個培養瓶肉，放入暗袋暗置於培養箱內，培養 25 個小時.
仙素.
E. 於收集細胞染色體看守 2 小時，加入 0.1 ml 的秋水
F. 肉上述染色體製備方法作品染色體.
G
(σ2.94 臨g/5臼n剖1) 的 j溶容液內 1昀O 分鐘.
H.取出片子，放在 265 mm UV 光的箱內，照射 2 小時，
此時片子須於緩街溶液 (0.88% K~HPOA 2--- - 4 + - 1.01% - - - - KH...POJ 下保釋、- - - 2 照光.
1.將片子置於2 倍 SSC
(NaCl
+ Na3
C6
日s07. 2H20
)的溶液肉 ，於 65 Oc 的加熱箱內，加熱 50 分鐘，取出，烘乾， 以 10%的
Giemsa 染色7 分鐘.
J. 依 S.Venitt(6) 的方法選取每飽分裂期細胞的染色
體數目相同的細胞，計算的0 個分裂期細胞的染色分體交換次數，利用
paired t test 方法統計分析差異.
第四章 結果
一.細胞的純化
篩取由細胞純化後的 V79 細胞其染色體數目為 22 的聚落，作為本研 究的細胞樣本.
二.多孔培養JI1Z.試驗
在控制組和低於 9.32 mM MMA濃度的組 (well)，均有紫色的染 色出現，代表在這濃度下的細胞有存活〈園一).由此決定本試驗加入
b俱佳A的最高濃度為 9 .32 mM.加入 h品生A後， V79 細胞外彤的變化(國
-=-
)，聽二A為控制組未加~位的細胞.鹿二B為加入 9.32 X 10-2 mMb也做後的情形細胞的外形較控制組細胞外形變得較短，即紡垂形轉變
為較精圓形.國二C為加入 9.32 X 102 mM 的 b品位A 此狀況下的細胞 大多已死亡懸浮.
三三. V79 ‘細胞生長抑制試驗
試驗組與控制組相比較，當 MMA濃度大於或等於 9.32 X 10-4
nM時，細胞的生長有明顯的被抑制 (p<0.05); 從加藥後到第二天(即
Day 2 到 Day 3) ，細胞生長增加的量，濃度高的 (9.32x100 mM)由
(12xl04個細胞增加對 35xl04個〉為比正常組(由33xl04個 增加封
的xl04個)或是低濃度(9.3
2x 1 0-
6 mM)組由 (27xl04個增加封 62xl04 個〉似乎增加較多;而 Day 3 封 Day 4，細胞生長增加的量，所有的組則相近 (Table 1 ，國三).
四. V79 細胞附著生存試驗
V79
細胞對不同濃度和時間的作用，主隨著時間的增加和濃度 的增加，聚落的形成漸減少.濃度高的 (9.32xl0
0 mM)短，於加藥作用 1 小時後，相對的附著生存率為控制趣的 63.6% 而作用 24 小時後，只為
17.4%; 9.32 xl0-
1 mM 組於加入111\位後 1 小時後開始減少為 8 1.7%，而作用 24 小時後，只為 2 1.7%; 9.32 xl0-
2 mM組於加入h位也A 後 3 小時後時始減少為 75% ，禹作用 24 小時後，只為 47.8%;9.32
xl0融 4mM組於加入卸血仇後 3 小時後開始減少為 9 1. 7% ，為作用 24 小時後，只為 39.1
%; 9.32 xl0-
6m
M組於加入l\1r\在A後 12 小時後時始減少為有裂隙和染色分體斷裂的狀況 未見其他類彤的異常.控制組的染色
體異常只見到裂隙試驗是且除9.32 X 10-6 mM組除外兵餘均有裂隙和 斷裂的出現.當濃度高於9.32 x 10-4mM時，作用 48 小時後，染色體異 常結構的數目有明顯的增加趟勢 (p<0.05) (圈五，Table 3.).
六.染色分體交換試驗
濃度為 9 .32 X 10-4 和 9.32 X 10-6 mM 組與控制組對於姊妹染色 分體交換的頻率不具有統計學上的差異.當濃度高於9.32 X 10-2 mM
以上時，作用 49 小時後，姊妹染色分體交換的頻率才具有統計學上的意
義(國六， Table 4).
第五章討論
品位生A 單體本身不溶於水困比利用 DMSO 作為輔助溶辯.
Stenchever (11) 等人指出，如果 DMSO 的濃度大於 1% 時會對細胞的
生長產生延邊的現像. 本研究中在 MMA 濃度為 9 .32 x 100 mM 時
DMSO 的最終濃度為 0.05% 己小於 1%. 在 24孔血的試驗結果，
Giemsa 的染色程度發現 9.32 X 101 mM以上民也使A濃度，細胞均已 死亡.昆此採用 9.32 x 100 mM MMA 為試驗的最高濃度.對於瓦那在A 製作的從業人員而言，接觸 MMA 屬於長期的接觸，因此在藥物的作
用時問長短考慮上 採取至少讓細跑生長都經過1.5 個以上的細胞生
長週期 (6)
Zeiger (1 2) 等在試管外的研究指出，在合或是不合 S9 的 TA100，
Borzelleca (15) 等使用 MMA濃度高達 2000 ppm 的水給大鼠。at)連 續喝 2年， 結果並沒有困藥物引起的病變出現 (compound related
lesion). 在動物皮膚的塗抹研究， Oppenheimer (1的等發現，每週塗抹 MMA3 次，連續 4個月，在這些動物的皮膚上並沒有局部腫瘤的產生.
但是在老鼠和大鼠的皮下植入經過聚合後的 MMA， Lavorgna 仰等和
Laskin (18)等則發琨會有局部的纖維肉瘤 (fibrosarcoma) 產生.
Chang (1 3) 在中國倉鼠的卵巢細胞 (CHO cell) 與孔1MA的濃度研 究指出，在含有 S9 的情況下， MMA(500咀 1250 pg/ml)會對 CHO 細胞
產生一種異常的反應，此反應與辯:量有相關性悅。se related). 當 S9 不
存在下， MMA (750個3000 pg/ml)也會增加細胞染色體異常蹺，象.
Anderson (1 4) 等研究 Rat bone marrow 的細胞染色種變異，怒為 b品位不具有劑量相關的蹋靜、.本研究在孔岱蝕的濃度 9 .3 2 x 100 mM ( 9.34 X 102 pg/ml) 時，作用 3 天後，發現對 V79 細胞的生長產生抑制作 用;作用 48 小時後，染色體異常和姊妹染色分體交換頻率均有增加， 結
果與 Chang 的結果相近.
Carolyn (19) 等指出 MMA造成細胞染色體斷裂位還是在染色分 體上，對於細胞染色體數目是沒有改變的.一般而言，染色嫂的異常分
類可分為結構上和數自上的異常〈的.結構上的異常會出現裂隙 (gap),
斷裂 (break)，雙中心結 (dicentric) 和國形染色體 (ring)等.數目上的 異常以出現多套體 (hyperdiploid) 時較為有意義. 染色體的斷裂可以來
自自發性或是致突變劑的誘導;斷裂的時機可能在有絲分裂或無絲分
裂中的 Gl ， S ， G2 細胞過期;斷裂的機制乃由於DNA上有某些傷害的
產生，而這些傷害的來源可能是鹿為化學藥物， UV光或是輻射線的作
用，形成密吃雙體 (pydimidine dimer), Base al勾rlation等 .DNA在進
行合成作用中，傷害的為位置可能會進行修補或是錯誤修補，如果修
補失敗，在染色體結構上即出現異常.染色體斷裂的情形，如果是發生
在 DNA合成後之時期 撕裂的頻率會減少.染色嫂的斷裂可能只有 1
個染色分體斷裂或是2個染色分體的斷裂，前者稱之為 chromatid
有多套體.由於本研究未作染色體的層帶染色 (banding)，因此無法判
斷是否同一隻染色體發生異常此有待再研究.
在 100餌分裂細胞的研究中，當濃度為 9.32 x100 mM (9.34 x 102
戶
g/ml) 時會作用 48 小時後， V79 細胞染色體斷裂數目有 16個Morre (20) 等的研究結果指出，當l\1f\，仇濃度為 2800 ug/ml 時，作用 24 小時後，在 200個 CHO 分裂細胞的分析中，出現 45 個染色體異常，
二者結果相似.
姊妹染色分體的交換，乃是由於5巾的modoxyacridine進入封細
胞內，因其化學結構類似細胞的胸腺密可支付lymidine，簡稱 T)，所以在 細胞進行複製時 BU 就混入到 DNA 的結構中此時染色體以 BU取
代 T，進行一次的 DNA稜製 之後每一條染色分體的雙成 DNA 中會
有一般含有 BU，即形成 BT. 如果細胞繼續以 BU取代 T，進行第二次
的被製，則用一條染色體中的染色分體 DNA會形成 BT和 BB. 以核酸
的發光染料 H33258 作用會在瑩光顯微鏡下發現含 BT 的染色分體呈 現亮的反應，而含有 BB 的染色分體呈現暗的反應 (20 ， 2 月.利用染色分
體交換的頻率可以研究高等生物細胞內遺傳物質受傷的一稜指標.
h部位與 CHO 細胞作用隨著 MMA 濃度的增高姊妹染色分體
交換的頻率增加 (22) Morre (22) 等發現，尤其當 MMA 的濃度為 5
mg/ml 時，染色體異常數目增加最多. Bigatti (2月以人類的淋巴瘤細 胞株和 polymethyl methacrylate bone cement (PMMA)作用，結果顯
示二者之問並沒有統計學上的差異. Carolyn (19) 等的報告，怒為NIr\位 和 CHO 細胞作用會增加 SCE 的頻率﹒為對於染色體數目則沒有改變
Marez (2) 等對於h位也A和臼去。細胞的作用，不論是否含有 S9 的條件下，
孔俱佳A作用 24 小時後，在加 Brdu 25 小時 SCE 交換的頻率都呈明顯
的增加.本研究 MMA 與 V79 細胞作用，不含 S9 的情況下，當~且
濃度達 9.32 X 10-2 mM 以上時扎位在A作用 24 小時後會在加 Brdu 25
小時，姊妹染色分體交換的頻率在統計學上，亦有明顯的增加.
宗主吉吾
本研究結果顯示 MMA對於 V79 細胞的生長，聚落的形成 都隨時間的增加產生與濃度相關的抑制作用 對於染色體異常的結果
發現， MMA對 V79 細胞作用後，會使得染色體斷裂數目增加，姊妹染色 分體交換的頻率增加此結果與 MMA作用於 CHO 細胞的結果相似.
國此，我們認為 MMA 對於 V79 細胞具有細胞遺傳毒性與致突變性.
至於瓦拉生A作用在人類正常細胞的變化 以及從業人員長期接觸後的反
應和受傷的細胞在分子基因學上的變化將會是要再研究的問題.