• 沒有找到結果。

文獻發現所謂低能量光治療,是指一種輸出功率和能量都相當低的光源,一般來 說所使用的照射功率為數毫瓦( Milliwatts ),其照射能量密度介於 10-2 ~ 102 J/cm2

【Sandford et al.,1994】,過去學者大多討論實驗中不同光照波長與能量對細胞生理表 現的影響,鮮少著墨於細胞在不同激功率刺激下的行為表現,因此本實驗想藉由細胞 在相同波長與能量刺激下,探討不同功率(不同光刺激時間)是否也會影響到細胞的行 為表現。

實驗前先將濃度為1×105 cells / ml 的老鼠骨細胞(UMR-106)植入培養皿中進行培 養,讓細胞貼附24小時後開始進行光照實驗,其中所使用的照射功率分別為(1)紅光 652nm,2.71與3.89mW/cm2;(2)黃光590nm,2.71與3.89mW/cm2;(3)藍光415nm,3.89 與4.17mW/cm2,於固定光照能量下改變光刺激時間,在光照後第1~7天量測粒線體活 性、蛋白質分泌與細胞增生。

3-1 不同功率對粒線體活性之探討

圖十九與圖二十分別代表三種波長(紅光、黃光、藍光)在不同功率刺激下,細胞 粒線體活性的表現情形,實驗組與控制組量測重複三次以上(n 3)≧ ,數據中將所量測 之粒線體活性對細胞數進行平均(N0與Ni分別為為控制組及實驗組之 MTT 吸光值除 以細胞數量後所得的數值,即N0=OD控制組/cell number、Ni=OD實驗組/ cell number ),數 據中的比值是將光照實驗組除以未照光的控制組之平均值(Ratio= Ni / N0),圖中之 P-value 則為實驗組與控制組相互比較之統計參數。

由數據中發現,細胞在三種波長照射下,即使所使用的刺激功率不同,粒線體活 性被促進或抑制的效果似乎並沒有明顯的改變( P>0.05 ),換句話說,粒線體活性在低 能量0.5 J/cm2的刺激下,無論藍光使用功率為3.89 或 4.17mW/cm2,促進的效果都來 的比另外兩種波長好;而在中能量5 J/cm2的刺激下,細胞活性在紅光與黃光不同功 率照射下(2.71 與 3.89mW/cm2),效果則比藍光有更明顯的提升效果,其中又以黃光 在能量5 J/cm2刺激細胞活性的效果最佳;同樣在數據中也發現,在三種波長不同功 率而相同的中低能量(0.5 與 5 J/cm2)照射下,細胞粒線體活性在光照後的前三天有漸 漸提升的趨勢存在,之後則隨著培養天數增加而趨於平緩。因此從上述的實驗數據中 發現,相較於光源輸出功率的差異,似乎實驗中所使用的照射能量擁有更具決定性的 影響因素,在相同的波長與能量刺激下,不同功率所影響的粒線體的活性似乎都沒有 明顯差異(P>0.05),同時粒線體活性的延遲現象也沒有因為功率的改變而有所差別。

過去也有學者利用光照刺激人類的皮膚纖維母細胞(WS1),其中所使用的低能量 雷射包括: (1)氦氖雷射(波長 632.8nm,照射功率 2.206 mW/cm2) ,(2)二極體雷射(波 長 830nm,照射功率 6 mW/cm2),(3)Nd:YAG 雷射(波長 1064nm,照射功率 12.7 mW/cm2);實驗中利用三種不同波長與功率的雷射照射,而固定刺激能量(5 與 16

J/cm2),發現在不同功率但相同能量的刺激下(改變光照時間),細胞存活率皆沒有明 顯的差異【Houreld et al.,2008】,此一文獻呼應上述的實驗結果,即在本實驗所採取 的光刺激系統中,能量應為主要的決定性因素而非功率。然而,無法否認的是本實驗 所採用的功率相差並不大,雖然細胞在相同能量刺激下所使用的功率不同,但所改變 的照射時間亦甚短,也許不足以產生顯著性的影響,因此,如欲驗證能量是比功率更 具影響性的光刺激參數,未來將挑選功率差異更大的光源元件以玆證明。

0 0.5 1 1.5 2 2.5

1 3 5 7

Culture Time After Irradiation ( Days )

Ratio of Cell Viability

0.5J(3.89mW) 0.5J(2.71mW)

5J(3.89mW) 5J(2.71mW)

10J(3.89mW) 10J(2.71mW)

0 0.5 1 1.5 2 2.5

1 3 5 7

Culture Time After Irradiation ( Days )

Ratio of Cell Viability

0.5J(3.89mW) 0.5J(2.71mW) 5J(3.89mW) 5J(2.71mW) 10J(3.89mW) 10J(2.71mW)

圖十九 於不同功率下(2.71 與 3.89mW/cm2),光刺激骨細胞粒線體活性之 趨勢(上圖:紅光 652nm;下圖:黃光 590nm)。(P>0.05;同能量不 同功率刺激下,細胞粒線體活性並無明顯的差異)

0 0.5 1 1.5 2 2.5

1 3 5 7

Culture Time After Irradiation ( Days )

Ratio of Cell Viability

0.5J(3.89mW) 0.5J(4.17mW)

5J(3.89mW) 5J(4.17mW)

10J(3.89mW) 10J(4.17mW)

圖二十 於不同功率下(2.71 與 3.89mW/cm2),藍光(415nm)刺激骨細胞粒線 體活性之趨勢。(P>0.05;同能量不同功率刺激下,細胞粒線體活 性並無明顯的差異)

3-2 不同功率對細胞蛋白質分泌與細胞增生之探討

圖二十一至圖二十三分別代表三種波長(紅光、黃光、藍光)在不同功率刺激下,

細胞蛋白質分泌與細胞增生的行為表現,實驗組與控制組量測重複三次以上(n 3)≧ , 數據中將所量測之蛋白質濃度對細胞數進行平均(N0與Ni分別為為控制組及實驗組之 BCA 吸光值除以細胞數量後所得的數值,即 N0=OD控制組/cell number、Ni=OD實驗組/ cell number )。而細胞增生比值則是將光照實驗之細胞數量,組除以未照光的控制組細胞 數量之平均值。其中數據中的比值是將光照實驗組除以未照光的控制組之平均值 (Ratio= Ni / N0), 圖中之 P-value 則為實驗組與控制組相互比較之統計參數。

由數據中顯示,細胞在三種波長在相同能量而不同功率照射下,蛋白質分泌的濃 度與細胞增生被提升或抑制的效果,似乎並沒有明顯的改變( P>0.05 ),同時在低能量 0.5 J/cm2刺激下,無論藍光使用哪種功率,促進效果都來的比另外兩種波長好,而紅 光與黃光在中能量5 J/cm2刺激下,不同功率照射的效果則比藍光有更明顯的提升作 用,其中又以黃光在能量5 J/cm2刺激細胞活性的效果最佳;至於在的高能量10 J/cm2 刺激下,在三種波長不同功率的照射下,對於蛋白質的分泌與細胞增生皆有受到抑制 的影響。同時在數據中也發現,在三種波長的中低能量(0.5 與 5 J/cm2)不同功率照射 下,細胞所合成的蛋白質與增生能力,同樣在光照結束後的前五天有慢慢提升的趨 勢,並於第五天後則隨著培養天數增加而趨於平緩,因此推測可能的原因與上述相 同,認為光刺激能量似乎在光生物調節作用中,似乎佔有主要的決定性因素而非光照 功率,因此細胞在光源不同功率但相同能量的刺激下,無法有效改變電子的傳遞速 度,所以對於提升細胞合成蛋白質及增生效果,並沒有太大的改變。

0 0.5 1 1.5 2 2.5

1 3 5 7

Culture Time After Irradiation ( Days )

Ratio of protein concentration / cell

0.5J(3.89mW) 0.5J(2.71mW) 5(3.89mW) 5J(2.71mW) 10J(3.89mW) 10J(2.71mW)

0 0.5 1 1.5 2 2.5

1 3 5 7

Culture Time After Irradiation ( Days )

Ratio of Cell Numbers

0.5J(3.89mW) 0.5J(2.71mW) 5J(3.89mW) 5J(2.71mW) 10J(3.89mW) 10J(2.71mW)

圖二十一 於不同功率下(2.71 與 3.89mW/cm2),紅光(652nm)刺激骨細胞之趨 勢(上圖:細胞蛋白質分泌;下圖:細胞增生)。(P>0.05;同能量不 同功率刺激下,細胞蛋白質分泌與細胞增生表現並無明顯的差異)

0 0.5 1 1.5 2 2.5

1 3 5 7

Culture Time After Irradiation ( Days )

Ratio of protein concentration / cell

0.5J(3.89mW) 0.5J(2.71mW)

5J(3.89mW) 5J(2.71mW)

10J(3.89mW) 10J(2.71mW)

0 0.5 1 1.5 2 2.5

1 3 5 7

Culture Time After Irradiation ( Days )

Ratio of Cell Numbers

0.5J(3.89mW) 0.5J(2.71mW)

5J(3.89mW) 5J(2.71mW)

10J(3.89mW) 10J(2.71mW)

圖二十二 於不同功率下(2.71 與 3.89mW/cm2),黃光(590nm)刺激骨細胞之趨 勢(上圖:細胞蛋白質分泌;下圖:細胞增生)。(P>0.05;同能量不 同功率刺激下,細胞蛋白質分泌與細胞增生表現並無明顯的差異)

0 0.5 1 1.5 2 2.5

1 3 5 7

Culture Time After Irradiation ( Days )

Ratio of protein concentration / cell

0.5J(3.89mW) 0.5J(4.17mW)

5J(3.89mW) 5J(4.17mW)

10J(3.89mW) 10J(4.17mW)

0 0.5 1 1.5 2 2.5

1 3 5 7

Culture Time After Irradiation ( Days )

Ratio of Cell Numbers

0.5J(3.89mW) 0.5J(4.17mW)

5J(3.89mW) 5J(4.17mW)

10J(3.89mW) 10J(4.17mW)

圖二十三 於不同功率下(2.71 與 3.89mW/cm2),藍光(415nm)刺激骨細胞之趨 勢(上圖:細胞蛋白質分泌;下圖:細胞增生)。(P>0.05;同能量不 同功率刺激下,細胞蛋白質分泌與細胞增生表現並無明顯的差異)

相關文件