食品中動物用藥

4件被檢出enrofloxacin、香魚3件被檢出oxolinic acid，

與規定不符之百分率高達25.4%，隔年將此多重殘留方 法公告作為檢驗依據⁽¹⁶⁾。94年針對市售禽肉及其內臟 與水產品進行調查，於55件檢體中，檢出5件烏骨雞肉

（0.01~0.4 ppm）、1件烏骨雞內臟（0.012 ppm）及1件 香魚（0.127 ppm）含有enrofloxacin⁽¹⁷⁾。

行政院衛生署在96年1月最新修正之「動物用藥殘 留標準」⁽²⁰⁾規定danofloxacin、flumequine、oxolinic acid 及sarafloxacin等4種quinolone類抗菌劑之安全容許量，

其餘則不得檢出。本研究為因應修正之新規定並配合 本局「食品中殘留動物用藥之檢測」計劃，針對過去 高檢出率之禽肉及其內臟與香魚檢體，委請各縣市衛 生局抽驗送至本局進行檢測，並建立液相層析串聯式 質譜儀（liquid chromatography/tandem mass spectrom- etry, LC/MS/MS）方法，作為進一步鑑別確認，以評估 市售禽畜水產品中動物用藥殘留情形，並將檢驗結果 提供行政管理單位參考。

材料與方法

一、檢體來源

本調查之檢體係由各縣市衛生局，於95年2至6 月間自超級市場、大賣場與傳統市場等地，抽樣鵝肉 10件、雞肉10件、雞內臟10件、烏骨雞10件及香魚11 件，共51件禽肉及其內臟與水產品。

二、檢驗方法

本調查計畫主要依據行政院衛生署公告「食品中 動物用藥殘留量檢驗方法－Quinolone類多重殘留分 析」⁽¹⁶⁾，檢驗方法流程見圖一，另輔以本局自行開發

前　言

Quinolone類抗菌劑係由nalidixic acid衍生而形成一 系列之化合物，其基本構造為1-substituted-1,4-dihydro- 4-oxopyridine-3-carboxylic分子與芳香族或多環芳香 族所構成⁽¹⁾，其族群包含oxolinic acid、flumequine、

piromidic acid、danofloxacin、enrofloxacin及sarafloxacin 等抗菌劑。Quinolone類抗菌劑是藉由抑制細菌中DNA gyrase（type II topoisomerase），使DNA無法形成超螺 旋，進而失去轉錄、修補及複製等功能，導致細胞死 亡，而獲得治療效果^(2,3)。由於此類抗菌劑對革蘭氏陽 性及陰性菌有極佳的抑菌能力，因此廣泛被使用在畜 產動物或養殖魚類。

近10幾年來，人類及禽畜水產動物中使用quino- lone類抗菌劑治療之情況明顯增加^(3-5)，因此近年來不 斷地有抗藥性菌株的研究被報導^(6-10)。為預防quinolone 類抗菌劑濫用於禽畜水產動物食品中，本局曾針對市 售畜水產品中oxolinic acid進行檢測，結果於90件檢體 檢出鰻魚4件與蝦3件，共計7件（7.7%），殘留量介於 0.065~0.072 ppm之間⁽¹¹⁾。Horie等人於1992年針對日本 市售畜水產品進行殘留調查，結果於10件鰻魚中有7件 檢出oxolinic acid，殘留量介於0.01~0.1 ppm之間⁽¹²⁾，繼 於1995年於10件鰻魚中及3件香魚檢出oxolinic acid⁽¹³⁾。 許等人抽驗臺灣地區7個縣市市售雞肉112件，檢出含 enrofloxacin者有19.6%（0.005~0.095 ppm），含ofloxa- cin者有2.7%（0.017~0.099 ppm）⁽¹⁴⁾。本局鑑於quino- lone類抗菌劑種類發展日增，在民國90年進行禽畜水產 品中quinolone類多重殘留分析方法之開發及評估⁽¹⁵⁾， 並抽驗63件禽畜水產品中，共有烏骨雞9件與烏骨雞肝

食品中動物用藥 Quinolone類之殘留調查

陳信志　賴宣陽　周秀冠 中部檢驗站

摘　要

為了解禽肉及水產食品動物用藥殘留之衛生安全，本局委請各縣市衛生局於95年2至6月間，

自超級市場、大賣場與傳統市場等地，共抽樣禽畜水產品51件；其中包括鵝肉10件、雞肉10件、

雞內臟10件、烏骨雞10件及香魚11件，以衛生署公告之高效液相層析法（high performance liquid chromatography, HPLC）檢測quinolone類抗菌劑之殘留情形，並配合液相層析串聯式質譜儀（liquid chromatograph/tandem mass spectrometer, LC/MS/MS）進行確認，於3件烏骨雞及2件香魚檢體檢出 enrofloxacin，檢出濃度範圍為0.014~0.438 ppm。檢出不合格之檢體及供貨來源，已由農政機關依「動 物藥品管理法」處以罰鍰，並加強源頭養殖戶用藥管理。

關鍵詞：quinolones、高效液相層析法、液相層析串聯式質譜儀

之液相層析串連質譜儀法進行確認。

三、試藥

灱 氫氧化鈉、醋酸銨、磷酸、正丙醇、十二碳基硫 酸鈉（sodium dodecyl sulfate, SDS）偏磷酸（meta- phosphoric acid, MPA）及磷酸二氫鈉為Merck公司

（Germany）特級產品

牞 甲醇、乙腈及正已烷均採用液相層析級，購自 Merck公司（Germany）

犴 Enrofloxacin（ERFX，純度99.8%）、danofloxacin

（DNFX，純度99.9%）及sarafloxacin hydrochlo- ride（SRFX，純度98.6%）購自Riedel-de Haën 公司（Germany）；nalidixic acid（NA，純度 100.7%）、oxolinic acid（OXA，純度＞99.0%）

及flumequine（FMQ，純度99.0%）購自Sigma 公司（St. Louis, MO, U.S.A.），piromidic acid

（PMA）購自MP Biomedicals公司，共計7種qui- nolones標準品。

四、器具及裝置

灱 均質機（homogenizer）：SMT Co. Ltd., Tokyo, Japan

牞 旋渦混合器：Vortex-Genie 2 Mixer（Scientific Industries, Inc., NY, U.S.A.）

犴 酸鹼度測定器（pH meter）：Mettler-Toledo Inter- national, Inc. Switzerland

犵超音波震盪器：Ultrasonics Model-5510（Branson Co., U.S.A.）

玎 抽氣過濾裝置：包括抽氣瓶250 mL及布赫納漏斗

（Buchner funnel）

甪濃縮瓶：250 mL 癿 分液漏斗：250 mL

穵 固相萃取匣：Bond Elut C18, 200 mg, 3 mL,（Varian

Associated Inc., CA, U.S.A.）

网 真 空 固 相 萃 取 裝 置 ： S u p e l c o v i s i p r e p^{T M} D L

（Supelco Co., Ltd., U.S.A.）

艸 減壓濃縮裝置（Rotary evaporator）：Buchi 461 water bath, Brinkmann Ltd., Germany Switzerland 艼濾紙：Whatman No. 1，直徑11 cm

芀 濾膜（Syringe filters）：Nylon 材質, 0.45 µm, 13 mm, Titan Inc., TN, U.S.A.

五、儀器設備

灱 高效液相層析儀（High performance liquid chro- matograph, HPLC）：Shimadzu（Shimadzu Corpora- tion, Kyoto, Japan）產品，包括Shimadzu LC-10AT 溶媒輸送系統，配有CBM-10A介面控制器（Com- munications Bus Module）、SPD-6AV紫外光檢 出器（UV-VIS spectrophotometric detector）及 RF-10AXL螢光檢出器（Fluorescence detector）。

資料處理為Shimadzu 之Class-LC10控制積分軟 體。

牞液相層析串連質譜儀（liquid chromatograph/tan- dem mass spectrometer, LC/MS/MS）：Alliance 2695液相層析儀系統附Waters Micromass Quattro Premier質譜儀（Waters Corporation, Milford, MA, U.S.A.），安裝MassLynx軟體。

六、試劑之配製

灱 0.05 M磷酸二氫鈉緩衝溶液之調製：

稱取磷酸二氫鈉6.9 g，加水950 mL溶解，以磷酸 調整pH值至2.5，再加水至1000 mL。

牞 萃取溶液之配製：

取0.3%偏磷酸溶液與乙腈以體積比1：10混合。

犴 高效液相層析儀移動相溶液之配製：

取0.05 M磷酸二氫鈉緩衝溶液650 mL，加10%

十二碳基硫酸鈉溶液10 mL，混合均勻，再加入乙 腈350 mL，混合均勻，以濾膜過濾，取濾液供作 移動相溶液，臨用前以超音波震盪脫氣。

犵 液相層析串聯質譜儀移動相溶液之配製：

取甲醇與5 mM醋酸銨溶液以體積比7：3混合均 勻，以濾膜過濾，取濾液供作移動相溶液，臨用 前以超音波震盪脫氣。

玎 標準溶液之配製：

精確稱取相當於含NA、OXA、FMQ、PMA及 SRFX各10 mg，分別以0.01 N氫氧化鈉：甲醇（2 : 8, v/v）溶液溶解並定容至100 mL；另取ERFX 10 mg與DNFX 12.9 mg，分別以甲醇溶解並定容至 100 mL，供作標準原液。臨用時再以移動相[含3.7 mM SDS之乙腈：0.05 M 磷酸二氫鈉緩衝溶液(35 : 65, v/v)]溶液稀釋成一系列各種不同濃度之混合標 準液。

七、高效液相層析儀之分析條件

灱 層析管：Cosmosil 5 C18-AR-II Waters, 3.5 µm, i.d. 4.6 mm × 250 mm, Nacalai Tesque Inc., Kyoto, Japan。

檢體5 g

↓ 加入萃取溶液(0.3%偏磷酸溶液/乙腈，1 : 10, v/v) 30 mL均質3分鐘

濾紙過濾

↓加入乙腈飽和之正己烷50 mL振盪5分鐘 取下層液減壓濃縮至乾

↓

殘留物以去離子水10 mL溶解

↓

倒入預先以甲醇10 mL及去離子水10 mL潤洗之C18固相 萃取匣

↓ 最後以甲醇與0.05 M磷酸二氫鈉緩衝溶液混合液(7 : 3, v/v) 10 mL沖提

沖提液減壓濃縮至乾

↓

殘留物以移動相1 mL溶解

↓

經過濾後注入高效液相層析儀 圖一、檢液之製備流程

牞檢測波長：

光 二 極 體 列 陣 紫 外 光 / 可 見 光 檢 出 器 （ p h o t o - dide array UV-vis detector）：260 nm（nalidixic acid），286 nm（piromidic acid）。

螢光檢出器（fluorescence detector）：激發波長 327 nm/放射波長367 nm（oxolinic acid及flume- quine），激發波長278 nm/放射波長442 nm（dan- ofloxacin、enrofloxacin及sarafloxacin）。

犴移動相流速：1.0 mL/min。

八、液相層析串聯質譜儀分析條件 灱進樣系統：

1. 層析管： Symmetry® C18, 3.5 µm, 2.1 × 100 mm, Waters Inc., Ireland

2. 溫度：30ºC 3. 流速：0.2 mL/min 4. 注入量：10 µL 牞質譜儀條件：

1. 離子源：電灑游離正電荷模式（positive ion electrospray ionization, ESI⁺）

2.儀器參數：

⑴毛細管電壓：2.8 kV

⑵離子源溫度：120ºC

⑶進樣錐電壓：25~30 V

⑷溶劑揮散溫度：300ºC

⑸碰撞能量：15~35 eV

⑹樣品錐內氣體流速：100 L/hr

⑺溶劑揮散之氣體流速：500 L/hr

⑻ 偵測模式：多重反應偵測（multiple. reaction monitoring, MRM）

結果與討論

一、 檢驗方法與液相層析串聯質譜儀分析條件 探討

根據目前公告檢驗方法測試混合之quinolone類標

準品，發現相同濃度之danofloxacin及enrofloxacin，於 螢光激發波長278 nm/放射波長442 nm條件下，其訊 號強度略高於激發波長295 nm/放射波長446 nm（圖 二），因此本計畫採用此一條件偵測danofloxacin及 enrofloxacin 2種藥品。

本實驗採用電灑游離正電荷模式進行偵測，將 標準品經由針筒注射進入質譜儀調校儀器設定參數。

母離子斷裂後選擇主要子離子與次要子離子（product ion）作為定性確認片段，並與相關文獻比較^（18,19），經 調校後獲得最佳儀器參數見表一，進樣錐電壓在25~30 V之間，碰撞能量則在15~35 eV之間。質譜進樣之檢液 製備如前述公告方法，僅在沖提液減壓濃縮至乾後，

改以甲醇溶出，作為定性確認檢液。quinolone類抗菌 劑在含有甲醇之移動相中之總離子偵測反應遠較在含 乙腈之移動相高，尤以danofloxacin及sarafloxacin二者 之偵測反應，在相同濃度下相差甚多，圖三所示為7種 quinolone類抗菌劑於甲醇與5 mM醋酸銨（70 : 30, v/v）

混合之移動相所呈現之總離子層析圖與多重反應偵測 層析圖。

二、調查結果與往年之比較

95年度共抽驗51件禽肉及其內臟與水產品，於10 件烏骨雞及11件香魚檢體中，分別檢出3件及2件檢體 含有依規定不得檢出之enrofloxacin^(20,21)，檢出濃度範 圍在0.014~0.438 ppm（表二），檢出率分別為30.0%及 18.2%，總檢出率為9.8%。檢出殘留enrofloxacin之烏骨 雞及香魚檢體之高效液相層析圖譜如圖四及圖五。採 用多重反應偵測確認檢出enrofloxacin之檢體，依據歐 盟2002/657/EC⁽²²⁾之規定，計算子離子含量比例之容許

Intensity(mV)

T im e (m in)

0 5 10 15 20 25 30

0 20 40

－ex 327 nm, em 367 nm

－ex 295 nm, em 446 nm

－ex 278 nm, em 442 nm

ERFX

OXA DNFX SRFX

NA FMQ

圖二、 Quinolone類標準品於三組不同螢光波長(ex 327 nm/em 367 nm、ex 295 nm/em 446 nm及ex 278 nm/em 442 nm)所呈現之層析圖。(OXA: oxolinic acid；NA: nalidixic acid；FMQ: flumequine；DNFX:

danofloxacin；ERFX: enrofloxacin；SRFX: sarafloxacin)

表一、 7種quinolone類抗菌劑在多重反應偵測(multiple reaction monitoring, MRM)模式之偵測條件

Compound Precursor

ion (m/z) Product ion (m/z)

Cone Voltage

(V)

Collision energy

(V) nalidixic acid 233 187

25 25

215 15

oxolinic acid 262 216

25 30

244 20

flumequine 262 202

30 25

244 20

piromidic acid 289 243

25 30

271 20

danofloxacin 358 255

30 35

340 20

enrofloxacin 360 245

30 20

316 18

sarafloxacin 386 299

30 30

368 25

範圍（ion ratio tolerance）（表三）來鑑別，以LC/MS/

MS確認之層析圖譜則分別如圖六及圖七，結果5件皆 檢出enrofloxacin。

相較於以往本局在90年度市售調查，於9件烏骨雞 肉（0.08~4.04 ppm）及4件烏骨雞肝（0.01~0.27 ppm）

檢出enrofloxacin，3件香魚檢出oxolinic acid（0.13~0.35 ppm）；以及94年度於5件烏骨雞肉（0.01~0.4 ppm）、

1件烏骨雞內臟（0.012 ppm）及1件香魚（0.127 ppm）

檢出enrofloxacin。本次調查計畫著重在以往常被檢出

quinolone類抗菌劑之檢體，結果雖未發現以往檢出之 oxolinic acid與其它quinolones類抗菌劑，但enrofloxacin 卻持續被檢出不符規定，顯示此類藥品仍舊被使用在 畜養之烏骨雞與養殖之香魚上，尤其香魚檢體檢出不 得使用於水產動物之enrofloxacin，未來仍需對這二類 檢體持續市售品之檢測。

三、風險評估

本調查檢出不符規定之enrofloxacin，不具致癌

70:30

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00Time

%0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%0 100

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

358 > 340 6.97e4 Area 1.87;71237

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

358 > 255 1.03e4 Area 1.84;9509

4.48267

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

289 > 271 1.08e6 Area 2.24;622314

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

289 > 243 7.00e5 Area 2.24;396515

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

262 > 244 1.09e6 Area 1.96;747234

1.162547

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

262 > 216 2.16e4 Area 93041.70

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

233 > 215 1.65e6 Area 1.93;949935

150860.87 5.10

3998

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

233 > 187 1.18e6 Area 1.93;553091

94200.82

70:30

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00Time

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

%

0 100

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

386 > 368 3.26e4 Area 1.76;27935

1.22600

57293.54 4.53

8354 7.14

2584 9.72

528

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

386 > 299 9.69e3 Area 1.79;6874

3.60236 4.08 109

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

360 > 316 9.01e4 Area 2.52;65746

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

360 > 245 3.43e4 Area 2.49;25998

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 2: MRM of 2 Channels ES+

262 > 244 9.14e5 Area 1.96;627546

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 2: MRM of 2 Channels ES+

262 > 202 3.98e5 Area 1.99;223133

1.25389 5.02

850

quinolones_mix_1 Sm (Mn, 2x2) 1: MRM of 12 Channels ES+

4.31e6TIC Area 2.04;4084046

113420.85 9.77

2666

OXA DNFX PMA

NA

SRFX

ERFX

FMQ

圖三、7種quinolone類之總離子層析圖與多重反應偵測層析圖

表二、 禽肉及其內臟與水產品中quinolone類抗菌劑殘留 量調查結果

檢體 種類

抽驗 件數

合格 件數

不合格 件數

不符規定 百分比(%)

檢出濃度範圍 (ppm)

鵝肉 10 10 0 － －

雞肉 10 10 0 － －

雞內臟 10 10 0 － －

烏骨雞 10 7 3 30.0 0.014~0.438 (Enrofloxacin) 香魚 11 9 2 18.2 0.118~0.167

(Enrofloxacin) 總計 51 46 5 9.8 0.014~0.438

(Enrofloxacin)

（a）標準品

mV

minute

5 10 15 20 25

0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60

6.208 12.985 16.127 21.475

（b）台南市

mV

minute

5 10 15 20 25

0 5 10 15 20 25

3.202 4.3334.7435.638 9.237 13.635 14.882 16.182 18.355

（c）台中市

mV

minute

5 10 15 20 25

0 5 10 15 20 25 30 35

2.7453.178 4.2954.7055.627 6.395 8.6079.062 10.197 12.490 14.707 16.155 18.320 20.430

（d）台東縣

mV

minute

5 10 15 20 25

0.5 1.0 1.5

10.150 12.123 12.773 13.888 14.845 16.155 18.323

ERFX

O X A D N FX SRFX

圖四、 檢出殘留Enrofloxacin之烏骨雞檢體之高效液相層 析圖譜(螢光激發波長278 nm/放射波長442 nm)。

(a)標準品，(b)~(d)不符規定之檢體

(a)標準品

mV

minute

5 10 15 20

-0.05 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40

6.015 11.918 14.817 19.435

(b)基隆市

mV

minute

5 10 15 20 25

-0.5 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5

10.842 12.86513.628 14.688

(c)花蓮縣

mV

minute

5 10 15 20

0 2 4 6 8

2.773 4.6325.373 13.827 15.255

ERFX

O X A D N FX SRFX

圖五、 檢出殘留Enrofloxacin之香魚檢體之高效液相層析 圖譜(螢光激發波長278 nm/放射波長442 nm)。(a) 標準品，(b)~(c)不符規定之檢體

性及畸胎反應，急性毒性低，臨床症狀包括昏睡發抖 抽筋呼吸困難及運動失調，副作用為結晶尿及心肌症

(23)。由於使用enrofloxacin，可能引起畜禽消化道中細 菌之抗藥性，民眾可能經由食用或接觸畜禽，感染具 抗藥性細菌。為避免使用該藥品於畜禽動物飼養上，

美國在2005年9月12日即禁止使用enrofloxacin治療家禽 疾病，行政院農業委員會在94年5月16日亦已公告停止 製造及輸入口服液劑及飲水散劑劑型之fluoroquinolones

類動物藥品的措施。

FAO/WHO聯合食品添加物專家委員會（JECFA）

評估enrofloxacin每日最大允許攝取量（ADI）為每公 斤體重2 µg⁽²⁴⁾，以體重60公斤成人換算，每日可接受 攝取量上限為120 µg，依據衛生署「國民營養現況：

1993~1996國民營養健康變遷調查結果」⁽²⁵⁾報告，成年 男性及女性每人每天雞類及其製品攝食量分別為52.21 及31.06 g，淡水魚類（新鮮）攝食量分別為29.04及 19.3 g，在各年齡層身高、體重、身體質量指數之平 均值、標準差、及其與第二次國民營養調查結果之比 較，19~44歲之男性與女性平均體重分別為64.3與54.5 公斤。本次調查檢驗出enrofloxacin之烏骨雞肉與香魚 最高殘留量分別為0.438 及0.167 ppm，估算國人可能攝 食enrofloxacin風險，成年男性與女性對於雞類及其製 品分別為0.36及0.25 µg/kg bw/day，對於淡水魚類分別 為0.08及0.06 µg/kg bw/day。依每日最大允許攝取量每 公斤體重2 µg換算，成年男性與女性需要分別食用超過 每日平均攝取量5.6及8.0倍之烏骨雞肉與25及33.3倍之 香魚，才有可能對人體造成影響。

四、不符規定檢體之後續追蹤處理

本調查不符規定之檢體，已由地方衛生局及農 政機關進行追查，皆已查出供貨來源，且列為加強輔 導對象。在不符規定之烏骨雞檢體中，經追蹤發現其 中二個縣市抽驗檢體皆來自同一牧場，業者強調仔雞 至成雞所使用之飼料及用藥均由一家實業公司提供，

疑藥品來源出自於飼料，另一縣市雞農則承認飼料中 有添加enrofloxacin來治療雞隻咳嗽，皆由縣市政府依

「動物用藥品管理法」處理。在不符規定之香魚檢體 部份，二個縣市抽驗之檢體亦來自同一家水產股份有 限公司轉售，然因無法確切追蹤養殖戶代碼，僅能提 供該時期之養殖戶名冊，因此從其中二家養殖戶，再 次抽樣送宜蘭大學檢驗，結果並未發現有不符合規定 之情形。

結　論

本調查研究檢測51件禽肉及其內臟與水產品中 oxolinic acid、danofloxacin 、enrofloxacin、sarafloxa- cin、nalidixic acid、piromidic acid及flumequine等7種 quinolones，除了採用HPLC搭配紫外光與螢光檢出 器交互確認外，更建立了LC/MS/MS多重殘留檢驗條

件，作為進一步鑑別之方法，結果有3件烏骨雞肉與2 件香魚檢出不得殘留之enrofloxacin，檢出濃度範圍在 0.014~0.438 ppm，與規定不符者佔9.8%。顯示部份業 者未遵守動物用藥之相關規定，市售烏骨雞與香魚仍 存在quinolone類抗菌劑殘留問題。本調查結果已提供 有關單位作為行政管理之參考，以加強對業者之源頭 管理及輔導，對於不易追蹤來源之水產品，未來更需 落實「水產品生產履歷管理系統」之執行。有鑑於qui- nolone類抗菌劑近幾年不斷地被檢出，已於96年度規劃 市售畜禽水產品殘留quinolones之檢測計畫，持續調查 動物用藥殘留情形，以維護消費大眾食用之安全。

參考文獻

Martin, A. R. 1998. Textbook of Organic Medicinal and Pharmaceutical Chemistry. pp. 196-202. Lippincott- Raven, Philadelphia, New York, U.S.A.

Yoke, J. C. and Froc, P. 2000. Quantitation of nine qui- nolones in chicken tissues by high performance liquid chromatography with fluorescence detection. J. Chro- matogr. A 882: 63-77.

Gigosos, P. G., Revesado, P. R., Cadahia, O., Fente, C.

A., Vazquez, B. I., Franco, C. M. and Cepeda, A. 2000.

Determination of quinolones in animal tissues and eggs by high-performance liquid chromatography with pho- todiode-array detection. J. Chromatogr. A 871: 31-36.

Ferech, M., Coenen, S., Malhotra-Kumar, S., Dvora- kova, K., Hendrickx, E., Suetens, C. and Goossens, H.

2006. European Surveillance of Antimicrobial Con- sumption (ESAC): outpatient quinolone use in Europe.

J. Antimicrob. Chemother. 58(2): 423-427.

Steinman, M. A., Gonzales, R., Linder, J. A. and Landefeld, C. S. 2003. Changing use of antibiotics in community-based outpatient practice, 1991-1999. Ann.

Intern. Med. 138(7): 525-533.

Peña, C., Albareda, J. M., Pallares, R., Pujol, M., Tubau, F. and Ariza, J. 1995. Relationship between quinolone use and emergence of ciprofloxacin-resistant

Escherichia coli in bloodstream infections. Antimicrob.

Agents Chemother. 39(2): 520-524.

Garrison, M. W. and Nuemiller, J. J. 2007. In vitro ac- tivity of tigecycline against quinolone-resistant Strepto-

coccus pneumoniae, methicillin-resistant Staphylococ- cus aureus and vancomycin-resistant enterococci. Int. J.

Antimicrob. Agents 29(2): 191-196.

Stevenson, J. E., Gay, K., Barrett, T. J., Medalla, F., Chiller, T. M. and Angulo, F. J. 2007. Increase in nali- dixic acid resistance among non-Typhi Salmonella en-

terica isolates in the United States from 1996 to 2003.

Antimicrob. Agents Chemother. 51(1): 195-197.

Adam, H. J., Schurek, K. N., Nichol, K. A., Hoban, C. J., Baudry, T. J., Laing, N. M., Hoban, D. J. and Zhanel, G.

G. 2007. Molecular characterization of increasing fluo- roquinolone resistance in Streptococcus pneumoniae isolates in Canada, 1997 to 2005. Antimicrob. Agents 1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

9.

表三、 使用液相層析串聯質譜技術之相對離子強度容 許範圍

Relative intensity*

(% of base peak) Ion ratio tolerance (CI-GC-MS, GC- MS-MSⁿ, LC-MS, LC-MS-MSⁿ)

>50% ± 20%

> 20% - 50% ± 25%

> 10% - 20% ± 30%

＜10% ± 50%

* Relative intensity = Peak area of second transition product

Peak area of main transition product × 100%

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00Time

%

0 100

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

%

0 100

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

%

0 100

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

%

0 100

0620-ERF100ng g- MRM-2 Sm (Mn, 3x3) MRM of 4 Channels ES+

360 > 316 1.20e4 Area 20921.19

2.0327

0620-ERF100ng g- MRM-2 Sm (Mn, 3x3) MRM of 4 Channels ES+

360 > 245 1.20e4 Area 10701.18

0620-TaiNaungCity-2 Sm (Mn, 3x3) MRM of 4 Channels ES+

360 > 316 1.20e4 Area 1.19;3089

0620-TaiNaungCity-2 Sm (Mn, 3x3) MRM of 4 Channels ES+

360 > 245 1.20e4 1.17 Area

1707

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00Time

%

0 100

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

%

0 100

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

%

0 100

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

%

0 100

0620-ERF100ng g- MRM-2 Sm (Mn, 3x6) MRM of 4 Channels ES+

360 > 316 2.00e4 Area 18551.19

0620-ERF100ng g- MRM-2 Sm (Mn, 3x6) MRM of 4 Channels ES+

360 > 245 2.00e4 Area 10621.17

0620-TaichungCity-1 Sm (Mn, 3x6) MRM of 4 Channels ES+

360 > 316 2.00e4 Area 1.18;5588

0620-TaichungCity-1 Sm (Mn, 3x6) MRM of 4 Channels ES+

360 > 245 2.00e4 1.19 Area

2990

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00Time

%

0 100

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

%

0 100

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

%

0 100

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

%

0 100

0620-ERF20ng g- MRM-1 Sm (Mn, 3x6) MRM of 4 Channels ES+

360 > 316 3.00e3 Area 1.24853

0620-ERF20ng g- MRM-1 Sm (Mn, 3x6) MRM of 4 Channels ES+

360 > 245 3.00e3 1.22 Area

439

0620-TaiTung-1 Sm (Mn, 3x6) MRM of 4 Channels ES+

360 > 316 3.00e3 Area 1.20139

0620-TaiTung-1 Sm (Mn, 3x6) MRM of 4 Channels ES+

360 > 245 3.00e3 Area 1.1869

Std: 100 ng/g

台中市

Std: 20 ng/g

台東縣

Std: 100 ng/g

台南市

圖六、利用液相層析串聯式質譜儀確認含有enrofloxacin之烏骨雞檢體之多重反應偵測層析圖

圖七、利用液相層析串聯式質譜儀確認含有enrofloxacin之香魚檢體之多重反應偵測層析圖

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00Time

%

0 100

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

%

0 100

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

%

0 100

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

%

0 100

0620-ERF20ng g- MRM-1 Sm (Mn, 3x6) MRM of 4 Channels ES+

360 > 316 3.00e3 Area 1.24853

0620-ERF20ng g- MRM-1 Sm (Mn, 3x6) MRM of 4 Channels ES+

360 > 245 3.00e3 1.22 Area

439

0620-KieLung-1 Sm (Mn, 3x6) MRM of 4 Channels ES+

360 > 316 3.00e3 1.17 Area

638

0620-KieLung-1 Sm (Mn, 3x6) MRM of 4 Channels ES+

360 > 245 3.00e3 Area 1.16304

0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 Time

%

0 100

0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00

%

0 100

0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00

%

0 100

0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00

%

0 100

0720ERF20ppb Sm (Mn, 3x8) MRM of 4 Channels ES+

360 > 316 1.37e3 Area 10342.15

0720ERF20ppb Sm (Mn, 3x8) MRM of 4 Channels ES+

360 > 245 1.01e3 Area 2.20818

0720sample Sm (Mn, 3x8) MRM of 4 Channels ES+

360 > 316 4.08e3 Area 34502.01

0720sample Sm (Mn, 3x8) MRM of 4 Channels ES+

360 > 245 3.04e3 Area 26242.04

Std: 20 ng/g

基隆市

Std 20 ppb

花蓮縣

Chemother. 51(1): 198-207.

Glocker, E., Stueger, H. P. and Kist, M. 2007. Quino- lone resistance in Helicobacter pylori isolates in Ger- many. Antimicrob. Agents Chemother. 51(1): 346-349.

饒麥玲、施養志、張碧秋、周薰修。1991。畜水 產品中歐索林酸及乃託文檢驗方法之探討及其殘 留量之調查。藥物食品檢驗局調查研究年報。9:

289-298。

10.

11.

Horie, M., Saito, K., Nose, N. and Nakazawa, H. 1992.

Simultaneous determination of quinolone antibacterials in fish and meat by high performance liquid chroma- tography. J. Food Hyg. Sci. Japan 33(5): 442-448.

Horie, M., Saito, K., Nose, N. and Nakazawa, H. 1995.

Simultaneous determination of eight quinolone anti- bacterials in meat and fish by high performance liquid chromatography. J. Food Hyg. Sci. Japan 36(1): 62-67.

12.

13.

許瑜芬、龔培森、劉敏主、林士鈺。1997。雞肉組 織中思羅弗撒欣(enrofloxacin)及歐弗撒欣(ofloxacin) 之殘留分析。台灣省畜衛所研報。33: 125-130。

Su, S. C., Chang, M. H., Chang, C. L., Chang, P. C.

and Chou, S. S. 2003. Simultaneous determination of quinolones in livestock and marine products by high performance liquid chromatography. J. Food and Drug Anal. 11(2): 114-127.

行政院衛生署。2002。食品中動物用藥殘留量檢驗 方法－Quinolone類多重殘留分析。91.08.12衛署藥 檢字第0910049817號公告。

周珮如、李蕙芳、徐麗嵐、周曉蕙、蘇淑珠及周 薰修。2006。禽畜水產品中動物用藥Quinolone類 之殘留量調查。藥物食品檢驗局調查研究年報24:

345-356。

Hatano, K. 2004. Simultaneous determination of quino- lones in foods by LC/MS/MS. J. Food Hyg. Sci. Japan 45(5): 239-244.

Yamada, R., Kozono, M., Ohmori, T., Morimatsu, F.

and Kitayama, M. 2006. Simultaneous determination of residual veterinary drugs in bovine, porcine, and chicken muscle using liquid chromatography coupled 14.

15.

16.

17.

18.

19.

with electrospray ionization tandem mass spectrometry.

Biosci. Biotechnol. Biochem. 70(1): 54-65.

行政院衛生署。2006。動物用藥殘留標準。96.1.25 衛署食字第0960400187號令修正。

行政院農業委員會。2005。動物用藥品使用準則。

94.11.11農授防字第0941473159號令。

Commission Decision 2002/657/EC: Implementing Council Directive 96/23/EC concerning the perfor- mance of analytical methods and the interpretation of results, Official Journal of the European Union No L 221, 17.08.2002 pp. 16-17.

Food and Agriculture Organization of the United Na- tions. Enrofloxacin (WHO Food additives Series 34).

[http://www.inchem.org/dicuments/jecfa/jecmono/

v34ie05.htm].

Joint FAO/WHO Epert Committee on Food Additives:

Residues of certain veterinary drugs in foods, a sum- mary of the conclusions of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives (JECFA) at its 48th meeting. Geneva, 18-27 February 1997.

行政院衛生署。1999。國民營養現況：1993~1996 國民營養健康狀況變遷調查結果。台灣。

20.

21.

22.

23.

24.

25.

Survey of Quinolone Residues in Foods

HSIN-CHIH CHEN, CHIUAN-YANG LAI, HSIU-KUAN CHOU

Central Regional Laboratory

ABSTRACT

In order to examine quinolone antibacterial residues in poultry and aquatic products in Taiwan, local health bureaus where coordinated to sample the marketed products including goose, chicken, poultry innards, black-boned chicken and sweet fish (ayu) from the supermarkets, warehouse stores and traditional markets. The residual quinolone in samples was analyzed by HPLC method, which was promulgated by the Department of Health, and confirmed by liquid chromatography/

tandem mass spectrometry (LC/MS/MS). The results showed that 3 black-boned chicken and 2 sweet fish samples contained enrofloxacin, which is forbidden in livestock and aquatic products, at concentrations ranging from 0.014 to 0.438 ppm. The non-compliant products were reported to the local enforcement authorities, tracked down to their supply source and fined according to the Veterinary Drugs Control Act.

Key words: quinolones, veterinary drugs, HPLC, LC/MS/MS