蘇力菌以色列亞種對抗登革熱病媒蚊之模擬試驗與田野評估
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(2) 誌. 謝. 三年來的研究生活已經接近尾聲，回想起研究之初的我是那麼懵懂，在這三年我不斷 地成長，做人處事也越加圓融，感謝周圍所有幫助我的人，也唯有大家的協助，我才能順 利完成這篇論文。 首先要感謝我的指導教授-白秀華老師，還記得研究剛開始進行時，我不清楚自己的 方向，而白老師悉心指導我，並釐清我的觀念，在忙碌的工作之餘，仍不厭其煩的指導我 論文寫作，在過去常適時的提供給我許多寶貴的知識與經驗，使我在研究的過程中獲益良 多。有您循序漸進的指導，引領著我在紮實的訓 練中成長，除此之外，老師也像媽媽一樣， 教導我如何與人接觸，並不斷提醒我，要我改正許多不好的缺點，感謝老師不厭其煩的指 導與鼓勵，讓我在這三年的生活中不斷的成長，要再次感謝老師您提供我的一切，如果沒 有老師您我沒有辦法完成學業，在許多時刻常讓老師煩心，很多時候我在事情真的不是做 得這麼好，感謝老師您的包容，白老師對我的影響我這輩子沒齒難忘。 感謝口試委員徐爾烈 教授與羅怡珮 教授，百忙之中指導我的 論文，使論文的內容能 更加豐富，口試時給予指正與鼓勵並提供許多寶貴的意見，使論文更趨完整與精緻。 最後感謝的是，一直照顧、陪伴、支持、鼓勵我的家人，因為有爸爸、媽媽、佩姍你 們，在我需要時給我最溫暖的關懷，在我不舒服時可以體諒、幫助我，在我想放棄時給我 最大的支持，我才能專注在工作與學業上，讓我無後顧之憂的往前走並完成學業，因為有 你們的陪伴讓我的生命更精采。 最後謹將這篇論文的成果獻給我最愛的家人、師長及朋友。. 佩蓉 謹誌 民國九十九年九月. I.
(3) 蘇力菌以色列亞種對抗登革熱病媒蚊 之模擬試驗與田野評估 指導教授：白秀華 博士 國立高雄大學運動健康與休閒學系(所) 學生：蔡佩蓉 國立高雄大學運動健康與休閒學系(所) 摘要 台灣高雄地區因長期執行登革熱化學防制,登革熱病媒蚊已對除蟲菊精類之殺蟲 劑產生抗藥性，蘇力菌以色列亞種為安全環保之生物殺蟲劑，故本研究欲瞭解蘇力菌 以色列亞種對登革熱病媒蚊之殺滅效果及殘效性。 室外與室內模擬試驗，以埃及斑蚊感性品系(Bora Bora)、高雄市埃及斑蚊野外品 系及白線斑蚊野外品系之孑孓置於容器內裝 60 公升除氯水，每組五重複，以 Bti 水散 粒劑型 VectoBac(WDG)，分別以 4 公克/1000 公升及 8 公克/1000 公升之劑量分散投入； 另不投藥為對照組；計數半數致死時間及 24 小時與 48 小時死亡率評估其殺滅效果； 另每隔 7 日，不再加入藥劑但放入上述登革熱病媒蚊，並計數半數致死時間及 24 小時 與 48 小時死亡率，以評估其殘效性(水量維持 60 公升)。依 Finney Probit Analysis 計 算半數致死時間(LT50)，及 Abbott %校正死亡率計算。 室外田野試驗區選取公寓型住宅兩鄰近且相似之區塊作為實驗區及對照區，評估 施藥前、施藥期間與施藥後誘蚊產卵指數，於施藥期間每週一次，連續 6 次的水域及 非水域 Bti 施藥。室內田野試驗選取積水地下室 30 處，噴灑或投入 Bti 進行埃及斑蚊 幼蟲防治，施藥 24 小時後觀察蚊蟲幼蟲死亡率，評估其殺滅效果，而後每週定期觀察 是否有蚊蟲孳生之情形。 以Bti對登革熱病媒蚊幼蟲不論室外或室內之模擬試驗半數致死時間均少於半小 時，為立即性的殺滅效果；室外模擬試驗防治成效之殘效性僅至一週達100%死亡率。 室內模擬試驗防治成效之殘效性可至8週達100%死亡率。 室外田野試驗之防治成效，每週施用 Bti 一次，實驗區相較對照區之誘蚊產卵指 數顯著下降，停止施藥後一週，實驗區之誘蚊產卵指數則迅速回升高於對照區。室內 田野試驗之防治成效，於 24 小時死亡率之殺滅效果達 100%；其殘效性至少 8 週以上之 24 小時死亡率達 100%。 Bti得以做為迅速毒殺登革熱病媒蚊幼蟲之生物性殺蟲劑。室外田野防治應每週施 用Bti一次為有效。室內防治成效之殘效性皆較室外為長。故建議施用Bti於室內得較 好之殘效期，且Bti於飲用水中為安全(WHO, 1999)，使用於大型儲水系統亦可安心。本 實驗蘇力菌殺蟲劑為水散劑型，適用於大範圍噴灑，可用於無法傾倒、難以處理之積 II.
(4) 水處。 關鍵詞: 登革熱、蘇力菌以色列亞種、埃及斑蚊. III.
(5) Simulation and Field Studies of Bacillus thuringiensis subsp. israelensis against dengue vectors Advisor:Dr.Hsiu-Hua Pai Department (Institute) of Kinesiology, Health ,and Leisure Studies, National University of Kaohsiung Student:Pei-Jung Tsai Department (Institute) of Kinesiology, Health ,and Leisure Studies, National University of Kaohsiung ABSTRACT Because Kaohsiung area of Taiwan carries out chemistry control against dengue fever for a long time, these vectors have been resulted in resistance of pyrethrum. Bacillus thuringiensis subsp. israelensis (Bti) is a biological insecticides of safety and environmental protection. This study was designed to the effectiveness and residual efficacy of Bti against dengue vectors. Aedes aegypti susceptible strain (Bora-bora), Ae. aegypti and Ae. albopictus wild strains of Kaohsiung was released to containers filled with 60 L dechlorinated tap water indoor and outdoor. Each set of experiment was performed in five times. The usage of Bti water dispersible granular formulation VectoBac (WDG) was dispersed each dosage of 4 g/1000 L and 8 g/1000 L, respectively. The control groups were treated without the dosage. Lethal time 50% (LT50) and 24 h and 48 h mortality were determined to assess the killing effectiveness. In intervals of 7 days, the dengue vectors were added to determine LT50 and 24 h and 48 h mortality for the assessment of residual effects (water was filled 60 L). LT50 were calculated according to Finney Probit Analysis and mortalities were corrected with the Abbott’s formula. Outdoor field trials selected apartment type residential area and the similarity of the two neighboring blocks as the experimental area and control area to assess the ovitrap index of before treatment, during the application and after treatment. During the treatment spraying once a week for 6 times to water and non-water area. Indoor field trials selected the basement of 30 water places, spraying or putting Bti to control Aedes aegypti larvae, and observed 24 hours larvae mortality after Bti treatment. To assess killing effect, observed mosquito breeding situation weekly. Bti against larvae of dengue vectors to both outdoor or indoor simulation tests are less than IV.
(6) half the time half an hour death, for the immediate killing effect; outdoor simulation results of the residual effect of control only to a week, 100% mortality. Control laboratory experiment of the effectiveness of the residual effect of 8 weeks can be to 100% mortality. Outdoor field trials of the effectiveness of prevention, application of Bti once a week, compared with the control experiment area area ovitrap indices decreased significantly, one week after cessation of spraying the experimental area ovitrap index higher than the control area. Indoor field tests of control effectiveness, the killing effect of 24-hour mortality was 100%; the residual effect of at least 8 weeks or more 24-hour mortality rate was 100%. Bti can be used as quickly kill dengue vectors of biological pesticides. Outdoor field control should be effective once a week with Bti application. The residual effects indoor were longer than outdoor. It suggested that a better Bti application in the interior to reach good residual effects. Bti in the drinking water is safety (WHO, 1999). The Bti formulation evaluated in this study should be suitable for application to large-scale spraying, especially in stagnant water bodies. Keyword: Dengue fever, Bacillus thuringiensis subsp. israelensis (Bti), Aedes aegypti. V.
(7) 目. 錄. 誌謝…………………………………………………………………………………………..I 中文摘要……………………………………………………………………………………II 英文摘要…………………………………………………………………………………….IV 目錄…………………………………………………………………………...……………..VI 表目錄…………………………………………………………………………………...VIII 圖目錄………………………………………………………………………………...……..IX 頁數. 第壹章 緒論……………………………………………………………………1 第一節 第二節 第三節 第四節. 研究背景……………………………………………………………………………1 研究動機……………………………………………………………………………1 名詞釋義……………………………………………………………………………3 研究目的……………………………………………………………………………3. 第貳章 文獻探討………………………………………………………………4 第一節 第二節 第三節 第四節 第五節. 登革熱簡介…………………………………………………………………………4 歷年台灣地區登革熱流行情形……………………………………………………6 病媒蚊防治方法……………………………………………………………………7 登革熱病媒蚊密度之監測方法 …………………………………………………10 蘇力菌概述………………………………………………………………………11. 第参章 研究架構與方法……………………………………………………13 第一節 研究內容及流程 …………………………………………………………………13 第二節 材料與方法………………………………………………………………………14 第三節 統計分析…………………………………………………………………………21. 第肆章 研究結果……………………………………………………………22 第一節 第二節 第三節 第四節 第五節 第六節. 室外模擬試驗……………………………………………………………………22 室內模擬試驗……………………………………………………………………23 室外田野試驗……………………………………………………………………25 室內田野試驗……………………………………………………………………26 蘇力菌以色列亞種之效價檢定…………………………………………………27 蘇力菌以色列亞種UV照射後毒殺能力測定……………………………………27. VI.
(8) 頁數. 第伍章 討論……………………………………………………………29 第一節 第二節 第三節 第四節 第五節. 室外實驗室模擬實驗………………………………………………………29 室內實驗室模擬實驗………………………………………………………30 室外田野模擬實驗…………………………………………………………32 室內田野模擬實驗…………………………………………………………35 蘇力菌以色列亞種UV照射後毒殺能力測定結果…………………………37. 第陸章 結論……………………………………………………………39 第柒章 建議……………………………………………………………40 參考文獻 ……………………………………………………………………………41 附件…………………………………………………………………………………102. VII.
(9) 表. 目. 錄. 頁數 表 1. 以室外田野實驗施藥日期及水量與所需施藥量 …………………………………44 表 2. 以 Bti 對埃及斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估:半數致死時間(LT50)(分) …45 表 3. 以 Bti 對埃及斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估:24 小時死亡率(％)…………46 表 4. 以 Bti 對埃及斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估:48 小時死亡率(％)…………47 表 5. 以 Bti 對白線斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估:半數致死時間(LT50)(分) …48 表 6. 以 Bti 對白線斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估:24 小時死亡率(％)…………49 表 7. 以 Bti 對白線斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估:48 小時死亡率(％)…………50 表 8. 以 Bti 對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估:半數致死時間(LT50)(分) …51 表 9. 以 Bti 對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估:24 小時死亡率(％)…………52 表 10. 以 Bti 對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估:48 小時死亡率(％) ………53 表 11. 以 Bti 對白線斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估:半數致死時間(LT50)(分)…54 表 12. 以 Bti 對白線斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估:24 小時死亡率(％) ………55 表 13. 以 Bti 對白線斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估:48 小時死亡率(％) ………56 表 14. 以 Bti 對孳生斑蚊室外田野試驗之功效評估:誘蚊產卵指數 …………………57 表 15. 以 Bti 對孳生斑蚊室外田野試驗之功效評估:控制率 …………………………58 表 16. 以 Bti 4 公克/1000 公升劑量對埃及斑蚊幼蟲室內田野試驗之功效評估 ……59 表 17 . 以 Bti 8 公克/1000 公升劑量對埃及斑蚊幼蟲室內田野試驗之功效評估……62 表 18 . 以 Bti 4 公克/1000 公升劑量對埃及斑蚊幼蟲室內田野試驗之功效評估:有效 期限…………………………………………………………………………………………65 表 19. 以 Bti 8 公克/1000 公升劑量對埃及斑蚊幼蟲室內田野試驗之功效評估:有效期 限……………………………………………………………………………………………66 表 20. 以 Bti 4 公克/1000 公升劑量對埃及斑蚊幼蟲室內田野試驗之功效評估:幼蟲測 試……………………………………………………………………………………………67 表 21 . 以 Bti 8 公克/1000 公升劑量對埃及斑蚊幼蟲室內田野試驗之功效評估:幼蟲 測試…………………………………………………………………………………………70 表 23. 以過去蘇力菌相關文獻整理………………………………………………………34. VIII.
(10) 圖. 目. 錄. 頁數 圖 1. 以 Bti 4 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估:半數致死時 間(分)………………………………………………………………………………………76 圖 2. 以 Bti 8 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估:半數致死時 間(分)………………………………………………………………………………………77 圖 3. 以 Bti 4 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估: 24 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………78 圖 4. 以 Bti 8 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估: 24 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………79 圖 5. 以 Bti 4 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估: 48 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………80 圖 6. 以 Bti 8 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估: 48 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………81 圖 7. 以 Bti 4 公克/1000 公升對白線斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估:半數致死時 間(分)………………………………………………………………………………………82 圖 8. 以 Bti 4 公克/1000 公升對白線斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估:半數致死時 間(分)………………………………………………………………………………………83 圖 9. 以 Bti 8 公克/1000 公升對白線斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估:半數致死時 間(分)………………………………………………………………………………………84 圖 10.以 Bti 4 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估: 24 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………85 圖 11.以 Bti 4 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估: 48 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………86 圖 12.以 Bti 8 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室外模擬試驗之功效評估: 48 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………87 圖 13.以 Bti 4 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估:半數致死時 間(分)………………………………………………………………………………………88 圖 14.以 Bti 8 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估:半數致死時 間(分)………………………………………………………………………………………89 圖 15.以 Bti 4 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估: 24 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………90 圖 16.以 Bti 8 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估: 24 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………91 圖 17.以 Bti 4 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估: 48 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………92. IX.
(11) 頁數 圖 18.以 Bti 8 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估: 48 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………93 圖 19.以 Bti 4 公克/1000 公升對白線斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估:半數致死時 間(分)………………………………………………………………………………………94 圖 20.以 Bti 8 公克/1000 公升對白線斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估:半數致死時 間(分)………………………………………………………………………………………95 圖 21.以 Bti 4 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估: 24 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………96 圖 22.以 Bti 8 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估: 24 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………97 圖 23.以 Bti 4 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估: 48 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………98 圖 24.以 Bti 8 公克/1000 公升對埃及斑蚊幼蟲室內模擬試驗之功效評估: 48 小時死亡 率(％)………………………………………………………………………………………99 圖 25. 以 Bti 對孳生斑蚊室外田野試驗之功效評估:誘蚊產卵指數…………………100 圖 26. 以 Bti 對孳生斑蚊室外田野試驗之功效評估:控制率…………………………101. X.
(12) 第壹章. 第一節. 緒論. 研究背景. 登革熱被認為是全球人類最重要的蟲媒攜帶性病毒疾病之一(Chansang et al., 2004, Gubler, 1989)。登革熱主要發生於熱帶以及亞熱帶地區，而登革熱疫情打擊許 多熱帶及亞熱帶國家安全及削弱在觀光及經濟上之發展前景(Chansang et al., 2004)。 而台灣地處亞熱帶，氣候適合蚊蟲孳生，再加上近 年來國際交通之發達，國際間經濟貿 易往來頻繁，國人赴外旅遊工作，以及外籍勞工與外籍配偶的日益增加之因素，台灣更 為重要的交通樞紐，許多疾病便易從國外進入台灣本土，每年都有境外移入的病例(行 政院衛生署疾病管制局, 2006)。 登革熱在民國三十一年曾在台灣發生大流行，估計當時六百萬人口約有五百萬人 罹患傳遍全台灣。台灣屏東琉球鄉又於1981 年(民國70年)爆發登革熱流行。此後，每 年除了境外移入病例外，南台灣也都有小幅的登革熱流行的紀錄，2002 年(民國91年) 確定病例甚至高達五千三百多例。從台灣近年來登革熱流行的趨勢來看，每隔幾年便會 有一次超過百人的大規模流行，而且這些年的流行累積了許多曾經罹患登革熱的病人， 未來若是再次發生大規模的流行，出現登革出血熱症狀的病人將會較以往更多，對於民 眾的健康、生命安全將是一大威脅，故有進行登革熱防治之必要。. 第二節. 研究動機. 目前沒有一有效的登革熱疫苗或治療方法，因為缺乏疫苗下，所以登革熱的防制還 是必須仰賴殺蟲劑來控制病媒蚊(Fansiri et al., 2006, Russell et al., 2003)。由 於埃及斑蚊、白線斑蚊通常孳生於屋內戶外之各種人工容器中(Mahilum et al., 2005)， 1.
(13) 故其多孳生於人口密集處(行政院衛生署疾病管制局, 2006b)。目前防治蚊蟲仍然以化 學藥劑為主，然而長期使用化學殺蟲劑的結果，會漸增蚊蟲對於藥劑之抗藥性，反而會 減低藥劑的防治效果(Chansang et al., 2004; Hargreaves et al., 2000, 林等人, 2003)。基於環境安全之考量，化學性殺蟲劑並非防治病媒蚊之最佳選擇(陳維鈞, 1988)。 基於安全性及避免環境污染情形惡化，甚至破壞自然環境平衡，以及對生態動物產 生危害，故其議題應建立起必須應積極尋求並建立起其他有效之長期、大規模的永續因 應防治策略(Chansang et al., 2004, Fillinger and Lindsay, 2006, Fillinger et al., 2003)。 登革熱病媒蚊雖可藉噴灑殺蟲劑消滅，但仍應以孳生源清除為主(Chansang et al., 2004)。因為成蚊飛行速度快、移動範圍廣，噴灑藥劑難以完全消滅成蚊(Yohannes et al., 2005)；而孳生源（積水容器）內之幼蟲（孑孓）集中，容易清除(Killeen, et al., 2002)。 在成蚊散佈而危害到人類性命之前，於幼蟲階段就先予以清除，爾後不讓病媒蚊有繁殖 下一代之機會(Fillinger & Lindsay, 2006)。在防治工作上，從孳生源著手為其治本 之道，病媒幼蟲剷除以防範未然，實為防治登革熱之最根本方法(Fillinger, et al., 2003; 行政院衛生署疾病管制局, 2006b)；過去登革熱孳生源清除遇到的問題，常因民 眾的態度及行為上未能配合，無法從根本做起，造成病媒蚊指數仍然居高不下，且因公 寓之地下室為大家所共同持有，故若地下室發生積水情形，居民多無法齊心合力將將積 水地下室的積水清空排出，忽視了其可能潛在性大型孳生源，對於此種龐大難以傾倒之 孳生源，或無法清除的孳生源，以投入蘇力菌以色列亞種之藥劑或以噴灑蘇力菌以色列 亞種之藥劑等方式，這種方便、簡單又快速的方式，來斷絕感染源路徑實為最佳的防治 方法。. 2.
(14) 第三節 名詞釋義 一、致死時間(Lethal Time, LT)： 生物體因攝入毒性物質或其他化學藥劑(不論經由何種途徑),達死亡所需之時間； 但致死時間與攝入劑量有關。 二、半數致死時間(Lethal Time, LT 50 )： 某種劑量或濃度殺蟲劑，殺死半數族群所需時間。. 第四節 研究目的 一、 (一). 實驗室模擬實驗 室外. 1.評估蘇力菌以色列亞種對抗登革病媒之殺滅效果。 2.評估蘇力菌以色列亞種對抗登革病媒之殘效性。 (二). 室內. 1.評估蘇力菌以色列亞種對抗登革病媒之殺滅效果。 2.評估蘇力菌以色列亞種對抗登革病媒之殘效性。 二、 (一). 田野評估實驗 室外. 1.評估蘇力菌以色列亞種對抗登革病媒之殺滅效果。 2.評估蘇力菌以色列亞種對抗登革病媒之殘效性。 (二). 室內. 1.評估蘇力菌以色列亞種對抗埃及斑蚊之殺滅效果。 2.評估蘇力菌以色列亞種對抗埃及斑蚊之殘效性。. 3.
(15) 第貳章. 文獻探討. 第一節 登革熱簡介 一、疾病概述 登革熱俗稱「天狗熱」或「斷骨熱」，登革熱稱為典型登革熱（classic dengue） 或稱原發性登革熱（primary dengue），及登革出血熱（dengue hemorrhagic fever， DHF），或登革休克症候群（dengue shock syndrome， DSS）。登革熱病媒蚊種 類，台灣 主要病媒蚊傳播登革熱有埃及斑蚊 Aedes aegypti 及白線斑蚊 Aedes albopictus。埃 及斑蚊分佈於嘉義布袋以南，屏東恒春以北地區；而白線斑蚊則分怖全島各地。故八十 四、八十五年台北縣市登革熱是由白線斑蚊傳播的，而高雄市登革熱本土確定病例則由 埃及斑蚊或白線斑蚊傳播的。另因為埃及斑蚊傳播登革熱的能力較白線斑蚊為強(Chung & Pang, 2002)，高雄市埃及斑蚊及白線斑蚊皆同時存在，都可能為媒介而傳播登革熱； 埃及斑蚊蚊傳播登革熱的主要病媒，而白線斑蚊為次要的傳染媒介(Mahilum et al., 2005)。入夏後氣溫上升,加上雨季降雨量增加等氣候變化,故高雄風土氣候上提供了登 革熱絕佳的傳播條件，將使百萬人陷於登革熱等傳染病的威脅下。埃及斑蚊主要孳生於 人工容器及人為積水處，喜歡棲息在室內，如懸掛的衣物、窗簾、布幔、家具及其他黑 暗的地方；在室外如房子周圍之雜物堆、草叢附近、防火巷、菜園、樹蔭下、涼亭下等 陰涼處所。白線斑蚊除了孳生於人工容器外，還可孳生於天然容器如樹洞、竹筒、棄軸 及椰子殼。成蚊吸食植物汁液，以維持生命，雌蚊吸血以獲得卵巢卵子發育所需之蛋白 質。 黃病毒科（Flaviviridae）黃病毒屬（Flavivirus）的登革病毒亞屬，登革病毒亞 屬裡共有四種登革病毒，它們依抗原性的不同分別稱為第一、二、三、四型。登革病毒， 4.
(16) 只能存於人、猴及病媒蚊之體內。且病毒必須藉由病媒蚊叮咬才能由人傳給人。人被帶 有登革病毒的病媒蚊叮咬而感染，發病前 1 天至發病後 5 天間，病人血液中有病毒活動， 稱之為病毒血症期（viremia） 。病媒蚊經叮咬病毒血症期的病患 8～12 天後，則具有終 生傳染病毒的能力。(行政院衛生署疾病管制局, 2004, 2005, 2006a, 2007; 黃高彬, 1997)。 二、臨床症狀 (一)典型登革熱 前驅症狀為在發燒的數小時至 12 小時前，可能會有全身倦怠、頭痛、厭食、疼痛、 僵硬、臉部潮紅、發疹等。隨後可能會發燒體溫驟然升高至 39℃~40℃，然後持續 3~6 天。有時會呈現雙峰型的發燒，即於約第三天起體溫下降 1~2 天後又再度發燒 2~3 天。 在發燒的同時頭痛將更為劇烈，另有背痛、肌肉、骨頭、關節之劇痛，甚至轉動眼球或 按住眼球時，後眼窩會感到特別疼痛。約於第 4~6 日會有明顯的疹子出現，先從手腳開 始進而擴散至全身。但有些病患會有非典型的發疹，也有不發疹的。皮疹於發燒末期或 至退燒後消退。在典型登革熱，小孩子與老人罹患率較成年人低；致死率低於 1％。 (二)登革出血熱或登革休克症候群 嚴重而可能致命的出血徵候乃至休克為特徵者，為登革出血熱或登革休克症候群。 若病人曾感染過其他型之登革病毒，再次感染時可能因為抗原與抗體反應而引起急遽惡 化。當交叉感染時病人會顯得食欲不振、噁心、腹痛、倦怠，且出現明顯之出血現象， 血壓會下降甚至休克。登革出血症特稱為血漿滲出，出血現象例如:血壓帶試驗陽性、 皮下點狀出血、注射處紫斑或瘀血甚至出血不止、鼻腔出血、牙齦出血、解黑便。由於 血漿滲漏的現象，而表現在臨床上呈現肝臟腫大及肋膜腔積水和腹水，身體多處有水腫 現象。當血漿甚出量很多時，會引起低血容性的休克，病人會四肢冰冷、皮膚濕涼、發 紺，這種休克即稱之為登革休克症候群。出血型登革熱之罹患率以未滿一歲的嬰兒及二 5.
(17) 至八歲的小孩最高；若無適當治療，死亡率可達 15 ～ 50 ％以上。如此儼然成為嚴重 的公共衛生問題(行政院衛生署疾病管制局, 2004, 2005, 2007; 黃高彬, 1997; 葛應 欽, 1989)。. 第二節 歷年台灣地區登革熱流行情形 登革熱早年曾在 1915、1931、1942 年發生三次的全島性登革熱流行；1942 年的流 行約有六分之五人口（500 萬）感染，之後沉寂 40 年，於 1981 年屏東縣琉球鄉發生第 二型登革熱流行，而台灣本島於 1987、1988 年在大高雄地區爆發登革熱流行後，除台 北縣中和市(1995 年，179 例)、台中市(1995 年，8 例)、台北市(1996 年，10 例)三次 地方性流行發生於中北部外，其他各次地方性流行均發生於高雄縣市、台南市及屏東縣 居多，而且這些南台灣地區都已出現三至四型之登革熱流行，並都曾經發生過登革熱出 血性病例。而 2002 年較大規模的登革熱疫情，乃延續前一年之疫情為跨年流行，無法 有效阻斷疫情，登革熱將可能成為地方性疾病，每 年都會有登革熱出血性的病人及因而 死亡之病例亦會持續增加，2003 年發生 86 例本土確定病例，且其中 51 例為 3 月 8 日 以前在高高屏發生的病例，係 2002 年登革熱疫情之延續，8 月後僅有本土確定病例 35 例。2004 年於屏東縣及高雄縣市等發生本土病例計 336 例，無死亡病例。2005 年本土 病例累計 202 例，除了其中 12 例為 2004 年跨年疫情外（最後 1 例發病日為 2005 年 2 月 23 日） ，2005 年入夏後僅高雄市、台南市及高雄縣等三縣市發生本土登革熱流行， 另台南縣、嘉義市、彰化縣及屏東縣之個案，經疫情調查發現感染地均在高雄市、高雄 縣或台南市(行政院衛生署疾病管制局, 2006b)。由於登革熱防治經驗的累積及相關單 位的努力， 2007 年的流行疫情主要集中於台南市(1459 例)，2008 年於台北地區亦發生 地方性流行(台北市 20 例、台北縣 12 例)。但值得注意的是，登革熱境外移入病 例逐年 攀升，2008 年境外移入病例達 226 例，創 10 年來新高，東南亞登革熱疫情日趨嚴重， 6.
(18) 境外移入病例逐年增加致使登革病毒侵入台灣的相對危險性也隨之提高，2009 年高雄市 達 623 例，全台本土登革熱出血型 11 例中名死亡。(行政院衛生署檢疫防疫組, 2003; 行 政院衛生署疾病管制局, 2010; 林鼎翔, 2000)。. 第三節 病媒蚊防治方法 節肢動物傳播的疾病，其主要疾病防治法有數種。剋制病源，以藥劑治療患者或以 疫苗預防某些疾病。清除動物宿主，例如以殺蟲劑滅除鼠疫宿主。防治病媒，就其中以 病媒防治為最根本的方法。由於病媒的孳生習性及其分布廣泛，近年來，病媒管制的作 業程序，由單靠單一化學防治法逐漸趨向於綜合防治。病媒管制的目的係在降低病媒的 棲群密度，使其不再危害人體健康。欲完全滅絕一種病媒常是不可能的。為了杜絕病媒 蚊傳播的疾病，必須儘量減少病媒蚊與人體接觸的機會，防治病媒蚊的方法大致區分為 下列五類(周等人, 1989): 一、個人防禦：物理防禦法為在病媒與人類之間加一道物理性屏障，可使用蚊帳、紗門、 紗窗等來阻隔蚊蟲的進入。化學防禦則可使用化學驅避劑塗抹在皮膚或衣服上以達到驅 避蚊蟲的目的，如防蚊液。目前市售的防蚊液中，多含有DEET。 二、環境管理：界自然界環境的變更，以防止、限制、減少或除卻病媒的孳生。並為政 府目前所極力倡導的防治工作，藉由改善環境以達到減少蚊蟲孳生源之目的，如排水溝 的清理疏濬、廢水的排除、窪地的填充、清除容器積水等等，此效果雖不如使用化學藥 劑來的直接，孳生源之減少及環境衛生確是徹底根絕病媒蚊孳生的重要防治方法。 (一)住宅區環境管理須加強公共衛生教育，獲取居民合作來除滅降低病媒密度。如廢棄 小容器之適當處理，花瓶、水盤勤換水，至少每週一次， 排水溝之泥沙要常清除以保 暢通，清除溝槽邊緣之雜草，水井、水缸、水槽以及垃圾桶經常保持密蓋，水池、地 洞 及坑洞之填塞。 7.
(19) (二)社區環境管理，社區中的池塘、水槽，或街道旁的公共陰溝暗渠，及垃圾、汙水處 理設備，亦或工業液體廢物汙水等之處理需完善 (三)病媒自然孳生場所管理，如樹洞、竹筒可作簡單 塡塞或排水或海濱沼澤地區管理在 設計土地開發計畫及儲水建築工程時應徵詢病媒管制專家的意見。 (四)農業地區環境管理，稻田可實施間歇灌溉法，適當調節稻田濕潤，逐漸使稻田 不適 合蚊蟲滋生，可滅除蚊蟲孳生。– 三、化學藥劑防治： (一)殺蟲劑：無機殺蟲劑源自礦物鹽類如巴黎綠（Paris green）與有機殺蟲劑衍自於 動植物或化學合成品，如DDT（Dichlorodiphenyltrichloroethane）為早期使用的殺蟲 化學藥劑，因蚊蟲開始對多種殺蟲劑產生抗藥性且某些殺蟲劑對人類及其環境產生危害 之威脅，近來許多藥劑被禁用或在使用上受到嚴格限制。 (二)除草劑：水生雜草常為病媒蚊幼蟲之棲息處，常見的除草劑如Phenoxylene 30（防 治水萵苣）、Pentachlorophenol(防治蜈蚣萍)、 Diguat(防治布袋蓮)與Dalapon(防治 螢蘭)等。(3)昆蟲荷爾蒙：最為熟知的利用性費洛蒙（Sex pheromone）來誘使成蟲進 入捕捉器內或趨食毒餌、昆蟲發育抑制劑阻撓蚊子幼蟲化成蛹，另外像是Methoprene可 刺激青春賀爾蒙，阻撓蚊幼蟲化蛹，或蛹 不能化為成蚊，或羽化後之雄蚊無法正常交配。 Diflubenzuron可抑制昆蟲幾丁質之合成，而妨害其脫皮。昆蟲發展抑制劑並不對標的 害蟲直接有毒，而是使蟲體無法正常的變態而致死。 四、生物防治：為直接或間接使用侵襲某種害蟲之自然天敵，如捕食性生物捕食害蟲， 但不進入害蟲體內維生。而寄生性天敵則寄生於宿主體內或體表，由寄主供應其食物， 例如細菌及毒素能使宿主引起疾病的病原體，以增加害蟲棲群的死亡率。 在捕食性天敵方面，利用蚊蟲的天敵如蜻蜓幼蟲、巨蚊幼蟲、大肚魚等捕食蚊幼蟲， 或蝙蝠、青蛙、守宮等捕食蚊的成蟲。但只有捕食幼蟲之魚類與巨蚊有實用價值。 8.
(20) 捕食性魚類：利用捕食幼蚊之魚類以防治蚊蟲。例如大肚魚，雌魚食量大於雄魚，防治 幼蚊所需大肚魚之密度及數目，需視當地情況而異。溪流或灌溉溝，每公尺長之距離需 一條魚；而池塘或稻田，每平方公尺需 兩條魚。水量太少、水流太湍急或水質太污染均 不適用。且大肚魚會吃它種幼魚，故引用時不可不慎。另一魚類，孔雀魚較少被養在污 水內，對當地之原生魚種較少威脅，防治時池中孔雀魚之密度大於每平方公尺十條時， 幼蚊將無法孳生。捕食性蚊蟲:只有巨蚊屬及掠蚊亞屬。這兩類蚊不會傳播任何疾病， 其幼蟲會捕食其他種類之幼蚊，食物不足時也會互相殘殺。 足時會互相殘殺。 另可利用病原菌及寄生蟲來增加蚊蟲的死亡率，選用病原體菌或寄生蟲進行病媒防 治前，應先確認其安全性，對人畜無害。例如細菌-蘇力桿菌 (Bacillus thuringiensis serotype H-14)在病媒防治之生物製劑中最先被使用，且已被證實對家蚊、斑蚊與蚋幼 蟲的防治有效。其作用機制，菌體形成的孢子可產生毒蛋白結晶體，經感受性昆蟲取食 後，其口器及腸部會麻痺，且腸的上皮組織被破壞， 數小時至三個星期內死亡，視取食 劑量而定，僅口服有效，不具觸毒作用。蘇力菌以色列亞種用於登革熱病媒幼蟲孑孓防 治，商業上生產蘇力菌，係運用一大型發酵槽發酵，當桿菌在最適環境下分裂增殖，每 一細胞內部各產生一個孢子，以及結晶之毒蛋白稱之「內毒素endotoxin」。 另一為球狀桿菌 (Bacillus sphaericus)經證實適合工業化生產，且用於大規模幼 蚊防治，尤其是家蚊屬之幼蟲。作用機制為毒素位於菌體之細胞壁及孢子內，經蚊幼蟲 取食後，毒素釋出使幼蚊中毒死亡。 真菌，如：體腔真菌屬、綠僵屬、蚊菌屬等。體腔真菌屬為較普遍之蚊蟲致病菌， 可破壞幼蚊體內發育為成蚊所需之脂肪體，導致幼蚊死亡。 原生動物，微孢子蟲目之幾個屬，如： Nosema, Thelohania, Lankesteria 等。. Nosema algerae 被認為是防治蚊蟲最有希望之微孢子蟲。 線蟲，其中食蚊索蟲被認為是防治蚊蟲最有效之線蟲。成蟲自由生活於水中，其卵 9.
(21) 孵化為寄生前期，並於一兩天內穿透幼蚊之幾丁質表皮而進入血體腔，約八天發育成熟 為寄生後期，而鑽出體外，致使幼蚊體液外 流而死亡。食蚊索蟲之棲息水域需為永久性 或半永久性之清水，水流緩慢，水溫不超過40℃。熱帶家蚊會產生抗性而降低大規模使 用索蟲之防蚊效果之價值。 效果 五、遺傳防治：利用各種方法處理蚊蟲以改變或取代基因結構，進而降低蚊蟲的繁衍能 力為目的，主要為輻射（Radiation）、化學不育劑（Chemosterilization）、細胞質不 親和(cytoplasmic incompatibility)、雜種不孕（Chromosome translocation）以及 染色體易位（Chromosome translocation）等。. 第四節 登革熱病媒蚊密 度之監測方法 一、幼蚊調查 (一)住宅指數(House index)：斑蚊幼蟲孳生之住宅之百分比 (二)容器指數(Container index)：斑蚊幼蟲孳生之積水容器之百分比 (三)布氏指數（Breteau index）： 每一百戶住宅，發現有孳生斑蚊幼蟲之積水容器總 數 (四)幼蟲指數(Larval index):所有受檢查住家中，檢出斑蚊幼蟲總數之百分比 (五)成蚊調查：在蚊子活動期間(清晨或是傍晚)以人體(最好有三個人)做誘餌，為時三 個小時，採集叮咬或是停留在人體上之成蚊，其採集結果可以每人每小時有多少斑蚊成 蟲叮咬或停留表示之。 二、誘蚊產卵調查 以黑色塑膠誘蚊產卵器引誘斑蚊產卵陷阱，置於幼蟲發生場所附近陰暗處，引誘病 媒蚊產卵，以估計族群密度，此法在族群密度很低時仍然有效。設置產卵陷阱後，每週 需檢查一次，並將採得之卵 以塑膠袋封好，攜回觀察再以產卵器內有無產卵或是幼蟲 10.
(22) 之陽性百分率表示之，亦即是誘蚊產卵指數（Ovitrap index）。. 第五節. 蘇力菌概述. (一)分類:細菌類的微生物殺蟲劑，主要多為桿狀的桿菌屬（Bacillus）以及. Enterobacteriaceae 科、Micrococcaceae 科、Pseudomonadaceae 科以及 Bacillaceae 科。約有１００種的細菌會為害昆蟲，其中有五種研究較為詳盡徹底，被廣泛用為害 蟲防治，即 Bacillus thuringiensis 、B.thuringiensis popilliae 、B.. thuringiensis kurstaki、B.lentimorbus 、B.sphaericus 、B.larvae (曾經洲, 1998)。其主要特性為具專一性，寄主範圍狹窄，對非標的生物如人及害蟲天敵無毒、 無害。 (二)分布位置:蘇力菌分布於全球七大洲，可從罹病昆蟲、各種土壤、不同的植物葉片、 源自植物的材料、淡水、海水、潮間帶的沖積物、哺乳類、爬蟲類和鳥類之動物的排 泄物、活化污泥等之中分離獲得(曾經洲, 1998)。於 1976 年Goldberg 及Margalit 在 以色列的沙漠乾河床發現此菌種(Goldberg L.J. & Margalit, J., 1977)。 (三)作用機轉:蘇力菌是一種昆蟲病原細菌，屬好氧性革蘭氏陽性桿菌，在營養缺乏或 環境不良的時候，會進入不分裂的半靜止期，或分化形成孢子和殺蟲結晶蛋白，這種 毒結晶蛋白對某些生物具有特殊的毒效。蘇力菌殺死昆蟲的作用，當昆蟲幼蟲吃下蘇 力菌時，毒結晶蛋白於昆蟲腸道中在高鹼性腸液和蛋白質分解酶的作用下，以致毒蛋 白結晶被分解活化變成毒素。這些具有活性的毒素和昆蟲中腸的腸壁上皮細胞結合， 會使中腸細胞麻痺，毒蛋白成份隨即攻擊害蟲腸壁，阻斷酵素系統，干擾正常的消化 作用，迫使細胞破孔造成昆蟲腸道崩解，而使得腸內的物質進入體腔、血淋巴。此一 初步中毒，使得害蟲停止進食，甚至於麻痺，然後細菌孢子經由此腸破洞侵入害蟲體 腔及其他組織，在血淋巴內繁殖數小時，引起血淋巴中毒、敗血症，迅速將害蟲殺死 11.
(23) 或數日後死亡。中毒的昆蟲迅速停止攝食而死亡(Khetan, 2001; O'Leary, 1989; Russell et al., 2003; 曾經洲, 1998, 2005; 曾經洲、侯豐男, 1994)。 (四)優點；蘇力菌在土壤中不移動，也不會滲入地下水而影響到地下水。蘇力菌產生 的殺蟲結晶毒蛋白的殺蟲效果具有專一性，對目標昆蟲以外的生物完全無副作用，蘇 力菌對脊椎動物無毒，尤其哺乳動物的胃酸足以破壞其毒性；它的孢子不會在肺中發 芽，不致造成病害，大量吸入時所造成的反應，僅如同一般無害異物粒子大量入侵的 反應。對目標昆蟲以外的生物完全無副作用，所以不會像化學殺蟲劑對標的害蟲以外 的生物造成傷害(Chansang et al., 2004)。而且使用蘇力菌最大的好處就是不會對標 的害蟲產生抗藥性之問題(Fillinger et al., 2003)。蘇力菌可以直接施用於食用作 物上，對人體無害。蘇力菌主要是針對鱗翅目害蟲或雙翅目、鞘翅目害蟲的防治產品。 因為蘇力菌的專一性和作用機制，對於環境友善，並不需要對人類的行為或是水和土 地的重要資源做管理改變，殺幼蟲劑的設備是簡單(Fillinger et al., 2003)且便宜 的，及使用殺幼蟲劑的技能容易(Mukabana et al., 2006, Fillinger and Lindsay, 2006, Fernandez et al., 1998)。是一種安全無殘毒又環保，是一種符合衛生健康及環境保 護要求的理想殺蟲劑及有害生物綜合管理較佳的防治方法(Khetan, 2001; Mulla et. al., 1999)。 (五)劑型:蘇力菌製成許多不同劑型，水散粒劑型、玉米穗硬粒型、懸浮液型、磚型、 藥丸及藥片之劑型。而蘇力菌水散粒劑型相較於其他劑型之優點，增加耐儲時間，藥劑 為乾燥型式。減輕重量，運輸經濟。容易混合於水中作噴灑，亦可直接施藥。可透過多 種機械類型容易噴灑，可為氣霧、水霧細粒水滴做大範圍登革病媒防治的噴灑。使用效 果迅速，24 小時內死亡。並和其他劑型同樣之優點就是對非目標生物無害，具高專一性。 本研究所選用之藥劑相較於其他劑型之額外的優點，在運輸上經濟，便於儲存，及 保存期限長(Russell et al., 2003)。 12.
(24) 第参章. 研究架構與方法. 第一節 研究內容及流程 室外模擬試驗評估 殺滅效果與殘效性 模擬試驗評估蘇力菌以色列 亞種對抗登革病媒蚊. 室內模擬試驗評估 殺滅效果與殘效性. 模擬試驗結果 整理與分析. 建立田野試驗方法 室外田野試驗評估 殺滅效果與殘效性 田野試驗評估蘇力菌以色 列亞種對抗登革病媒蚊. 室內田野試驗評估 殺滅效果與殘效性. 田野試驗施以蘇力菌以 色列亞種對抗登革病媒 之成效評估. 13.
(25) 第二節 材料與方法 一、室外模擬試驗 (一)供試蚊蟲:室外實驗室模擬實驗研究各試驗之斑蚊幼蟲(附件一)。係以埃及斑蚊之 感性品系Aedes aegypti(Bora-bora)及埃及斑蚊Aedes aegypti採自高雄市三民區之野 外品系和白線斑蚊Aedes albopictus全高雄不分區之野外品系，感性品系經由高雄市衛 生局疾病管制處(CDC)於實驗室繁殖繼代，已有上百代未接觸過殺蟲劑。另野外品系於 疾病管制處實驗室所繁殖培育第一子代之蟲卵。 (二)飼育方法:飼育蟲源以臺糖公司出品之維他酵母粉與豬肝粉以1 : 1 之比例混合作 為幼蟲飼料，每日餵食1~2次，將飼料粉至於盆中四個角落，每日清除水面的水膜，待 孑孓化蛹後取出置於水杯中，再放入蚊籠中（45×45×45cm），供給10％之糖水罐以供吸 食。另將小白鼠固定不能任意移動後，供雌蚊吸血，待兩日後以水杯(直徑6.5公分，高 7公分)內沿杯壁鋪入合適大小擦手紙，後加水至八分滿供其產卵，兩日後收起產完卵之 擦手紙陰乾後，再將產卵擦手紙放入水盆中孵化，三齡末期至四齡初期幼蟲為供給實驗 所用。於國立高雄大學建立起埃及斑蚊與白線斑蚊之生活史與繁殖循環，以供日後實驗 蚊蟲之所需(附件二與附件三)。 (二)供試藥劑:使用美國ValentBioSciences 所出品之蘇力菌水散劑型VectoBac (Valent BioSciences Corp, Illinois, USA)，VectoBac WG/WDG (Strain AM65-52)， 有效力價為3000國際標準毒物單位/公絲，Bacillus thuringiensis subsp. israelensis 後多以Bti稱之。 (三)實驗劑量:劑量 8 公克/1000 公升，即以每 0.48 公克 Bti/60 公升的水。劑量 4 公克 /1000 公升，則以 0.24 公克 Bti/60 公升的水;實驗時投入容器中。 (四)實驗容器與實驗地點:PPE容器內裝60公升的自來水。在國立高雄大學，室外模擬試 驗於建築物屋簷下，半暴露於陽光下，每組五重複其中三組較接近陽台走道外側，另兩 14.
(26) 組則於內側，皆未遮蓋，見附件四。 (五)實驗步驟:在蘇力菌以色列亞種殺幼蟲實驗的開始前，實驗容器都以清水清洗過。 所有容器內裝入 60 公升自來水，靜置 2 日以上待氯揮發後方得以試驗。各組試驗容器 中置入經實驗室飼養的 50 隻Bora-bora 品系和埃及斑蚊之幼蟲，隨後將Bti 藥劑散佈 遍及整個容器中。並不事前就先將Bti 藥劑混合於容器的水中。也不將Bti 藥劑施於容 器中的單一位置。每組處理五重複。另以不加入任何Bti 劑量之水為對照組。觀察試驗 並計數處理後第 10 分鐘、第 20 分鐘、第 30 分鐘、第 40 分鐘、第 50 分鐘;1 個小時、2 個小時、3 個小時、4 個小時、5 個小時、…、二十四小時及四十八小時幼體死亡個數， 得以計算半數致死時間LT 50 及 24 小時與 48 小時之死亡率。 分別觀察其48小時後存活的孑孓，移至另一清水器皿中，並供給酵母粉及豬肝粉之 混和飼料餵食孑孓，規律定期並持續觀察其是否成蛹乃至羽化。之後第7天、第14天、…… 以7天作為間隔，不予添加蘇力菌藥劑，用以同樣的水重複實驗，同樣得以計算半數致 死時間LT 50 及24小時與48小時之死亡率。以觀察蘇力菌以色列亞種藥效下降之崩落情 形。容器中水量維持於60公升，償還所蒸發的水量。 此實驗於當 60 公升的容器中出現 50﹪的幼蟲時結束。實驗過程為確定孑孓是否為 真正死亡，以竹籤輕微撥弄孑孓與以確認，如果孑孓有顫動，則孑孓還存活；反之，孑 孓死亡。若對照組之死亡率超過 20 % 則試驗要重做。實驗過程中不餵食，以減少因營 養或是代謝造成的變異。 (六)實驗期間: 埃及斑蚊幼蟲於 2008 年 8 月 11 日至 8 月 29 日進行測試；白線斑蚊幼 蟲於 2008 年 9 月 18 日至 10 月 9 日進行測試。 二、室內模擬試驗 室內模擬試驗與室外模擬試驗實驗步驟大致相同，惟實驗地點不同。材料與方法參 考室外模擬試驗。實驗地點在國立高雄大學，室內實驗室模擬實驗於建築屋內，無陽光 15.
(27) 直接曝射處，陰暗且無任何日光燈照明，皆未遮蓋，見附件五。 (一)實驗期間: 埃及斑蚊幼蟲於 2008 年 6 月 12 日至 12 月 3 日進行測試；白線斑蚊幼 蟲於 2008 年 9 月 18 日至 2 月 5 日進行測試。. 三、室外田野實驗 (一)供試藥劑:使用美國ValentBioSciences 所出品之蘇力菌水散劑型VectoBac (Valent BioSciences Corp, Illinois, USA)，VectoBac WG/WDG (Strain AM65-52)， 有效力價為3000國際標準毒物單位/公絲，Bacillus thuringiensis subsp. israelensis 後多以Bti稱之。 (二)實驗劑量:為對水域直接施藥劑量為 8g/1000L；對非水域施藥劑量為 500g/ha。 (三)實驗地點:針對於高雄市楠梓區五常里選以一人口稠密老舊公寓型住宅，興楠路 151 巷與 203 巷之間兩鄰近約 80 公尺且相似之區塊作為實驗區及對照區。兩者於建築結構、 人口密度、試驗面積極其相似。2 個區域皆為大樓式建築結構，建築物高度皆在 5 層樓， 並都有地下室，建築物附近有公園及停車場。 (四)評估工具:使用誘蚊產卵器為直徑 12.5 公分×高 17 公分為 2 公升裝之黑色有蓋之 塑膠圓桶，蓋上有一 4 公分的孔洞。在產卵器中盛水後內壁襯以白色擦手紙巾 2 張，加 入自來水約至桶之三分之二，上蓋，引誘斑蚊吸血後便會由蓋上孔進入產卵，蚊子所產 之卵便會黏附在擦手紙上，每週不間斷回收誘蚊產卵器中之產卵紙。對居民詢問，尋求 願意協助試驗進行誘蚊產卵器擺放，將誘蚊產卵器置於室外:如牆下、住戶間隔、防火巷 等地方擺放(附件六)。 (五)施藥前測、施藥期間與施藥後測評估方法:於蚊蟲密度調查前 7 天，延區塊周圍各 放置 50 個誘蚊產卵桶於遮陰處以監測當地病媒蚊密度。7 天後將誘蚊產卵器收回，計算 產卵桶隻陽性百分率。誘蚊產卵指數於施藥前持續觀察 7 週，其為施藥前測之誘蚊產卵 指數。於 5 月 9 日始至 6 月 14 日止每週一次連續進行 6 次噴藥，期間持續觀察誘蚊產 16.
(28) 卵指數，為施藥期間之誘蚊產卵指數。而後不再施藥並繼續觀察其誘蚊產卵指數之病媒 蚊密度之一個月變化，6 月 16 日至 7 月 7 日，為施藥後測之誘蚊產卵指數。回收之誘蚊 產卵器中之產卵紙進行蚊蟲密度調查，算出試驗區域誘蚊產卵指數，以陽性率（%）表 示之，評估施用藥劑前、後誘蚊產卵指數是否降低(Gunasekaran et al., 2002)。 誘蚊產卵指數控制率＝ ( 1 - (施藥後(%) / 施藥前(%) ) ) × 100% (六)使用機械:室外田野實驗使用機械為丸崎背負式動力噴霧機，容量 25L，噴嘴頭較 小，可伸入水溝蓋中(附件七)。另一為車載式高壓動力噴霧機，由於屋後溝巷道窄小， 由於背負式噴霧機難以進入，故以管線深入屋後溝內的巷間進行噴灑(附件八)。 (七)施藥方法: 1.水域:於其水域直接施藥，其中包含屋前溝及屋後溝。實驗區塊以捲尺測量長為125.85 公尺，寬為49.35公尺。屋前溝之水溝寬為0.5公尺，125.85公尺×0.5公尺為單邊區塊長 的水域面積以及49.35公尺×0.5公尺為單邊區塊寬的水域面積，故(125.85公尺×0.5公尺 +49.35公尺×0.5公尺)×2再乘以水深為屋前溝之水域體積；175.2平方公尺*水深為其實 驗區之屋前溝部分之水域體積。實驗區塊屋後溝有三段，以捲尺測量一為102.37公尺， 一為39.65公尺，另一為19.83公尺。屋後溝之水溝寬近0.2公尺，102.37公尺×0.2公尺 為一長的水域面積、39.65公尺×0.2公尺為一長的水域面積以及19.83公尺×0.2公尺為另 一長的水域面積，故102.37公尺×0.2公尺+39.65公尺×0.2公尺+19.83公尺×0.2公尺再乘 以水深為屋前溝之水域體積。32.4平方公尺×水深為其實驗區之屋後溝部分之水域體 積。對水域直接施藥劑量為8g/1000L。依該生物製劑的使用說明建議稀釋比例為 150-200L。 因建議稀釋比例為 200L，故將實驗區塊之屋前溝以 25 公尺為一等分一共作為 14 等分，長為 125.85 公尺約 5 分，寬為 49.35 公尺約為 2 分，共計 14 分；屋後溝以 25 公尺為一等分一共作為 6 等分，102.37 公尺約為 4 分，39.65 公尺與 19.83 公尺約為 2 17.
(29) 分。故實驗區塊共為 20 等分，若以最高水深 17 公分計算，每等分為 14.15 克。因建議 稀釋比例為 200L，所以同樣分作為 20 分，每等分 10 公升，故每約 25 公尺以 10 公升的 水加入生物製劑 14.15 克予以噴灑施藥。於 5/9 第一次施藥最高水深約為 17 公分，故 水域體積為 35360 公升，施藥 283g。5/16 第二次施藥最高水深約為 17 公分，故水域體 積為 35360 公升，施藥 283g。5/24 第三次施藥最高水深約為 15 公分，故水域體積為 31200 公升，施藥 250g。5/30 第四次施藥最高水深約為 17 公分，故水域體積為 35360 公升， 施藥 283g。 6/6 第五次施藥最高水深約為 17 公分，故水域體積為 35360 公升，施藥 283g。6/14 第 五次施藥最高水深約為 19 公分，故水域體積為 39520 公升，施藥 316g。共計 6 次施藥， 見表 1。 2.非水域:對非水域區域做地面噴藥，包含堆積的垃圾、輪胎、屋頂排水溝、植披、葉 梗、樹洞、落葉、地面的水窪、帆布等。實驗區塊以捲尺測量長為 125.85 公尺，寬為 49.35 公尺。實驗涵蓋面積 125.85 公尺×49.35 公尺=6210.6975 平方公尺約 0.62 公頃。 為對非水域施藥劑量為 500g/ha。依該生物製劑的使用說明建議稀釋比例為 30-60L。故 每次施藥量為 0.62ha×500g/ha=310g。 因建議稀釋比例為 30-60L，將實驗區塊週圍以 25 公尺為一分作為 14 等分，長為 125.85 公尺約 5 分，寬為 49.35 公尺約為 2 分，共計 14 分。生物製劑每等分藥量 22.14 克，建議稀釋比例為 30-60L，所以取其 42 公升為稀釋比例，每等分 3 公升，故每約 25 公尺以 3 公升的水加入生物製劑 22.14 克予以噴灑施藥。 於實驗區噴藥當日皆為晴天無雨，於噴藥後與下次噴藥日之間皆有下雨情形，於表 14。 (八)實驗期間: 施藥前測為 3 月 24 日至 5 月 5 日，施藥期間為 5 月 9 日至 6 月 14 日， 施藥後測為 6 月 16 日至 7 月 7 日。 18.
(30) 四、室內田野試驗: (一)供試藥劑:使用美國ValentBioSciences 所出品之蘇力菌水散劑型VectoBac (Valent BioSciences Corp, Illinois, USA)，VectoBac WG/WDG (Strain AM65-52)， 有效力價為3000國際標準毒物單位/公絲，Bacillus thuringiensis subsp. israelensis 後多以Bti稱之。 (二)實驗劑量:對積水地下室之水域直接施藥劑量為 8g/1000L。 (三)實驗地點:長期以來高雄市即為登革熱好發之地區，由於住宅老舊、地下室防水連 續壁破損等工程或結構性問題而造成為數甚多的地下室積水狀況，使得形成當地社區孳 生登革熱病媒蚊的溫床，於模擬實驗結果中，得知 Bti 於陰暗處的殘效性較光亮處為佳， 故於室內田野模擬實驗選以積水地下室為施藥對象。詳細資料見表 20 至表 23。 (四)實驗步驟:在發現積水點時，進行水量估計，使用 BOSCH 雷射測距儀做水平測量， 以筷子或長棍插入水中，以丈量筷子或長棍之水痕得知其水深，經計算以估計其積水體 積水量及應施生物製劑之藥劑量。另以一公升之水杯取其積水數公升，依其積水量計數 其中內含蚊蟲幼蟲數，並帶回觀察其蚊種。所捕獲之蚊蟲幼蟲尚未發現白線斑蚊，故以 埃及斑蚊為主。而後視其水質乾淨與否及水量多寡，大範圍之水域需以器械進行噴灑， 可取其積水添入背負式動力噴霧機並加以所需藥量混和；若積水區域過小且集中，如陰 井等，則直接倒入藥劑，不另行噴灑。 (五)成效評估:施藥於 24 小時後觀察其蚊蟲死亡率評估其殺滅效果，同樣以一公升之水 杯取其積水數公升，觀察蚊蟲是否已死亡。施藥後每週定期觀察其是否有蚊蟲孳生之情 形，也是以水杯取其積水，觀察有無捕獲孑孓，以評估其殘效性，並確保實驗區塊有無 外力干擾，如抽水或投以食蚊魚等其他防治情形發生。 為得知所施藥之積水地下室的藥效崩解的情形，所以於施藥後多時為觀察其藥效變 化，故投以埃及斑蚊幼蟲以評估其藥效降低情形，每個積水地下室置入埃及斑蚊幼蟲 19.
(31) Bora-Bora 品系 30 隻，約三齡末期至四齡初期幼蟲為供給實驗所用，每組三重複，觀察 記數其 24 小時後之死亡隻數，計算 24 小時死亡率。 (六)實驗期間:室內田野實驗於 2009 年 3 月 19 日至 2010 年 3 月 17 日止。 五、蘇力菌以色列亞種之效價檢定 (一)供試昆蟲:以埃及斑蚊 Bora Bora 品系三齡末期至四齡初期幼蟲進行實驗。 (二)實驗材料:300ml 塑膠碗，42 個。100 ml 定量瓶 2 個。500ml 燒杯 2 個。10ml 及 5ml 吸管各二隻。10 c.c.量筒 10 個。 (三)實驗藥品:1. 標準組：Bti (7992 ITU/mg). 2. VectoBac WG/WDG. (四)實驗藥劑配製:標準組與試驗組皆以去離子純水配製，4000 ug/l、2000 ug/l、1000 ug/l、500 ug/l、250 ug/l、125 ug/l、62.5 ug/l，包括七個測試濃度之Bti殺幼蟲劑 懸浮液，待加入去離子純水中，每個濃度各3重複。對照組，去離子純水不含任何藥劑。 (五)實驗步驟:於塑膠碗中盛 230mL 蒸餾水備用，以吸量管吸取 10mL 供試藥液加入已盛 裝 230mL 去離子純水之供試容器中。將內含約 20 隻供試埃及斑蚊幼蟲之 10mL 去離子純 水倒入已施加藥劑之供試容器中，處理後 24 小時觀察記錄試驗結果之各組死亡率。 (六)結果處理: 1.半數致死濃度(LC 50 )：以Polo Plus Version 1.0 LeOra Software 進行Probit Analysis. 分別求取標準劑及樣品之半數致死劑量LD 50 。 2.樣品活性＝（標準劑 LD 50 /樣品劑 LD 50 ） x 標準劑國際單位。 六、蘇力菌以色列亞種UV照射後對Bora-Bora埃及斑蚊幼蟲毒殺能力測定 (一)供試昆蟲:以埃及斑蚊 Bora Bora 品系三齡末期至四齡初期幼蟲進行實驗。 (二)實驗材料:125ml 塑膠杯，21 個。500ml 燒杯 2 個。10ml 及 5ml 吸管各一隻。50 c.c. 量筒 1 個。10 c.c.量筒 9 個。 (三)實驗藥品:1. 標準組：蘇力菌(7992 ITU/mg) 20. 2. VectoBac WG/WDG.
(32) (四)實驗步驟:將去離子純水 9 公升 925 毫升(扣除 5 毫升內含 Bora-Bora 埃及斑蚊幼蟲 之去離子純水，每組三重覆共五組。)投入 0.08 公克之 Bti 藥劑量，混和均勻。後取 95 毫升之含 Bti 之水於塑膠杯中，置於 254nm 紫外燈下一個小時、三個小時、六個小時、 十二個小時及二十四小時，後投入 5 毫升內含 20 隻 Bora-Bora 埃及斑蚊幼蟲之去離子 純水，即為含有 8 公克/1000 公升 Bti 藥劑之 100 毫升去離子純水，每組三重複，記數 其一個小時、二個小時、三個小時及二十四小時之死亡隻數，計算其死亡率。另有 Bti 藥劑但完全不經紫外燈照射者為零個小時之對照組及不加入任何藥劑者之空白組，每組 三重複，同樣記數其一個小時、二個小時、三個小時及二十四小時之死亡隻數，並計算 其死亡率。. 第三節 統計分析 一.%校正死亡率=（X-Y/X） × 100 (Abbott, 1987)，依公式計算。 X=% 控制組存活孑孓百分比； Y=% 實驗組存活孑孓百分比。 二.半數致死時間（LT 50 ） ，依機率分析Probit Analysis 計算以對數分析軟體進行LT 50 之 分析，以瞭解各族群對藥劑之感受性及不同劑量之差異性。 三.卡方檢定（Chi-square test） 類別變項以卡方檢定，考驗各變項在實驗區與對照區個案的分佈情形是否有關聯。 四.Mann-Whitney 檢定 連續變項資料不符合常態分佈者以無母數檢定，比較實驗區與對照區與各變項間差異。. 21.
(33) 第肆章 研究結果. 第一節 室外模擬試驗 室外埃及斑蚊進行19天實驗，其殺滅效果在第0週的LT 50 之平均值±標準差(單位: 分)，見表2。4公克/1000公升組野外品系為27.7±2.0分、感性品系為29.8±2.7分;8公克 /1000公升組之野外品系為23.7±0.6分、8公克/1000公升組之感性品系為24.4±1.2分， 於半個小時內已達半數死亡數量。而殘效性於第19天LT 50 之平均值±標準差(單位:分)，4 公克/1000公升組之野外品系為3150.9±260.0分、4公克/1000公升組之感性品系為 2859.6±656.4分;8公克/1000公升組之野外品系為3818.9±795.3分、8公克/1000公升組 之感性品系為2790.3±505.0分，在第19天其半數致死時間已快速增加，見表2。 在第0週及第1週時，蘇力菌以色列亞種之殺滅效果死亡率(單位:%)為100%，殘效性 僅達一週，其48小時死亡率於第一週4公克/1000公升組於埃及斑蚊野外品系與埃及斑蚊 感性品系為100%，而8公克/1000公升組於埃及斑蚊野外品系與埃及斑蚊感性品系為 100%。於第2週之24小時死亡率，4公克/1000公升組之野外品系為18.4±6.5%、4公克/1000 公升組之感性品系為30.0±14.4%;8公克/1000公升組之野外品系為22.0±18.3%、8公克 /1000公升組之感性品系為16.4±7.4%。第2週之48小時死亡率4公克/1000公升組之野外 品系為84.4±17.3%、4公克/1000公升組之感性品系為64.8±16.7%;8公克/1000公升組之 野外品系為66.0±24.8%、8公克/1000公升組之感性品系為68.0±12.6%。第19天之48小時 死亡率4公克/1000公升之野外品系為30.0±15.6%、4公克/1000公升之感性品系為51.2± 19.2%、8公克/1000公升之野外品系為33.2±9.6%、8公克/1000公升之感性品系為53.2± 14.2%，見表3、表4。 室外白線斑蚊進行2週實驗，其殺滅效果在第0週的LT 50 之平均值±標準差(單位: 22.
(34) 分)，4公克/1000公升組為20.77±1.4分、8公克/1000公升組為19.9±1.9分;於第1週的LT 50 之平均值±標準差(單位:分)，4公克/1000公升組為2952.80±977.2分、8公克/1000公升 組為2809.74±1150.5分，見表5。Bti之兩種劑量於第0週之24小時死亡率為100%；第1週 之24小時死亡率，4公克/1000公升組為75.6±23.6%、8公克/1000公升組為98.0±4.5%;而 48小時死亡率，4公克/1000公升組為62.8±15.3%、8公克/1000公升組為51.6±24.1%。第 2週之24小時死亡率，4公克/1000公升組為16.8±10.6%、8公克/1000公升組為9.6± 7.9%;48小時死亡率，4公克/1000公升組為34.4±18.6%、8公克/1000公升為16.6±17.0%， 見表6、表7。 斑蚊對於蘇力菌以色列亞種於室外投以藥劑之際屬急性毒，殺滅效果為立即性，在 兩個小時內已全數死亡，半數致死時間均少於半個小時。埃及斑蚊感性品系及野外品系 於室外對蘇力菌以色列亞種藥劑其殘效性，半數致死時間在第2、3週呈現顯著增加， p<0.05。白線斑蚊於室外對蘇力菌以色列亞種藥劑其殘效性，半數致死時間在第1週呈 現顯著增加，p<0.05，半數致死時間延長。. 第二節 室內模擬試驗 室內埃及斑蚊進行 26 週實驗，在第 0 週的LT 50 之平均值±標準差(單位:分)，4 公克 /1000 公升組之野外品系為 26.5±0.9 分、4 公克/1000 公升組之感性品系為 26.6±4.5 分;8 公克/1000 公升組之野外品系為 24.7±0.1 分、8 公克/1000 公升組之感性品系為 26.8±3.6 分。而於 22 週的LT 50 之平均值±標準差(單位:分)，4 公克/1000 公升組之野外 品系為 1167.0±556.6 分、4 公克/1000 公升組之感性品系為 1320.1±756.6 分;8 公克 /1000 公升組之野外品系為 2478.0±1937.7 分、8 公克/1000 公升組之感性品系為 1905.5 ±2740.7 分，見表 8。 於室內實驗室模擬實驗之殘效性於第 0 週至第 9 週時，蘇力菌以色列亞種對埃及斑 23.
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