物(DATS)對細胞激素刺激之腸道上皮細胞株 IEC-18 的影響
(一)、不同濃度 GO 對細胞生長情形及 NO 含量之影響
0.25、0.5、1、2.5、5 µg/ml)共培養 24hr。Two-way ANOVA 分
析顯示GO 濃度與 cytokine 處理並不影響細胞增生，且 GO 和 Cytokine 間也無交互作用。
在MTT 分析結果中(表六)與增生實驗相似，不同濃度的 GO 無論在control 組或 CM 組均無作用；Two - way ANOVA 分析也 顯示CM 處理組細胞活性低於 control 組(P＜0.01)，但與 GO 間 並沒有交互作用。
表七顯示不同GO 濃度及 CM 刺激處理對於細胞產生一氧化 氮(NO)的影響，結果顯示 control 組及 CM 組均以 GO 0.25 組有
最多的NO 產生，但 GO 濃度增加至 5 µg/ml 時，細胞產生的 NO 反而降低。Two - way ANOVA 分析顯示，CM 刺激顯著增加 IEC-18 生合成 NO (P=0.02)；GO 濃度也對細胞 NO 的產生有顯 著影響(P=0.04)，但 cytokine 處理與 GO 處理間並沒有交互作用。
(二)、不同濃度 DAS 對於細胞生長情形及 NO 含量之影響 在表八增生實驗中，不論是否加入 CM 刺激，不同濃度的 DAS 培養 24hr 後，對細胞增生並無影響。Two-way ANOVA 分 析不同DAS 濃度與 cytokine 處理組間的相關性與交互作用時，
Cytokine 與 DAS 濃度對於細胞增生皆無影響，兩者間也無交互
作用。
MTT 分析結果(表九)也顯示，不同濃度的 DAS 無論在 control 組或CM 組都沒有顯著的差異；當以 two - way ANOVA 分析不 同DAS 濃度與 cytokine 處理組間的相關性與交互作用時，結果 顯示加入CM 處理組細胞活性顯著低於 control 組(P＜0.01)，但 cytokine 與 DAS 間並沒有交互作用。
不同DAS 濃度及 cytokine 刺激對細胞產生一氧化氮(NO)的 影響結果顯示在表十，其中control 組隨加入的 DAS 濃度增加，
細胞產生的NO 濃度有增加的趨勢。在 CM 組中，加入 DAS 後 均使細胞的NO 濃度高於 DAS 0 組，且以 DAS 0.01 組的 NO 濃 度最高。以two- way ANOVA 分析不同 DAS 濃度與 cytokine 處 理組間的相關性與交互作用時，結果顯示CM 刺激下，細胞產生 的NO 濃度比 control 組高(P＜0.01)；但是 DAS 處理及 cytokine 與DAS 處理間的交互作用均未有顯著效果。
(三)、不同濃度 DADS 對於細胞生長情形及 NO 含量之影響 表十一增生實驗中，不同濃度的DADS 培養 24hr 後，不論 是否給予CM 刺激，隨著 DADS 濃度增加，細胞增生率隨之遞減。
Two-way ANOVA 分析結果顯示，Cytokine 處理對於細胞複製率
和cytokine 間並沒有顯著的交互作用。
MTT 實驗中(表十二)，不同濃度的 DADS 無論在 control 組 或CM 組都沒有顯著的影響；但是在 two - way ANOVA 分析中，
顯示CM 處理組細胞活性低於 control 組(P＜0.01)，但細胞激素 處理與DADS 間並沒有交互作用。
不同DADS 濃度及 cytokine 刺激對於細胞產生一氧化氮(NO) 的影響如表十三所示，在沒有CM 刺激下，DADS 的加入使得細 胞產生的NO 濃度皆低於 DADS 0 組。以 two - way ANOVA 分 析不同DADS 濃度與 cytokine 處理組間的相關性與交互作用 時，結果顯示CM 刺激下細胞產生的 NO 顯著高於 control 組(P
＜0.01)；至於 DADS 處理及 cytokine 與 DADS 處理間交互作用 均未達顯著效果。
(四)、不同濃度 DATS 對於細胞生長情形及 NO 含量之影響 增生實驗中(表十四)細胞將於不同濃度的 DATS 條件下培養 24hr，結果顯示不論是否加入 CM，隨著 DATS 濃度增加，細胞 增生率逐漸降低。Two-way ANOVA 分析顯示 cytokine 刺激及 DATS 處理對細胞增生率皆有影響(P＜0.01)，但其兩者間並沒有 交互作用。
在MTT 實驗中(表十五)，不論是否加入 CM，DATS 濃度愈
高細胞活性則愈低。Two - way ANOVA 分析 DATS 濃度與 cytokine 處理組間的相關性與交互作用時，顯示 CM 處理組細胞
活性低於control 組(P＜0.01)，且 DATS 抑制細胞活性(P＜
0.01)；不同於增生分析結果，在 MTT 結果方面，Cytokine 與 DATS 具有交互作用(P=0.03)。
DATS 及 cytokine 刺激對於細胞產生一氧化氮(NO)的影響顯 示於表十六，在control 組中，DATS 對細胞產生 NO 的濃度有先 減後增的情形。在CM 組中，則是隨著 DATS 濃度的增加，細胞 產生的NO 有逐漸降低的趨勢。Two- way ANOVA 分析顯示，CM 刺激下細胞產生的 NO 濃度顯著高於 control 組 (P＜0.01)，
DATS 處理對細胞產生 NO 也具有影響(P＜0.01)，兩者間有顯著 交互作用(P＜0.01)。
三、 GO、DAS、DADS、DATS 對於細胞激素刺激之腸道 上皮細胞株 IEC-18 誘發型一氧化氮合成酶( iNOS ) 活性及蛋白質表現量之影響
依據不同大蒜成分處理之細胞產生NO 含量及細胞活性 (MTT)分析結果比較後(圖一、圖二)，選取在不影響細胞活性時，
細胞產生最多NO 濃度組培養，即 GO 濃度為 0.25 µg/ml、
細胞培養至八分滿時，分別加入載劑(DMSO，簡稱 CON 組) 、細胞激素(CM，簡稱 CM 0 組) 、大蒜精油(0.25 µg/ml ， 簡稱GO 組)及 CM、二烯丙基硫化物(0.01 mM，簡稱 DAS 組) 及CM、二烯丙基二硫化物(0.01 mM，簡稱 DADS 組)及 CM、
二烯丙基三硫化物(0.01 mM，簡稱 DATS 組)及 CM，培養 18 小 時後收下細胞均質後進行iNOS 活性及 western 分析。
圖三顯示加入 CM 刺激後，以含14C-arginine 之分析 buffer 與細胞iNOS 粗萃物一同在 37℃培養 0、10、45 分鐘後分析
14C-citrulline 及 NO 含量來計算 iNOS 活性，觀察此二種方法之
結果何者較適用。結果顯示分析14C-citrulline 的方法隨培養時間 增加，iNOS 活性也隨之增加。因此我們利用14C-arginine 法培 養45 分鐘來觀察各組 iNOS 活性。
圖四為大蒜成分對於細胞iNOS 活性之作用，結果在 DATS 0.01 mM 處理時，iNOS 活性有下降的情形。
cytokine 刺激下加入不同大蒜成分對於細胞 iNOS 蛋白質表 現的情形顯示(圖五)，加入 CM 刺激後，iNOS 蛋白質表現量比 control 組增加。在 CM 刺激下，只有加入在 DADS 0.01 mM 及 DATS 0.01 mM，蛋白質表現量比 CM 0 組增加。