實驗方法

（一）實驗動物分組與飼料

使用 Sprague-Dawley 系雄性大白鼠 30 隻，年齡為五週大，體重 約 230~250 g。經一週適應期之後，先依其對跑步機之順應性分為兩 組，適應性較差之六隻為控制組（C），而適應性較佳之二十四隻則 分為四組，即力竭運動組（E）、力竭運動組補充低劑量（0.1875 g/kg BW/d）松杉靈芝組（EL）、力竭運動組補充中劑量（0.9375 g/kg BW/d）

松杉靈芝組（EM）及力竭運動補充高劑量（1.875 g/kg BW/d）松杉 靈芝組（EH）。實驗動物個別飼養於不銹鋼網製籠內，置於室溫 23 ± 2℃，濕度控制於 55 ± 10%，12 小時光暗循環的飼育室內。各組給予 松杉靈芝補充劑量及運動與否如表三所示。本實驗所使用之松杉靈芝 成分請見表三。Lab 5001 粉末飼料組成請見附錄。

（二）松杉靈芝之投予方式與劑量

各組皆以 Lab 5001 為飼料（飼料組成詳見附錄），每日給予 20~25 克，水分則是自由飲用，利用固定一台電子秤每日記錄大白鼠攝食情 形，並每週記錄體重一次，實驗為期三十天。每日以灌食方式給予松 杉靈芝（勇健工業股份有限公司產品開發研究所菌種培育中心，台灣 勇健一號 YK-01，其成分如表二）之補充，其中 C 與 E 兩組，給予 2 mL 去離子水灌食，EL、EM 及 EH 組，每日依前週秤量其體重計算 並秤取各組所需松杉靈芝粉末後，加入等量去離子水，使最後體積為 2 mL，其中各含有一、五及十倍劑量之松杉靈芝粉末，vortex 搖晃使 其均勻懸浮後進行灌食。而關於 EL、EM 及 EH 組給予松杉靈芝補充 量，是依據商品的人體建議攝取量（1.8 g/day/60 kg BW），進一步估 算大白鼠投予劑量之一、五及十倍，此倍數乃依據健康食品管理法的 施行細則中「抗疲勞功能」之評估方案。計算方式如下：

低劑量組：1.8/60*6.25*1=0.1875 (g/kg BW/d) 中劑量組：1.8/60*6.25*5=0.9375 (g/kg BW/d) 高劑量組：1.8/60*6.25*10=1.875 (g/kg BW/d)

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表二、松杉靈芝粉末成分

松杉靈芝粉末（克）

熱量（大卡） 1.94

蛋白質（克） 0.27

脂肪（克） 0

碳水化合物（克） 0.55

鈉（毫克） 16.7

多醣體（毫克） 125

三萜類（毫克） 120

（三）大白鼠適應與單次激烈力竭運動

犧牲前十天，所有力竭運動組大白鼠（E、EL、EM 及 EH 組）

皆需每日於跑步機上以每分鐘十五至二十公尺之速率，跑十五至二十 分鐘，使其適應跑步機之運作。經此飼養方式三十天後，犧牲當天，

所有力竭運動組大白鼠進行跑步機單次激烈力竭運動，將跑步機的坡 度固定在 10°，以漸進式力竭運動方式（請見圖二）使力竭運動組的 大白鼠運動至力竭為止，此漸進式力竭運動方式為根據 Bedford 及 Lin 等人之方法修飾而來 (Bedford et al., 1979; Lin et al., 2006b)。為增強 大白鼠跑步的動機，在大白鼠跑步機後端設有電擊區，若大白鼠不願 跑步時就會掉入電擊區，受到電擊的大白鼠若仍有力氣，將會再奮力 往前跑，而力竭的判定則是以大白鼠經過 5 次電擊仍無法起身往前 跑，且抓起大白鼠時無掙扎動作，即可判定大白鼠為力竭狀態。力竭 之大白鼠立即以乙醚麻醉後犧牲。各組之松杉靈芝補充劑量及運動之 有無如表三所示。

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表三、各組松杉靈芝補充劑量及運動之有無

組別 松杉靈芝補充劑量 運動有無

控制組（C） 無 無

力竭運動組（E） 無 有

力竭運動組補充低劑量組（EL） 0.1875 g/kg BW/d 有 力竭運動組補充中劑量組（EM） 0.9375 g/kg BW/d 有 力竭運動組補充高劑量組（EH） 1.875 g/kg BW/d 有

37 m/min 34

m/min 31

m/min 28

m/min 25

m/min 20

m/min 15

m/min

0 15 30 45 60 75 90 105 分

圖二、漸進式力竭運動方式 (Bedford et al., 1979; Lin et al., 2006b)

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（四）動物犧牲流程

依照以上的方式飼養三十天，力竭運動組於實驗結束時進行跑步 機單次激烈力竭運動，隨後立即將所有動物予以犧牲。犧牲時，以乙 醚麻醉後，開腹並從腹大動脈抽取血液，血液抽取完畢後，以生理食 鹽水灌流肝臟後剪下，再以生理食鹽水清洗後，擦乾秤重，並剪下大 白鼠之腓腸肌，以生理食鹽水清洗後，擦乾秤重，並切取部份肌肉組 織，浸泡在 10%福馬林溶液中，而肝臟及肌肉組織各取部份分裝後以 液態氮急速冷凍後保存。

（五）樣本採集及前處理

(1) 血液樣本採集及前處理

犧牲前禁食十二小時，以乙醚麻醉開腹腔後，由腹大動脈抽取血 液之樣本收集在含有肝素之綠頭採血管及含有氟化鈉之灰頭採血管 中，在 3500 rpm，4℃下離心 15 分鐘，以分離血漿及血球。取出血漿 分裝於微量試管中，其中由灰頭管中取出之血漿，於 30 分鐘內分析 肌酸激酶活性及乳酸濃度，且於 24 小時內分析血糖濃度。紅血球以 0.9%氯化鈉溶液清洗 2~3 次後，取 100 μL分裝於微量試管中。最後 將血漿及紅血球樣本儲存在-80℃冰箱中，以待後續分析。

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表四、血液樣本採集、前處理方法及測定項目

採血管 綠（肝素） 灰（氟化鈉）

離心 3500 rpm，4℃，15 min 3500 rpm，4℃，15 min

＊採血後 30 分鐘內離心

(2) 肝臟樣本採集及前處理

犧牲時，血液抽取完畢後，以生理食鹽水灌流肝臟後剪下，再以 生理食鹽水清洗後，擦乾秤重，之後剪下 0.04~0.08 克肝臟數份，急 速冷凍後保存於液態氮中，以進行肝臟肝醣含量分析，剩下之肝臟組 織進行分裝後，保存於-80℃冰箱。

(3) 肌肉樣本採集及前處理

犧牲時，血液抽取及肝臟採集完畢後，剪下大白鼠之腓腸肌，以 生理食鹽水清洗後，擦乾秤重，之後剪下 0.04~0.08 克肌肉數份，急 速冷凍後保存於液態氮中，以進行肌肉肝醣含量分析，並切取部份肌 肉組織，浸泡在 10%福馬林溶液中，之後以石蠟包埋切片後進行染色 以觀察細胞凋亡情形，剩下之肌肉組織進行分裝後，保存於-80℃冰 箱。

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