實驗材料與儀器

(一)、化學試藥

[6-³H] Thymidine (TRA61, 5 mCi/5 ml)：購自英國 Amersham 公 司。

2-Mercaptoethanol (MSH)：購自美國 Sigma 公司。

3,3-diaminobenzine (DAB)：購自美國 Sigma 公司。

30% Acrylamide/ N,N-methylene-Bis-acrylamide 溶液(37.5：1)：

購自德國Merck 公司。

95 % Alcohol：購自台灣省菸酒公賣局。

Antimycin A：購自美國 Sigma 公司。

Bio-Rad protein assay：購自美國 Bio-Rad 公司 Bovine Serum Albumin：購自美國 Sigma 公司。

Butylated hydroxytoluene (BHT)：購自美國 Sigma 公司。

Calcium Chloride (CaCl₂)：購自美國 Sigma 公司。

Citrulline：購自美國 Sigma 公司。

Dimethyl sulfoxide (DMSO)：購自美國 Sigma 公司。

Dithiothreitol: 購自美國 Sigma 公司。

Dowex AG50WX-8：購自美國 Sigma 公司。

Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)：購自美國 Sigma 公司。

Ethylene diaminetetra acetic acid (EDTA)：購自美國 Sigma 公司。

Fetal bovine serum (FBS)：購自美國 Gibco 公司。

Glycine：購自德國 Merck 公司。

Goat anti rabbit IGg (iNOS 二級抗體) ：購自加拿大 Chemicon 公司。

Hepes：購自美國 Sigma 公司。

Hydrocholorice acid (HCl, 37 %)：購自英國 Merck 公司。

Insulin：購自美國 Gibco 公司。

Leupeptin：購自美國 Roche 公司。

Lipopolysaccharide (LPS, L6511)：購自美國 Sigma 公司。

L-[U -¹⁴C] arginine monohydrochloride (50 µCi/ml)：購自英國 Amersham 公司。

Methanol：購自台灣景明化學工業股份有限公司。

MTT cell growth kit：購自加拿大 Chemicon 公司。

NADH：購自美國 Sigma 公司。

Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (β-NADPH)：購 自日本合光淳藥工業株式會社。

Nitrite/Nitrate assay kit：購自美國 Roche 公司。

iNOS 抗體(M-19):sc-650：購自美國 Santa cruz 公司。

Pepstatin：購自美國 Roche 公司。

Penicillin -Streptomycin: 購自美國 Gibco 公司。

Perchloric acid (PCA) ：購自美國 GFC 公司。

Phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)：購自美國 Roche 公司。

Polyoxyethylenesorbitan monolaurate (Tween 20)：購自美國 Sigma 公司。

Potassium Chloride (KCl)：購自美國 Sigma 公司。

Potassium nitrate (KNO₃)：購自英國 Merck 公司。

Potassium phosphate (KH₂PO₄)：購自美國 Sigma 公司。

Pyruvate：購自德國 Boehringer Mannheim 公司。

Recombinant rat Interferron γ (IFNγ)：購自美國 Endogen 公司。

Recombinant rat Interleukin-1β (IL-1β)：購自美國 Endogen 公 司。

Recombinant rat TNF α：購自美國 Endogen 公司。

Skin milk：購自台灣安佳公司。

Sodium borohydride (BH₄)：購自美國 Sigma 公司。

Sodium chloride (NaCl)：購自美國 Sigma 公司。

Sodium dodecyl sulfate (SDS)：購自美國 Sigma 公司。

Sodium nitrite (NaNO₂)：購自英國 Merck 公司。

Sodium phosphate (NaHPO₄)：購自美國 Sigma 公司。

Sucrose：購自美國 Sigma 公司。

Triethanolamine (TEA/HCl)：購自美國 Fluka 公司。

Trizma bases (Tris)：購自美國 Sigma 公司。

Trypan Blue Solution (0.4 %)：購自美國 Sigma 公司。

Trypsine-EDTA (0.25%)：購自美國 Gibco 公司。

t-Octylphenoxypoly-ethoxyethanol (Triton-X100)：購自美國 Sigma 公司。

(二)、儀器設備

液態氮桶：美國 TAYLOR-WHARTON 公司， 750RS。

控溫離心機：德國 Hettich 公司， UNIVERSAL 32 R。

ELISA reader：美國 VERSAmax 公司， BO2153。

無菌操作台(Laminar flow)：美國 NUAIR 公司， Biological Safety Cabinets。

二氧化碳恆溫培養箱(CO₂ incubator)：美國 REVCO 公司。

倒立式顯微鏡: 日本 Nikon 公司，Diaphot 300。

光學顯微鏡(Microscope)：日本 Nikon 公司，YH-2。

血球計數盤(Hemocytometer)：德國 Boeco 公司。

Semiautomatic Cell Harvester 12 Ch：挪威 Skatron 公司。

閃爍偵測器(Liquid Scitillation Analyzer)：美國 Packard 公司，

2100TR。

乾浴槽：美國 BOEKEL 公司，11 0002。

電泳槽：美國 Bio-Rad 公司。

Polyvinylidene difluoride membrane (PVDF)：美國 NEN 公 司，NEF 1002。

(三)、大蒜成分試藥

1. 大蒜精油( garlic oil, GO )由中山醫學大學營養所李宗貴老師 實驗室所提供。

取1 公斤新鮮大蒜於 Warring Blender 中打碎，加入 3 公升 蒸餾水，以水蒸氣蒸餾法( steam distillation method )抽取可 揮發部分，所取得油狀物即為大蒜精油。每一回抽出時間為

4 小時，每公斤生鮮大蒜約可抽取 2 - 2.5 克精油。以氣相層 析儀(gas chromatograph, GC )分析精油成分，GC 分析條件 採用氮氣流速每分鐘 1.8 毫升，並使用火焰離子偵測器進行 偵測，管柱溫度以初溫 50℃，每分鐘 5℃的速度升至 200 ℃ 終溫，然後以200℃維持 10 分鐘，所得精油主要組成分別 為：10% diallyl sulfide, 2% methyl allyl disulfide, 8% methyl allyl trisulfide, 39% diallyl disulfide, 31% diallyl trisulfide。

2. 二烯丙基硫化物( diallyl sulfide, DAS )購自 Fluka Chemical Co.， 純度 GC 97 %，( H₂C＝CHCH₂ )₂S。

3. 二烯丙基二硫化物( diallyl disulfide, DADS )購自 Aldrich 公 司， 純度 GC 80%，( H₂C＝CHCH₂ )₂S₂。

4. 二烯丙基三硫化物( diallyl trisulfide, DATS )購自 LKT Laboratories，Inc. 公司，純度 GC 99 % ，( H₂C＝

CHCH₂ )₂S₃。

(四)、細胞株

腸道上皮細胞株 IEC-18 購自新竹食工所菌種中心，細胞培 養在DMEM 培養液(含 5 % FBS，1unit/ml insulin，1%抗生素) 中，並置放於37℃含 5% CO₂之37℃二氧化碳培養箱中，實驗 所用細胞繼代數維持在n+7 至 n+10 代間。