利用time point assay這個方式,來進一步確認前項實驗的結果,過程為在細 胞加入病毒顆粒後的不同時間點如-1 (即加入病毒前一小時,亦即依照前面藥物 測試實驗重複為本實驗的控制組之一)、0、2、4、6、8、10、12、16、20 小時後,
加入藥物,藥物濃度以由前面測試藥物實驗時可測得PFU10%的濃度來作測試,
在經每個時間點加藥後,放置在5% CO2 37˚C的恆溫培養箱中經一小時後,加入 含有1.1% methyl cellulose的 5% FBS MEM medium,再放置回 5% CO2 37˚C的恆 溫培養箱培養5~7 天後,固定細胞並計數plaque數。其中控制組的control-1 為未 加藥物與病毒,而control-2 為加入病毒但無藥物。
在T1 的部份,因為在前面的實驗加入藥物未看到 PFU 的百分比下降,因此 僅隨意取一個濃度300 μM 來進行測試,經過測試在-1 小時時間點溶斑數為 104、
88、114,0 小時時間點溶斑數為 105、90、112,2 小時時間點溶斑數為 106、91、
120,4 小時時間點溶斑數為 107、92、117,6 小時時間點溶斑數為 109、92、118,
8 小時時間點溶斑數為 104、87、120,10 小時時間點溶斑數為 103、88、114,
12 小時時間點溶斑數為 108、89、116,16 小時時間點溶斑數為 107、92、117,
20 小時時間點溶斑數為 106、90、120。其控制組的 control-1 部份重複三次其溶 斑數均為0,分別將每個濃度的溶斑數與當次控制組的 control-2 溶斑數 105、89、
119 個進行計算,以 control-2 的 PFU 數目為分母,實驗組各濃度的 PFU 數目為 分子,相除並乘以百分之百,計算出此藥物在不同濃度下的PFU (%),又利用三 次重複實驗結果計算出其平均值在-1 小時時間點為 97.91%,0 小時時間點為 98.41%,2 小時時間點為 101.35%,4 小時時間點為 101.20%,6 小時時間點為 102.11%,8 小時時間點為 99.21%,10 小時時間點為 97.59%,12 小時時間點為 100.11%,16 小時時間點為 101.20%,20 小時時間點為 100.97%,其標準差在-1 小時時間點為1.83%,0 小時時間點為 3.76%,2 小時時間點為 0.78%,4 小時時 間點為2.60%,6 小時時間點為 2.57%,8 小時時間點為 1.55%,10 小時時間點 為1.60%,12 小時時間點為 2.69%,16 小時時間點為 2.60%,20 小時時間點為
0.14%。利用上述結果製圖,製成數據列表與折線圖 (圖十二 A、B)。
在T2 的部份,由前面實驗的折線圖取得可得到 PFU 10%左右的藥物濃度 300 μM 來進行測試,而又因第一次實驗時,時間點到 4 小時之後 PFU (%)便持續 100%,因此後面兩次重複實驗均只重複-1、0、2、4 這幾個時間點。經過測試在 -1 小時時間點溶斑數為 10、6、8,0 小時時間點溶斑數為 2、1、1,2 小時時間 點溶斑數為183、88、89,4 小時時間點溶斑數為 216、100、112,6 小時時間點 溶斑數為216,8 小時時間點溶斑數為 213,10 小時時間點溶斑數為 212,12 小 時時間點溶斑數為212,16 小時時間點溶斑數為 215,20 小時時間點溶斑數為 217。其控制組的 control-1 部份重複三次其溶斑數均為 0,分別將每個濃度的溶 斑數與當次控制組的control-2 溶斑數 215、106、127 個進行計算,以 control-2 的PFU 數目為分母,實驗組各濃度的 PFU 數目為分子,相除並乘以百分之百,
計算出此藥物在不同濃度下的PFU (%),又利用三次重複實驗結果計算出其平均 值在-1 小時時間點為 5.54%,0 小時時間點為 0.89%,2 小時時間點為 79.40%,4 小時時間點為94.33%,6 小時時間點為 100.47%,8 小時時間點為 99.07%,10 小時時間點為98.60%,12 小時時間點為 98.60%,16 小時時間點為 100.00%,20 小時時間點為100.93%,其標準差在-1 小時時間點為 0.83%,0 小時時間點為 0.09%,2 小時時間點為 8.14%,4 小時時間點為 6.14%。利用上述結果製圖,製 成數據列表與折線圖 (圖十三 A、B)。
在T3 的部份,由前面實驗的折線圖取得可得到 PFU 10%左右的藥物濃度 500 μM 來進行測試,而又因第一次實驗時,時間點到 4 小時之後 PFU (%)便持續 100%,因此後面兩次重複實驗均只重複-1、0、2、4 這幾個時間點。經過測試在 -1 小時時間點溶斑數為 7、6、5,0 小時時間點溶斑數為 1、3、2,2 小時時間點 溶斑數為164、126、116,4 小時時間點溶斑數為 190、149、126,6 小時時間點 溶斑數為218,8 小時時間點溶斑數為 221,10 小時時間點溶斑數為 223,12 小 時時間點溶斑數為220,16 小時時間點溶斑數為 219,20 小時時間點溶斑數為 221。其控制組的 control-1 部份重複三次其溶斑數均為 0,分別將每個濃度的溶
斑數與當次控制組的control-2 溶斑數 220、153、121 個進行計算,以 control-2 的PFU 數目為分母,實驗組各濃度的 PFU 數目為分子,相除並乘以百分之百,
計算出此藥物在不同濃度下的PFU (%),又利用三次重複實驗結果計算出其平均 值在-1 小時時間點為 3.75%,0 小時時間點為 1.36%,2 小時時間點為 84.26%,4 小時時間點為95.96%,6 小時時間點為 99.09%,8 小時時間點為 100.45%,10 小時時間點為101.36%,12 小時時間點為 100.00%,16 小時時間點為 99.35%,
20 小時時間點為 100.45%,其標準差在-1 小時時間點為 0.50%,0 小時時間點為 0.80%,2 小時時間點為 10.79%,4 小時時間點為 8.97%。利用上述結果製圖,
製成數據列表與折線圖 (圖十四 A、B)。
在T6 的部份,由前面實驗的折線圖取得可得到 PFU 10%左右的藥物濃度 700 μM 來進行測試,經過測試在-1 小時時間點溶斑數為 1、1、2,0 小時時間點溶 斑數為2、1、2,2 小時時間點溶斑數為 97、98、92,4 小時時間點溶斑數為 149、
135、128,6 小時時間點溶斑數為 144、140、135,8 小時時間點溶斑數為 168、
162、142,10 小時時間點溶斑數為 198、180、173,12 小時時間點溶斑數為 237、
227、197,16 小時時間點溶斑數為 246、228、201,20 小時時間點溶斑數為 250、
226、203。其控制組的 control-1 部份重複三次其溶斑數均為 0,分別將每個濃度 的溶斑數與當次控制組的control-2 溶斑數 248、225、202 個進行計算,以 control-2 的PFU 數目為分母,實驗組各濃度的 PFU 數目為分子,相除並乘以百分之百,
計算出此藥物在不同濃度下的PFU (%),又利用三次重複實驗結果計算出其平均 值在-1 小時時間點為 0.61%,0 小時時間點為 0.75%,2 小時時間點為 42.74%,4 小時時間點為61.15%,6 小時時間點為 62.37%,8 小時時間點為 70.01%,10 小 時時間點為81.83%,12 小時時間點為 97.99%,16 小時時間點為 100.01%,20 小時時間點為100.58%,其標準差在-1 小時時間點為 0.33%,0 小時時間點為 0.28%,2 小時時間點為 3.29%,4 小時時間點為 1.92%,6 小時時間點為 4.39%,
8 小時時間點為 2.14%,10 小時時間點為 3.31%,12 小時時間點為 2.69%,16 小時時間點為1.16%,20 小時時間點為 0.20%。利用上述結果製圖,製成數據列
表與折線圖 (圖十五 A、B)。