動物實驗

3.5.1. 目的

以綠梔子素交聯明膠製造可降解性神經導管於修護截斷大鼠坐 骨神經再生影響之評估：1. 觀察實驗大鼠外表之變化；2. 觀察神經 再生情形；3. 觀察神經導管降解情況；4. 再生神經之電生理評估；

5. 再生神經之組織學定性與定量分析；6. 評估大鼠步態分析；7. 觀 察大鼠Withdraw reflex 之運動功能；8. 觀察大鼠足跡分析；9. 評估 大鼠斷傷側攀爬能力；10. 坐骨神經功能指數（Sciatic function index）

（SFI）。

3.5.2. 主要材料

製備綠梔子素交聯明膠為基材之人造神經導管

製備0.5 ％浸泡 1 小時、3 小時、48 小時之綠梔子素明膠管，挑 選長度15 mm，重量介於 0.45～0.55 g 之神經導管（各十管），經滅 菌後備用。

3.5.2.1. Toluidine Blue

Toluidine blue 化學式為C15H16SCl＋ZnCl2 。他對於神經組織中 蛋白質的碳氧基有高度的親合力，因此被廣泛用來當作神經髓鞘的染 色劑，當以Toluidine blue染色時，髓鞘被染成深藍色，而髓鞘環內的 軸突則呈現淡白色。實驗用Toluidine blue購自Sigma(USA)

3.5.2.2. 9-0 Nylon 縫線

用於將斷傷神經固定於神經導管。實驗所用的9-0 縫線購自 Mani Z010064000 (Japan)。

3.5.2.3. Betadine^ⓇAntiseptic Solution

用於實驗過程動物及器械消毒。實驗所用的Betadine^ⓇAntiseptic Solution 購自Mundipharma（Germany）。

3.5.2.4. AErrane

氣體麻醉劑，用於手術過程中減低動物痛苦。手術前須先將大 鼠麻醉，將大鼠置於透明麻醉箱中，利用氣體麻醉機（Forawick Vaporizer, Muraco Medical Co., Japan）麻醉，麻醉劑為AErrane^Ⓡ

（Isoflurane）購自（Baxter, USA）。

3.5.2.5. 4-0 Catgut chrom 縫線

用於縫合大鼠肌肉及皮膚。購自B.Braun（germary）

3.5.3. 實驗方法

雌性Sprague-Dawley （SD）大白鼠 30 隻，重量為 220-280 g，

週齡為3 周。依照植入浸泡不同時間之綠梔子素明膠管分為三組：一 小時組 (A 組)、三小時組 (B 組)、48 小時組 (C 組)，每組各十隻 SD 大白鼠。

3.5.3.1. 麻醉、消毒

手術前先將大鼠以氣麻機麻醉，後將大鼠自透明麻醉箱中取 出，利用塑膠管輸送麻醉機，此時麻醉劑量改為 2 litter/kg．min 且將 此塑膠管套於大鼠口鼻中，持續給於麻醉。將大鼠擺以右側躺及右膝 蓋彎曲，以股骨頭 （femur）的位置為中心，上下各約 3 ㎝ 處，將 大鼠臀部及大腿的毛剔除，剃毛區以BetadineⓇ （Mundipharma, Germany）自中心開始由內向外消毒。

3.5.3.2. 坐骨神經導管結合術

大鼠消毒完成後，術者先以拇指及食指找到大鼠右側之股骨頭 上之大轉子（greater trochanter of femur）及外側豆狀骨 （lateral fabella）予以定位，並用 15 號皮刀沿此兩點之連線劃開皮膚，鈍性 分離股二頭肌 （biceps femoris muscle）與筋膜，游離出長約 2.5 cm

之坐骨神經，在距梨狀肌 （pirifemoris）下緣 8 mm 處，用剪刀整齊

神經與神經導管縫合完畢後，將麻醉劑之流量改為1 litter/kg．

min，並以 4-0 Catgut chrom 縫合肌肉及皮膚。手術完畢後，測量大 鼠體重，並將大鼠置回籠子，照光維持體溫，等待動物甦醒。再以抗 生素Pamoxicillin^Ⓡ （內含Amoxicillin trichydrate 1.5 gm/60 ml）1 g溶 解於100 ml逆滲透水中，當作 2 天份之水給于自由飲水，預防傷口感

（Chi-Square），探討各組資料在於此次實驗中有無統計上的差異，檢 定過程中若發現任何一細格內的理論次數少於五，則採用費雪爾精確 概率檢定 （Fisher’s exact test），本實驗統計上檢定的第一誤差設在

0.05，若 P＜0.05 則認定有統計上的明顯差異。

3.5.6. 評估神經再生情形及神經導管降解情形

八周後將大鼠犧牲收成，犧牲前先將大鼠麻醉、剃毛、Betadine

Ⓡ消毒後，定位出大鼠右側之股骨頭上大轉子及外側豆狀骨，沿此兩 點之連線用刀片劃開皮膚，鈍性分離股二頭肌與筋膜，以肉眼觀察神 經導管降解情形，縫線是否脫落，拍照後再進一步將附於脛骨 （tibia）

上肢股二頭肌及腓腸肌 （gastrocnemius）鈍性分離出來，進行電生 理評估。