葉 葡萄籽 紅子莢? 旱蓮草 靈芝 台灣黃柏 黑星紫金牛 香菇 生毛將軍 台灣葛根 台灣醉魂藤 桑葉 綠藻 大白柚皮 石蓮. 每毫克藥材之超氧歧化? 含量 (U/mg) n=3 3063.38±37.25 1677.18±38.11 1276.12±25.43 821.03±18.88 724.93±15.81 558.24±7.41 331.80±4.31 275.31±4.81 250.42±3.57 248.02±5.24 155.81±2.81 136.90±2.08 127.86±0.82 79.56±2.08 71.71±1.85 32.64±0.85 19.89±0.54. 65.
(66) 100 Inhibition of NBT Reduction (%). Inhibition of NBT Reduction (%). 100 y = 14.775x - 4.5589 R2 = 0.9865. 80 60 40 20 0 0. 1. 2. 3. 4. 60 40 20 0 0. 5. (1) 台灣黃柏. Inhibition of NBT Reduction (%). Inhibition of NBT Reduction (%). 40 20 0 2. 4. y = 8.3502x + 35.256 R2 = 0.9855. 80 60 40 20 0 0. 6. Sample (μl). Inhibition of NBT Reduction (%). Inhibition of NBT Reduction (%). y = 1.8589x - 7.7774 R2 = 0.9823. 60 40 20 0 10. 4. 6. (4) 旱蓮草. 100. 0. 2. Sample (μl). (3) 台灣醉魂藤. 80. 6. 100. 60. 0. 4. (2) 黑星紫金牛. y = 8.3498x + 34.868 R2 = 0.9625. 80. 2 Sample (μl). Sample (μl). 100. y = 14.994x - 10.207 R2 = 0.9912. 80. 20. 100 y = 0.9508x + 37.116 R2 = 0.9895. 80 60 40 20 0 0. 30. 10. 20. Sample (μl). Sample (μl). (5) 大白柚. (6) 綠藻. 圖十二 測試檢品抑制 NBT 之還原活性關係圖 (I) 66. 30.
(67) 100 Inhibition of NBT Reduction (%). Inhibition of NBT Reduction (%). 100 y = 3.6762x + 26.604 R2 = 0.9805. 80 60 40 20 0 0. 5. 10. y = 8.1575x + 16.901 R2 = 0.9772. 80 60 40 20 0. 15. 0. 2. 4. 10. (8) 香菇. 100. 100. Inhibition of NBT Reduction (%). Inhibition of NBT Reduction(%). (7) 生毛將軍. y = 6.6555x + 0.7643 R2 = 0.9925. 60 40 20. y = 43.363x - 3.3332 R2 = 0.9957. 80 60 40 20. 0. 0 0. 2. 4. 6. 0. 0.5. Sample (μl). 1.5. (10) 葡萄籽. Inhibition of NBT Reduction (%). 100 y = 72.072x + 6.7723 R2 = 0.9845. 80. 1. Sample (μl). (9) 台灣葛根. Inhibition of NBT Reduction (%). 8. Sample (μl). Sample (μl). 80. 6. 60 40 20 0. 100 80. y = 3.7744x + 2.158 R2 = 0.9855. 60 40 20 0. 0. 0.5. 1. 1.5. 0. Sample (μl). 2. 4. 6. 8. Sample (uμ). (11) 紅仔莢?. (12) 桑葉. 圖十三 測試檢品抑制 NBT 之還原活性關係圖 (II) 67. 10.
(68) Inhibition of NBT Reduction (%). Inhibition of NBT Reduction (%). 100 y = 11.353x + 15.836 R2 = 0.99. 80 60 40 20 0 0. 2. 4. 6. 100 y = 76.351x + 5.9097 R2 = 0.9882. 80 60 40 20 0 0. 8. 0.5. (14) 呂宋莢?. 100. Inhibition of NBT Reduction (%). Inhibition of NBT Reduction (%). (13) 靈芝. y = 1.0637x - 1.9364 R2 = 0.9865. 60 40 20 0. 100 y = 62.55x + 0.2131 R2 = 0.9849. 80 60 40 20 0. 0. 20. 40. 60. 0. (15) 石蓮 100. 0.5. 1. 1.5. Sample (μl). Sample (μl). Inhibition of NBT Reduction (%). 1.5. Sample (μl). Sample (μl). 80. 1. (16) 欖仁葉. y = 139.08x + 4.6076 R2 = 0.9724. 80 60 40 20 0 0. 0.2. 0.4. 0.6. 0.8. 1. Sample (μl). (17) 紅景天. 圖十四 測試檢品抑制 NBT 之還原活性關係圖 (III) 68. 2.
(69) 3500. 超氧歧化? 含量 (U/mg). 3000. 2500. 2000. 1500. 1000. 500. 0 紅景天. 呂宋莢?. 欖仁葉. 葡萄籽. 紅子莢?. 旱蓮草. 靈芝. 台灣黃柏. 黑星紫金牛. 香菇. 生毛將軍. 台灣葛根. 中草藥測試檢品 圖十五 測試檢品超氧歧化? 活性之比較圖. 69. 台灣醉魂藤. 桑葉. 綠藻. 大白柚皮. 石蓮.
(70) 2 50μM Vit.C 100μM Vit.C 200μM Vit.C 400μM Vit.C 600μM Vit.C. 1. 0 0. 200. 400. 600. 800. 1000. Lag Time(sec). 圖十六 不同濃度 L-維他命 C 延遲時間與吸光值關係圖 500 y = 0.496x - 42.059. 400 Lag time(sec). ABS. 1000μM Vit.C. R2 = 0.9992. 300 200 100 0 -100. 0. 200. 400. 600. 800. 1000. 1200. L-維他命 C 濃度(uM). 圖十七 不同濃度 L-維他命 C 延遲時間之線性關係圖. 70.
(71) 2. 1.5. 1.5 ABS. ABS. 2. 1. 1 0.5. 0.5. 0. 0 0. 200. 400. 600. 800. 0. 1000. 200. (1) 生毛將軍. 800. 1000. 800. 1000. 800. 1000. (2) 台灣黃柏. 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0. 1 0.8 ABS. ABS. 600. Time (sec). Time (sec). 0.6 0.4 0.2 0. 0. 200. 400. 600. 800. 1000. 0. 200. Time (sec). 400. 600. Time (sec). (3) 旱蓮草. (4) 黑星紫金牛 2. 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0. 1.5 ABS. ABS. 400. 1 0.5 0. 0. 200. 400. 600. 800. 0. 1000. 200. 400. 600. Time (sec). Time (sec). (5) 台灣醉魂藤. (6) 台灣葛根. 圖十八 台灣草藥之總抗氧化力動力圖 (I). 71.
(72) 2. 1.5. 1.5 ABS. ABS. 2. 1 0.5. 1 0.5. 0. 0 0. 200. 400. 600. 800. 1000. 0. 200. Time (sec). 400. 600. 800. 1000. 600. 800. 1000. 600. 800. 1000. Time (sec). (7) 呂宋莢?. (8) 紅子莢?. 0.4. ABS. ABS. 0.4. 0.2. 0.2. 0. 0 0. 200. 400. 600. 800. 1000. 0. 200. Time (sec). 400 Time (sec). (9) 柚. (10) 靈芝. 0.4. ABS. ABS. 0.4. 0.2. 0.2. 0. 0 0. 200. 400. 600. 800. 0. 1000. 200. 400 Time (sec). Time (sec). (11) 桑葉. (12) 綠藻. 圖十九 台灣草藥之總抗氧化力動力圖 (II). 72.
(73) 0.4. ABS. ABS. 0.4. 0.2. 0.2. 0. 0 0. 200. 400. 600. 800. 1000. 0. 200. Time (sec). 400. 600. 800. 1000. 600. 800. 1000. Time (sec). (13) 香菇. (14) 葡萄籽 1. ABS. ABS. 0.4. 0.8 0.6 0.4. 0.2. 0.2 0. 0 0. 200. 400. 600. 800. 0. 1000. 200. 400 Time (sec). Time (sec). (15) 欖仁葉. (16) 紅景天. 圖二十 台灣草藥之總抗氧化力動力圖 (III). 73.
(74) 表六 測試檢品總抗氧化力活性 (依活性大小之排列) 中草藥測試檢品 呂宋莢迷 紅景天 欖仁葉 葡萄籽 紅子莢迷 黑星紫金牛 台灣黃柏 靈芝 旱蓮草 生毛將軍 香菇 台灣葛根 大白柚皮 桑葉 台灣醉魂藤 海藻 石蓮. 每克藥材相當於維他命 C 之微克數 (µ g/g) n=3 263679.52±6237.73 247603.45±6549.65 235226.49±6765.08 228257.75±5617.48 163163.76±4563.53 146230.4±4018.83 76508.92±1639.39 34466.04±646.09 31916.8±657.97 25020.72±436.98 23538.97± 576.58 12681.73±226.69 9428.46±143.82 8179.21±89.17 6035.34±158.45 3826.89± 107.73 －. －: 無法測得. 74.
(75) 300000. 相當於Vit.C之量 (ug/g). 250000. 200000. 150000. 100000. 50000. 0 呂宋莢迷. 西藏紅景天. 欖仁葉. 葡萄籽. 紅子莢迷. 黑星紫金牛. 台灣黃柏. 靈芝. 旱蓮草. 生毛將軍. 香菇. 台灣葛根. 中草藥檢測樣品. 圖二十一 測試檢品總抗氧化力活性比較圖. 75. 大白柚皮. 桑葉. 台灣醉魂藤. 海藻. 石蓮.
(76) 3-1-3. 具有美白、抗氧化潛力的中草藥比較 依據擬超氧岐化? 活性試驗及總抗氧化力活性試驗，其活性 比較，紅景天、呂宋莢? 及欖仁葉有較高抗氧化活性，為具有美 白、抗老化潛力之中草藥。而呂宋莢? 因氣味不佳，且少有藥用 記載文獻，故選擇紅景天、欖仁葉繼續深入研究，作為中草藥美 容化妝品的成分。. 3-2. 中草藥層析指紋圖譜之建立與確效 中藥指紋圖譜是指中藥材或中成藥中，所共有的具有特徵性的某 類或幾類成分的色層分析或光譜的圖譜 66。其特點是 1. 經由指紋圖 譜的特徵性，能有效鑑別檢品的真偽；2. 經由指紋圖譜主要特徵峰 的面積和比例的制定，能有效控制檢品質量，保證檢品質量的相對安 定。指紋圖譜已成為國際公認品管天然藥物品質的最有效方法。 欖仁葉之指紋圖譜已由楊惠雯所建立 67。本方法主要針對紅景 天來進行指紋圖譜建立及確效。. 1. 分析條件: 流速使用 1 ml/min，移動相是甲醇及 0.1 % 磷酸緩衝溶液 (pH 2.4)組成，以梯度方式沖提，其比例變化如表七所示。 2.分析波長之選擇: 圖二十二至二十六為高效液相層析法以 PDA 作為檢測器，所 檢測出五種波長的層析圖，波長分別為 210、254、280、330 及 500 nm，發現以波長 330 nm 所呈現出的層析峰較多，對於 確效較容易進行，故選擇 330 nm 作為確效分析的波長。指標 76.
(77) 成分紅景天? 於滯留時間 10.84 分鐘出現。 3. 層析峰之再現性: 以上述之分析條件，每日做一次 HPLC 分析確效，共做 6 日， 可發現有 12 支層析峰變異係數均在 10 % 以內 (表八)。 顯示此分析方法之再現性良好。. 表七 紅景天層析之移動相梯度表 時間 (分鐘). MeOH (%). 0.1 % 磷酸緩衝溶液 (%). 0. 5. 95. 15. 15. 85. 60. 30. 70. 90. 45. 55. 105. 60. 40. 115. 75. 25. 125. 100. 0. 77.
(78) 0.14 0.12. Intensity (AU). 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 0. 20. 40. 60. 80. 100. Retention Time (min). 圖二十二 紅景天 HPLC 之 PDA 層析圖 (波長 210 nm). 78. 120.
(79) 0.14 0.12. Intensity (AU). 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 0. 20. 40. 60. 80. 100. Retention Time (min). 圖二十三 紅景天 HPLC 之 PDA 層析圖 (波長 254 nm). 79. 120.
(80) 0.14 0.12. Intensity (AU). 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 0. 20. 40. 60. 80. 100. Retention Time (min). 圖二十四 紅景天 HPLC 之 PDA 層析圖 (波長 280 nm). 80. 120.
(81) 0.035 紅景天?. 0.030. Intensity (AU). 0.025 0.020 0.015 0.010 0.005 0.000. 0. 20. 40. 60. 80. 100. Retention Time (min). 圖二十五 紅景天 HPLC 之 PDA 層析圖 (波長 330 nm). 81. 120.
(82) 0.14 0.12. Intensity (AU). 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 0. 20. 40. 60. 80. 100. Retention Time (min). 圖二十六 紅景天 HPLC 之 PDA 層析圖 (波長 500 nm). 82. 120.
(83) 表八 紅景天層析峰之再現性分析 (C.V.＜10%) 日 峰. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 1. RT Area RT Area RT Area RT Area RT Area RT Area Average C.V. (%) 10.84 380959 10.63 328382 10.66 377951 9.89 324396 9.69 380127 10.57 389541 363559.3 8.0. 2. 26.52 324721 26.28 305593 26.23 353073 24.79 318285 25.01 341818 26.01 330885 329062.5. 5.1. 3. 30.52 208079 30.27 179364 30.21 208838 28.59 203179 28.93 210836 29.99 206222 202753.0. 5.7. 4. 34.28 110254 33.99 95413 33.93 111029 32.08 122965 32.55 122872 33.73 119092 113604.2. 9.2. 5. 37.84 103760 37.49 89012 37.41 99386 35.08 83460 35.65 87548 37.15 93420 92764.3. 8.2. 6. 40.27 246644 39.84 215114 39.75 248894 36.89 253769 37.55 247675 39.4 259833 245321.5. 6.3. 7. 42.07 221572 41.73 189255 41.68 218119 39.32 232819 39.81 236294 41.2 240022 223013.5. 8.3. 8. 49.57 187808 49.09 156062 49.08 185443 45.32 193863 46.35 188177 48.48 189016 183394.8. 7.4. 9. 56.33 831784 55.85 721185 55.81 837614 52.28 761279 53.36 789198 55.32 844594 797609.0. 6.1. 10. 62.57 529145 62.12 452473 62.19 518058 58.89 481980 60.12 482237 61.72 487170 491843.8. 5.6. 12. 108.83 309124 108.83 265797 108.88 306662 107.79 263496 108.59 303222 108.85 311809 293351.6. 7.6. RT: Retention time. 83.
(84) 3-3. 中草藥之皮膚及眼球刺激性試驗 本試驗以紅景天及欖仁葉之水提液，進行皮膚及眼球刺激性試 驗。. 3-3-1. 皮膚刺激性試驗 表九為紅景天與欖仁葉皮膚刺激試驗結果，給藥後的第 1、 24、48 及 72 小時，以皮膚刺激性計分系統，可發現無紅斑、 浮腫情形，證實這兩種藥材對兔子無皮膚刺激性。. 3-3-2. 眼睛刺激性試驗 表十為紅景天與欖仁葉眼睛刺激試驗結果，給藥後的第 1、 24、48 及 72 小時，以眼睛刺激性計分系統，可發現眼角膜、 虹膜、結膜及眼瞼情況正常，證實這兩種藥材對兔子無皮膚 刺激性。. 表九 皮膚刺激性試驗評分 (中草藥之水提取物 0.5 ml) 藥材. 紅景天. 欖仁葉. 時間 1 hr 24 hr 48 hr 72 hr 1 hr 24 hr 48 hr 72 hr. 84. 評分 0 0 0 0 0 0 0 0.
(85) 表十 眼睛刺激性評分 (中草藥之水提取液 0.1 ml)) 藥材. 紅景天. 欖仁葉. 時間 1 hr 24 hr 48 hr 72 hr 1 hr 24 hr 48 hr 72 hr. 評分 0 0 0 0 0 0 0 0. 3-4. 乳霜基劑之研究 從 13 個配方中，依照外觀、塗擦感覺、pH 值、滾球距離 (表 十一，市售乳霜試驗在 4.12 至 5.5 厘米)及離心後是否分層， 來選擇適當的基劑。 如表十二，可以發現配方 5 及 12 無論在外觀、光澤度、塗 擦感覺、滾球距離且離心不分層等綜合評估上，都比其他配 方好。但本試驗主要須添加中草藥成分，所以配方 5 在製法 上，可能因溫度過高而破壞有效成分，又配方 12 在製程上 會比配方快速、便利，所以本試驗選擇配方 12 作為中草藥 乳霜之基劑。. 85.
(86) 表十一 市售乳霜之滾球距離試驗 (C.V.＜2%). 乳霜. 滾球距離 (cm) n=6. pH. 安芳膠原霜. 4.77. 4.7. 安芳緊緻霜. 5.50. 5.5. 安芳眼脣霜. 4.60. 4.7. 歐夏蕾潤膚霜. 4.45. 5.3. 資生堂滋潤霜. 4.65. 5.5. 盛香堂雪芙蘭. 4.12. 6.1. 旁氏嫩白乳霜. 4.65. 5.2. 杏輝愛麗霜. 4.45. 5.5. 86.
(87) 表十二 乳霜預配方之評估結果. 配方編號. 外觀. 光澤. pH. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13. 乳白色乳霜 亮白色乳霜 亮白色乳霜 亮白色乳霜 亮白色乳霜 乳白色乳霜 亮白色乳霜 亮白色乳霜 亮白色乳霜 亮白色乳霜 亮白色乳霜 亮白色乳霜 乳白色乳霜. 無 有 無 有 有 無 有 有 有 有 有 有 無. 5.3 5.4 5.3 5.2 5.2 5.3 4.7 4.7 4.7 4.7 4.7 4.7 5.6. 滾球距離 (cm) n=6 質地硬、不易塗開、油膩 6.4 質地細緻、易塗開、油膩 4.2 質地鬆軟、不易塗開、不油膩 10.8 質地鬆軟、易塗開、油膩 10.5 質地細緻、易塗開、不油膩 5.1 質地細緻、易塗開、不油膩 5.2 質地細緻、易塗開、油膩 5.5 質地細緻、易塗開、油膩 5.6 質地鬆軟、易塗開、油膩 3.5 質地細緻、易塗開、不油膩 5.8 質地鬆軟、易塗開、不油膩 6.2 質地細緻、易塗開、不油膩 5.1 質地細緻、易塗開、不油膩 5.7 塗擦感覺. 87. 離心分層否 否 否 是 是 否 否 否 否 否 否 否 否 否.
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