植生蟲草多糖體抗腫瘤代謝物 (PN-2) 之甲基化分析及利用流動細胞儀 探 討免疫機能之研究
Methylation Analysis and Immuno-Flow-cytometric Studies on an Antitumor Polysaccharide PN-2 Puritied from Phytocordyceps nin-
chukispora Su et Wang
雙節棍孢子植生蟲草 (Phytocordyceps ninchukispora Su & Wang ) 屬麥
角菌科之真菌 , 係 1985 年於台灣發現的新屬植生蟲草 (Phytocordyceps) 之
單一種。將此菌株進行液態培養 , 把培養液離心取其上清液經超微過濾器
, 分子篩及離子交換法可得到一純化的水溶性多糖 (PN-2) 。將此多糖進
行成份分析並用新法做各種生理活性測試。利用 Chitinase 分析可確定
此糖至少含三相鄰 N-Acetylgucosamine 。將此糖經甲基化後水解再乙醯
化,其衍生物經 GC 比對和 GC Mass 分析,可知其主鍵為 β 1 → 4
N-Acetylgucosamine ,其第六 C 位置有些接 Galactose Mannose 和
Threitol ,其鍵結為 1 → 4鍵結。本水溶性多糖 (PN-2) 可減少小白鼠
皮下腫瘤惡化程度 , 延長壽命 21% , 並明顯減少皮下腫瘤面積 29% 。對
sarcoma-180 cell 腹水癌小鼠的體重可明顯降低 11% 。在抗人工肺臟腫瘤
轉移方面 i.v. PN-2 可降低肺中腫瘤結節數 88% 。為解決人工計數肺中
腫瘤結節數的不客觀性本次研究利用 CDDP,BrdUrd, PI 偵測 S-180 cell
DNA 特性 , 發現可利用 S-180 cell DNA 含量和 normal lung cell DNA
含量不同 , 而可用 Flow cytometry 正確計數腫瘤轉移肺臟中 S-180 腫瘤
cell 的百分比。為了解 PN-2 抗腫瘤活性 , 將 PN-2 和 S-180 cell in
vitro 培養 , 發現無細胞毒性。進行 Ames test 知其無抗突變能力 , 也無
基因毒性。測試 PN-2 對末稍血液 T 、 T4 、 T8 、 B. Macrophage 比率影
響 , 知其可使 T, T4, Macrophage 顯著上升 (P<0.01) 為了解 PN-2 是否
可降低 S-180 cell 分裂速度和能力 , 以 PI, BrdUrd 雙染色法用 Flow
cytometry 作 cell cycle 的測量 , 計算 PN-2 對 S-180 cell kinetic
parameter 的影響 , 結果顯示 PN-2 對 BrdUrd Labeling Index, DNA
synthetic time (Ts), G/S/G2M 百分比皆無影響。但利用 BrdUrd 標幟
S-180 細胞追蹤測試則在 S-180 腹水癌中以 PN-2,i.p. 注射 , 可使 S-180
cell 因 macrophage 活性增加而被吞噬掉 , 因而使 S-180 cell 在腹水中存
活時間降低 45% 。其間並發現 PN-2 有強烈 mitogen 作用 , 可使週邊血液
WBC 分裂能力增加 , PN-2 組 6.7±0.6%, PBS 組 4.2±0.5%,( P<0.01
) 。以 i.v. 投與 PN-2 發現副作用極小 , 對週邊血液 WBC, RBC, PLT,
HGB %L. %M. RDW, MPV, PDW, LYM, GRAN, HCT, MCH, PCT 值皆無影響 ,
僅對 MCV, MCHC 值有微小增加作用。