實驗方法

參考中華中藥典及日本藥局方第十四版所載方法操作^(1,3) (一)、乾燥減重

取稱量瓶於105℃乾燥一小時，置乾燥器內放冷，精確稱定。取檢品 約5 g，置稱量瓶中，再精確稱定。於 105 ℃乾燥五小時，置矽膠乾燥器 內放冷，稱量之。繼續乾燥，每隔一小時稱量一次，直至先後二次之減重 相差不超過0.25 %為止，由減失重量計算檢品之乾燥減重百分率。

(二)灰分測定法 1.總灰分

取坩堝於 550 ℃熾灼一小時，置乾燥器內放冷，精確稱定。取風乾 之檢品2～4 g，置坩堝中，再精確稱定，徐徐熾熱，注意避免燃燒，至完

全碳化時，逐漸升溫至不超過 550 ℃熾灼四小時至碳分完全揮散，於乾 燥器內放冷，稱定其重量，計算其灰分百分率。如碳分不能完全揮散時，

可用熱水浸漬焦化物，以無灰濾紙過濾，並將殘渣及濾液置坩堝中，如上 法熾灼至灰分呈白色或類白色，加入濾液，蒸乾，於不超過 550 ℃熾灼 之。如仍不能使碳分完全揮散，可將坩堝放冷，加乙醇15 ml，用玻璃棒 研碎灰分，點火使乙醇燃燒揮散後，於不超過 550 ℃熾灼至達恆量，並 計算檢品所含總灰分百分率。

2.酸不溶性灰分

將上述熾灼所得之總灰分，加稀鹽酸25 ml，煮沸五分鐘，用已知重 量之古氏坩堝或無灰濾紙過濾，濾渣以熱水洗淨後，熾灼至達恒量，並計 算檢品所含酸不溶性灰分百分率。

(三)抽提物 1.稀醇抽提物

取製備之檢品約 2 g，精確稱定，置玻璃塞錐形瓶中，加稀乙醇約 70 ml，浸漬八小時，其間每隔三十分鐘加以振搖一次，再靜置十六小時，過 濾。用稀乙醇洗滌錐形瓶及殘渣，洗液經濾器併入濾液，直至全量達100 ml 為止。取蒸發皿於 105 ℃乾燥一小時，置乾燥器內放冷，精確稱定，

分取濾液 50 ml，置蒸發皿中，於水鍋上蒸乾，並於 105 ℃乾燥至恆量，

然後計算檢品所含稀乙醇抽提物之百分率，再依檢品乾燥減重值換算成乾 品之稀乙醇抽提物之百分率。

2.水抽提物：方法同稀醇抽提物測定法以水抽提測定之。

(四)含量測定

參考行政院衛生署藥物食品檢驗局出版之中藥檢驗方法專輯（九）

（十一）、大陸中華人民共和國藥典2000 年版一部、日本藥局方第十四版

及其他相關書籍文獻，利用高效液相層析法進行探討其指標成分之分析方 法與含量測定。

本實驗以統計學原理訂定檢體數據之Mean ± S.D.為實驗建議值，作 為上述四十種藥材各項試驗之參考規格，以供參考。綜合以上結果，四十 種藥材中，每種藥材各檢體之五項試驗結果，與其 Mean ± S.D.值比較，

其中乾燥減重、總灰分、酸不溶性灰分三項之試驗值分部低於 Mean＋S.D.

值者，以及稀醇抽提物、水抽提物兩項之試驗值分部高於 Mean－S.D.值 者，單一藥材二十件檢體之五項檢驗結果皆尚屬分佈於合理範圍之藥材，

四十件藥材中有三十八件皆符合合理範圍。僅有玄明粉、及兒茶之數值差 異較大。

1.青黛之靛藍定量分析^(2,40,41)

方法1: 靛藍定量分析(分光光度器偵測) ^{(2, 41 )} (1)標準品儲備溶液配製

取靛藍對照品 10 mg，精密稱定，置錐形瓶中，緩緩加入硫酸 7ml，

用玻棒輕輕攪勻。（註：加硫酸，磺化 indgo 增加親水性）

↓置 80℃水浴中磺化 1 小時，隨時攪拌，取出，冷卻。

↓將溶液緩緩移入盛有適量水的 100 ml 量瓶中，用水洗滌容器及殘渣

↓洗液並入量瓶中，加水至刻度。

↓搖勻，濾過，精密量取續濾液 1 ml，置 10 ml 定量瓶中，加水至刻度，搖 勻，即得(每 l ml 中含靛藍 l0 μg)。

(2)標準曲線的製備檢量線

精密量取對照品溶液1.0 ml, 2.0 ml, 3.0 ml, 4.0 ml, 5.0 ml, 6.0 ml, 8.0 ml，分別置 l0 ml 量瓶中，加水至刻度，搖勻。

↓照分光光度法，在 610 nm 的波長處測定吸收度，以吸收度爲縱坐標，濃

(4) Instrument Settings

Instrument Cary 300 Instrument version no. 9.00 Wavelength (nm) 610.00

精確稱indigo 對照用標準品 10.00 mg 及 indimbin 對照用標準品 10.00 mg，分別置於 100 ml 容量瓶中，用乙酸乙酯溶解，並定容至 100 ml，避光保存，供作標準品儲備溶液。

(2)標準曲線的制備檢量線

取 indigo 標準品儲備溶液 60 μl, 120 μl, 240 μl, 360 μl, 480 μl 置於 10ml 容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，分別配成一系列濃度為 0.6, 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 μg/ml ，取 indirubin 標準品儲備溶液 60 μl, 120 μl, 300 μl, 600 μl, 750 μl, 1200 μl, 1500 μl 置於 10 ml 容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，

分別配成一系列濃度，indirubin 濃度依序為 0.6, 1.2, 3.0, 6.0, 7.5, 12, 15 μg/ml，以各標準品與內部標準品波峰面積比及標準品之濃度，作檢量線 並求出其線性迴歸方程武及相關係數。

(3)檢品配製

分別取市售 14 家青黛 10.00 mg 精確稱定，加乙酸乙酯 10 ml，置超 音波振盪器中，於室溫振盪30 分鐘，過濾，再以乙酸乙酯定容至 10 ml，

供作檢品儲備溶液。

(4)分析條件

HPLC: Waters 2695 with Autosampler 717+

Detector: Waters 996 Photodiode Array

Detector Column: Atlanttis® 100 RP-18 5 μm，內徑 4.6 × 150 mm

檢測波長：UV 292 nm

Run time: 10 min

A: MeOH B: 1% HCOOH pH 2.3 （MeOH：1% HCOOH＝80：20）

2.兒茶HPLC定量分析( 2, 48 , 49, 50, 51): (1)標準溶液配置

精稱 10.00 mg catechin ，加入30%甲醇10 ml，製成1mg/mL的 標準 儲備溶液。用微量移液管精取標準儲備溶液400 μl, 200 μl, 100 μl, 50 μl, 25 μl, 12.5 μl至1 ml。精稱10.00 mg Epicatechin，加入30%甲醇10 ml，製成1 mg/ml的 標準儲備溶液。用微量移液管精確取標準儲備溶液1 ml，加入 30%甲醇10 ml，製成100 μg/ml的 標準儲備溶液，並對半稀釋濃度，濃度 為：3.125, 6.25, 25, 12.5, 50, 100 μg/ml。

(2)檢品溶液配置

精稱檢品40.00 mg，加入30%甲醇定量至10 ml，7000轉離心30分鐘，

稀釋一半，用0.22 μm濾膜過濾，作為檢品溶液。

(3)分析條件

HPLC: Waters 2695 with autosampler 717+

Detector: Waters 996 Photodiode Array

Detector Column: Atlanttis® 100 RP-18 5 μm，內徑 4.6 × 150 mm 檢測波長： UV 280 nm

Gradient:

(min) % A H2O %B MeOH %C 1% HCOOH pH 2.3 curve

0.0 70 20 10 6

10.0 60 30 10 6

20.0 30 60 10 6

(4) 再現性與精密度試驗

於各標準品檢量線之範圍內，選取三種濃度，分別為catechin:50, 100 及200 μg/ml; Epicatechin: 75, 25及5 μg/ml，於同一日及不同的五天重複 分析各三次，計算其相對標準差。

(5)含量測定

分別取系列之catechin及epicatechin標準品溶液與市售兒茶檢品溶液 各10 μl注入高效液相層析儀中。將一系列catechin及epicatechin之標準品 溶 液 波 峰 面 積 比 與 各 標 準 品 溶 液 濃 度 製 作 檢 量 線 ， 利 用catechin 及 epicatechin標準品溶液，與市售兒茶檢品溶液所得各波峰之滯留時間，推 定檢品中catechin及epicatechin之波峰，並由兒茶檢品溶液之波峰面積比，

依檢量線分別求出檢品中catechin及epicatechin之含量。