再生神經組織切片評估

經過八週後，犧牲大鼠，將神經導管內再生的神經組織連同神 經導管取下，浸泡於2.5％ glutaraldehyde 水溶液一週，取出內有再 生神經組織之神經導管，將其分為三等分，利用刀片分別去除前後三 分之一，留下中間三分之一的部份置於2.5％ glutaraldehyde 水溶液 中，再將再生神經組織以含2.5％ glutaraldehyde、4％

paraformaldehyde 及 0.1 M cacodehyde 混合液固定 1-2 日，隨即將神 經以1％ OsO4 後固定約 2 小時，之後以 50～95％ 酒精脫水，再以 樹脂包埋，並將函再生神經組織之樹脂置入60～70 ℃烤箱中約 16 小 時，等待樹脂硬化。隨後將包埋之再生神經組織作橫向 1 μm 切片後，

以Toluidine blue 染色，當組織切片染色後，髓鞘與 Schwann cell 會 明顯成色。

3.8.1. 組織學定量分析

對再生神經組織切片先以接於顯微鏡的數位相機 （Nikon Coolpix 950, Japan）拍下數位影像，再利用彩色影像分析軟體

（Image-Pro Lite Version 3.0, Media Cybemestics, USA）作計算，並以 試算軟體Microsoft Excel XP 做分析。計算與分析切片的再生神經的 全部面積、神經內膜面績、再生血管數目、再生血管總面積、再生血 管面積百分比。

3.8.1.1. 拍攝照片

顯微鏡40 倍下，拍攝再生神經組織切片全景。顯微鏡 400 倍下，

可清楚看到血管，其適合影像分析軟體與計算再生神經組織中血管 數。

3.8.1.2. 神經全部面積計算方式

將切片置於40 倍顯微鏡下，以數位相機拍攝影像，再以電腦圈 選神經外膜周圍，電腦會自動計算出整個神經全部面積。

3.8.1.3. 神經內膜面積的計算方式

將切片置於40 倍顯微鏡下，以數位相機拍攝影像，再以電腦圈 選神經內膜周圍，電腦會自動計算出整個神經內膜全部面積。

3.8.1.4. 神經內膜面積佔再生神經全部面積百分比

將神經內膜面積除以神經全部面積。

3.8.1.5. 再生血管數目的計算方式

將切片置於400 倍顯微鏡下，以數位相機拍攝所有再生神經組 織型態，再逐一計算出所有圖片所含之血管數目。

3.8.1.6. 再生血管總面積的計算方式

將切片置於400 倍顯微鏡下，以數位相機拍攝所有再生神經組 織型態，再逐一計算出所有圖片所含之血管之面積。

3.8.1.7. 再生血管面積百分比的計算方式

將再生血管總面積除以神經全部面積，再換算為百分比。

3.8.1.8. 統計分析

利用SPSS 10.0 版統計套裝軟體，採單因子變異數分析

（One-way ANOVA），探討各組資料數據在統計上有無差異，本實驗 統計上檢定的第一誤差設在0.05，若 P＜0.05 則認定有統計上的明顯 差異。當三組的顯著差異存在時，再以Tukey 法做事後比較，檢定顯 著差異存在哪2 組之間。

3.8.2. 成熟度分析

3.8.2.1. 觀察重點

對再生神經組織切片的觀察重點：再生神經整體結構是否完 整，神經外膜，圍神經膜以及神經內膜是否形成？在神經內膜中是否 有髓鞘化軸突生成，或者大部分組織中仍只有纖維母細胞或Schwann 氏細胞？血管於再生神經組織中是否已形成？

3.8.2.2. 統計方式

利用SPSS 10.0 版統計套裝軟體，採克-瓦單因子等級變異數分 析（Kruskal-Wallis test），探討各組資料數據在統計上有無差異，本 實驗統計上檢定的第一誤差設在0.05，若 P＜0.05 則認定有統計上的 明顯差異。