第四章 材料與方法
4.1 儀器設備與使用藥劑
4.1.1 儀器設備 1. 恆溫室：
五坪大的空調控溫室，溫度保持在 24 ± l ℃。
2. 蠕動幫浦：
培養母槽使用 EYELA 公司，型號 MP－1000 之定量幫浦兩台，
用以控制供應母槽之流量。
3. 幫浦管：
廠牌 Materflex，用於母槽培養液輸送之型號為 H-96400-14。輸送 管材質為矽膠材質，不具毒性，可避免影響毒性試驗結果。
4. 純水設備：
生物試驗用水，包括過濾（0.5 µm），軟水，離子交換，蒸餾設備
（Aquatron A4S, Bibly），蒸餾水儲水桶 （60L container, Nalgene）；
去離子水製造機 （Milli-Q Plus, Millipore, outflow conductivity 18.2MΩcm）。也用於藥品配製用水及實驗器皿之二次清洗用水 5. 抽氣幫浦：
SINKU KIKO 公司，型號 ULVACG-5 及 G-50。用於過濾營養鹽 及 Isoton II 時使用。
6. 基質儲存瓶
容量約為5 公升，直徑為 25 公分大小的血清瓶。主要用於培養母 槽時，連續入流之基質存放所用；每次使用前皆需經過清洗再滅
菌才可使用。
7. 連續式培養母槽：
使用體積 5 公升，直徑 18 公分之掀蓋式玻璃槽。於體積 4 公 升處開口做為溢流，再於體積 2 公升處開口做為取樣之用。連續 式培養母槽作為連續式藻類培養之用。
8. 母槽曝氣幫浦與氣體流量計：
幫浦為一般水族箱所使用之曝氣裝備；另外再加上氣體流量計，
用於控制檢測氣體流量之用，連續培養之母槽的曝氣量大約為：
400 mL/min。
9. 電磁攪拌器：
藻液攪拌用，避免藻類在連續生長母槽中產生沉澱情形，另外可 讓進流基質（medium）迅速均勻分佈於母槽中及增加藻液曝氣機 會，提供所需CO2 之作用。
10. 曝氣桶：
曝氣設備使用體積10 公升之純水桶。開口處嵌入一矽膠塞，一 頭接氣體鋼瓶，一頭接沸石並伸入純水筒底部曝氣，在純水筒開 口處附近開一小洞以平衡壓力，曝氣完成後關緊筒蓋以減少外界 空氣之進入。
11. pH meter：
使用Suntex 公司，型號 SP-7 之 pH 測定儀。其精確度為 ± 0.01。
12. DO meter︰
美國 YSI 公司數字型溶氧測定器 Model 5100；BOD 探頭為
準度為 ±0.01 mg/L。
13. 毒性試驗瓶：
使用體積 300 毫升，直徑 8 公分之 BOD 玻璃瓶。開口處有玻 璃瓶塞，實驗時可達到密封狀態，讓整個試驗成為一個封閉式系 統。
14. 震盪培養箱：
自行裝配之培養箱二組，台面可拆換，以角鋼為架構主體，長×
寬×高為 135×107×90 公分，頂面履以 120 公分超高色溫燈管 (40oC,20W) 10 支，頂面可依據光面強弱上下調整，內有迴轉式 振盪混合器（WEST 公司，Ferstek Model S103），搖動速度可超 過 100 rpm，機座台面分別可裝 300 mL BOD 瓶 66 座及 105 座。培養箱置於溫控室內，控制溫度在 24 ± l℃。作為藻類批次 式培養與BOD 瓶密閉式藻類毒性試驗之用。
15. 電子顆粒計數器：
使用 Coulter Counter，型號 MULTISIZER II （Coulter electronincs 公司），計數細胞數。使用前後需用 ISOTON 潤絲 （rinse） 清 理。採用 50 µm 孔徑之玻璃管，適用顆粒直徑範圍為 1 µm~30 µm，測試時間約在 11~13 秒間。
16. 電腦：
使用中央處理器為 P-3 之桌上性電腦，視窗 XP （Windows XP）
之程式並配合電子顆粒計數器所需之軟體 （Multisizer Accucomp V. 2.01） 來進行顆粒計數之分析。使用時可直接將電子顆粒計數 器之數值輸送至電腦中進行分析。
17. 光度計：
TOPCON 產牌，型號 IM-2D，單位是 lux。用於母槽及震盪培 養箱之檯面光度量測。
18. 氣體鋼瓶：
購於洽隆，含 0.5％ CO2 的高壓氮氣鋼瓶，純粹 N2 的純度達 99.5％，氣體體積為 6 立方公尺。用於實驗中稀釋水之曝氣，以 降低營養基中的 DO 值，且能提供實驗期間足夠量的碳源。
19. 定量吸量管：
使用 SOCOREX 可調式移液器，大小為 100～1000 µL 及 1～5 mL 兩種。以及 NICHIRO，Nichipet EX，20～200 µL、10～100 µL 以及2～20 µL 等 3 種。
20. 分析天平：
產牌 Precisa 205A。
21. 滅菌釜：
使 用 HIRAYAMA 公 司 ， 型 號 HA-300M 的 滅 菌 釜 在 l.l kg/cm2，121℃ 下對實驗器皿滅菌 15 分鐘。
22. 烘箱：
廠牌 Memmet，做為烘乾玻璃器皿用，溫度約在 50℃ 左右。
23. 無菌操作台：
使用造鑫公司製造的 Laminar Flow 操作台，以防止植種過程及 配製營養基時受到污染。
24. 藻種及營養基質之保存：
使用 Whirpool 冰箱將藻、藥品以及營養基質保存於 4℃ 以下。
25. 分析儀器
高效能液相層析儀（HPLC），Waters 2996。
26. 濾紙與濾膜
使用 Gelman Science 九型號 66191 之 0.45 µm （過濾營養基、
及水樣前處理） 及 60301 之 0.2 µm （過濾 Isoton II） 兩種孔 徑之濾紙。
4.1.2 使用藥劑
本研究所使用的藥劑包括分析化合物濃度用藥品、培養用營養鹽 與實驗用毒性化學物質三部份。
1. HPLC 用藥： Acetonitrile，99.97％ HPLC grade。用以作為移動相。
2. 培養用營養鹽，種類詳見 4.2.1 節，純度皆高於 95%。
3. 毒性化學物質與溶劑：七種苯醌類加上三個萘醌與九個蒽醌類共 17 個，純度皆高於 97%，購自友和，溶劑為 DMSO 二甲亞楓。
詳細化合物名稱、縮寫如下表4.1.1
表4.1.1 實驗用毒化物
本實驗所選用的藻種為 Pseudokirchneriella subcapitata，月芽藻，
是一種於現今廣用於藻類生物試驗研究之物種。像是US EPA、ISO、
OECD 及 APHA 等單位之藻類毒性試驗法，皆以此物種為標準試驗
Toxicants 縮寫 中文
9,10-anthraquinone ATQ 9,10-蒽醌 1-hydroxyanthraquinone 1-hATQ 1-羥基-9,10-蒽醌 2-hydroxyanthraquinone 2-hATQ 2-羥基-9,10-蒽醌 1,4-dihydroxyanthraquinone 1,2-dhATQ 1,4-二羥基-9,10-蒽醌 1,2-dihydroxyanthraquinone 1,4-dhATQ 1,2-二羥基-9,10-蒽醌 1,8-dihydroxyanthraquinone 1,8-dhATQ 1,8-二羥基-9,10-蒽醌 1,2,4,-trihydroxyanthraquinone 1,2,4-trihATQ 1,2,4,-三羥基-9,10-蒽醌
1,4-naphthoquinone 1,4-NAP 1,4-萘醌 2-hydroxy-naphthoquinone 2-OH-1,4-NAP 2-羥基-1,4-萘醌
Mnadione M 甲基萘醌
1,4-benzoquinone BQ 對苯醌
2-chloro-1,4-benzoquinone 2-Cl-BQ 2-氯對苯醌 2,5-dichloro-1,4-benzoquinone 2,5-diCl-BQ 2,5-二氯對苯醌
Tetrachloro-1,4-benzoquinone tetraCl-BQ 四氯對苯醌 methyl-1,4-benzoquinone CH3-BQ 甲基對苯醌 2,5-dimethyl-1,4-benzoquinone 2,5-diCH3-BQ 2,5-二甲基對苯醌
Tetramethy-1,4-benzoquinone tetraCH3-BQ 四甲基對苯醌