黃水茄、仙鶴草、乾薑、石斛、益母草等科學中藥及綠茶葉與 α-glucosidase-CM5晶片作用結果如圖4.8~圖4.13和表4.1;以及酵 素活性分析試驗結果如圖4.14和表4.1:
圖4.8 黃水茄與 α-glucosidase-CM5 晶片作用的表面電漿共振訊號 圖。
圖4.9 仙鶴草與 α-glucosidase-CM5 晶片作用的表面電漿共振訊號 圖。
圖 4.10 乾薑與 α-glucosidase-CM5 晶片作用的表面電漿共振訊號 圖。
5000 10000 15000 20000 25000 30000
5000 5500 6000 6500 7000 7500 8000
Time s
Resp. Diff.
RU
binding:115 RU blocking ratio:9.8%
0 10000 20000 30000 40000 50000 60000 70000
500 1000 1500 2000 2500 3000
Time s
Resp. Diff.
RU
binding:4086 RU blocking ratio:55.8%
圖4.11 石斛與α-glucosidase-CM5晶片作用的表面電漿共振訊號 圖。
圖 4.12 益母草與 α-glucosidase-CM5 晶片作用的表面電漿共振訊 號圖。
5000 10000 15000 20000 25000 30000 35000
-200 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800
Time s
Resp. Diff.
RU
binding:358 RU blocking ratio:2.8%
5000 10000 15000 20000 25000 30000
-200 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800
Time s
Resp. Diff.
RU
binding:391 RU blocking ratio:7%
圖4.13 綠茶葉(10 mg/ mL)與α-glucosidase-CM5晶片作用的表
-500 0 500 1000 1500 2000 2500
Time s
Resp. Diff.
RU
binding:3571 RU blocking ratio:52.2%
圖4.14 黃水茄、仙鶴草、乾薑、石斛、益母草及綠茶葉的酵素
E nz ym e A ctiv ity %
藥材名稱 樣品結合量
(RU)
EGCG 阻斷比
(%)
抑制酵素活性 百分比(%)
黃水茄 161 15.1% 2%
仙鶴草 4086 55.8% 4%
乾薑 115 9.8% 0%
石斛 391 7.0% 0%
益母草 358 2.8% 0%
綠茶葉 3571 52.2% 59%
由表4.1、圖 4.8~圖 4.13 及圖 4.14 顯示用 α-glucosidase-CM5 晶片篩選黃水茄、仙鶴草、乾薑、石斛、益母草等科學中藥及綠茶 葉之結合量、EGCG 阻斷比,以及抑制酵素活性百分比的結果:在 五種科學中藥及綠茶葉中知道EGCG 阻斷比除了仙鶴草(55.8%)、
綠茶葉(52.2%)較明顯外,其餘的科學中藥 EGCG 阻斷比效果並 不好。在抑制酵素活性項目中,只有綠茶葉有較佳的抑制作用。
圖 4.15 顯示仙鶴草的水萃取液及甲醇萃取液的酵素活性分析 試驗發現:用甲醇或水來萃取仙鶴草,其抑制酵素活性的結果相差 不大。本實驗決定用甲醇萃取生藥樣品,原因如下:第一,甲醇具 有與水接近的極性和較佳的細胞滲透性,因此可從生藥中萃取出比 水萃物更多種類的不同成分。第二,由於CM5 晶片特性容易與醣類 產生非特異性吸附,因此採取甲醇萃取物亦可減少醣類的萃取。第 三,由於生藥內的蛋白質成分也容易與固定在晶片上的蛋白質酵素 產生非特異性鍵結,採用甲醇作為萃取溶液將可避免萃取出生藥內 蛋白質的成分。在萃取過程中,先將甲醇萃取液集中後過濾去除殘
表4.1 用 α-glucosidase-CM5 晶片篩選黃水茄、乾薑、石斛、
仙鶴草、益母草及綠茶葉之結合量(RU)、EGCG 阻斷比(%),
以及抑制酵素活性百分比(%)的結果。
渣,以減壓濃縮方式將萃取液之甲醇溶劑抽乾;再用水回溶抽乾萃 取物,以抽氣過濾去除不溶物後,再將濾液減壓濃縮,如此就無甲 醇殘餘生藥樣品的問題。
另一方面,在酵素活性分析試驗中Blank 當對照組,EGCG 當 控制組;就 EGCG 而言,其濃度愈高,抑制 α-glucosidase 效果愈 好;當濃度在5 mg/ mL 時,其抑制酵素活性百分比已達到 97%。
圖4.15 仙鶴草的水萃取液及甲醇萃取液的酵素活性分析試驗
100
81
3
96 95 100 99