2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid) (ABTS) Sigma 514.62 98 Ammonium persulfate 日本製藥 228.18 96.5 1,2-benzenediol (catechol) Mallinckrodt 110.11 >90 1,4-benzenediol (hydroquinone) Riedel-de Haën 110.11 99.5 1,3-Benzenediol (resorcinol) Sigma 110.11 99
1,2-benzenediamine Alfa Aesar 108.14 98 1,3-benzenediamine Aldrich 108.14 99 1,4-benzenediamine Sigma 108.14 98 1,2-Aminophenol Alfa Aesar 109.13 99 1,3-Aminophenol Acros 109.13 99 1,4-Aminophenol Alfa Aesar 109.13 98 3-Nitroaniline Alfa Aesar 138.14 98 3-methoxyaniline Alfa Aesar 123.16 98 3-methylaniline Acros 107.15 99 1,8-diaminonaphthalene Acros 158.20 97 1,5-diaminonaphthalene Acros 158.20 97 Aniline Alfa Aesar 93.13 99+
1,3-bis(aminomethyl)benzene Aldrich 136.20 99 3-bromoaniline Alfa Aesar 172.02 98 3-chloroaniline Acros 127.57 98 4-chloroaniline Acros 127.57 99
Phenol 日本製藥 94.11 98
3-aminoacetanilide Alfa Aesar 150.18 97 3-aminoacetophenone Alfa Aesar 135.17 97 Epicatechin Sigma 290.27 90 Catehin hydrate Sigma 290.27 96 Chrysin Acros 254.24 99+
1,4-benzoquinone Alfa Aesar 108.10 98+
使用的溶劑有 HPLC 級甲醇(購買於 Macron)，以及去離子水(DI 水)。
3.2 儀器
液相層析儀為 HITACHI 所生產的 pump，型號為 L-7100，偵測器為 UV 偵測器型號為 L-7420。
質譜儀為 Micromass®UK 所生產的 Micromass Q-TOF，使用的游離 源為電噴灑游離。電噴撒游離裝置使用的霧化氣體(Nebuliser Gas)為氮氣 氣體，流速為 20 liters/hour，而去溶劑氣體(Desolvation Gas)的流速為 300 liters/hour。質量分析器為四極桿質譜分析器(quadrupole mass analyzer)與 時間飛行器(time of flight，TOF)的串聯使用。分析時的質譜最佳參數為 Source Block Temp: 100℃、Desolvation Temp: 180℃、TOF: 7200 V、MCP:
2700V、Capillary Voltage: 2600V、Cone: 25 V、Collision Energy: 3 V、Gas Cell: 5 psi。離子碰種誘導解離(Colleision Induced Dissociation，CID)的碰 撞氣體為氬氣(Ar)。進樣方式以本實驗室開發的自動進樣裝置
(self-pumping pump)或以注射針幫浦(KD Scientific, KDS101)直接注入進 樣(direct infusion)兩種方式，直接注入進樣的流速固定為 8 µL/min，而自 動進樣系統的流速則在 10.0-15.0 µL/min。
紫外線光譜儀為 HITACHI，U-3010，觀察 ABTS●+在不同苯環取代 基下反應後，ABTS.+轉換成 ABTS 以及是否有新產物的生成。
3.3ABTS●+合成方法 m-anisidine、3-bromoaniline、phenol 不溶於水，先將化合物溶於 100 μL 甲醇裡再加入 DI 水配製成 6.25×10-3 M；1,8-diaminonaphthalene 及
1,5-diaminonaphthalene 對水溶解度較低，此兩種化合物溶於 0.01 M 的 HCl；
另外 aniline 溶於水中訊號會較低，因此配製在醋酸裡提高訊號強度。另 外 chrysin 溶於 1 mL 的濃氨水中再加入 DI 水配製成 6.25×10-3 M。
3.5 自動進樣(self-pumping)裝置
利用本實驗室已開發設計的自動進樣裝置(self-pumping)-文氏管電 噴灑游離質譜法作為線上即時偵測之方法(Venturi electrospray ionization
mass spectrometry, VESI-MS)。所使用的是單重進樣 VESI (sVESI)自動進 樣裝置的示意圖如圖 3-1，將口徑為 130 μm 的 PEEK 毛細管裁切成約 10 公分的長度，作為自動進樣裝置的連接管線，再將樣品瓶的瓶蓋打洞，
讓 PEEK 毛細管可穿入且末端可浸到待測溶液裡，另一端已轉接頭連接 到質譜儀的電噴灑游離源，使得自動進樣到質譜儀進行訊號偵測。
圖 3-1sVESI 裝置示意圖
3.5.1 以 sVESI 進行線上即時偵測
以質譜儀搭配 sVESI 的進樣方式進行線上即時偵測 ABTS●+與不同的 苯環取代基反應結果。首先取 2 mL 的 ABTS●+水溶液至棕色樣品瓶並加 入攪拌子攪拌，將其架設在磁力攪拌器上(如圖 3-2)，先偵測 2 分鐘的 ABTS●+的訊號後，迅速加入 40µL 的苯環取代基溶液進行反應，線上偵 測 8 分鐘，觀察反應後之結果。
圖 3-2 以磁力攪拌器協助 sVESI-MS 裝置進行線上即時偵測 本研究中所使用的苯二取代基化合物標準品有 benzenediol、
benzenediamine、aminophenol 這三種的異構物(鄰、間、對位)、aniline、
phenol、3-methoxyaniline、3-aminoacetanilide、3-methylaniline、3-nitroaniline、
3-aminoacetophenone、3-bromoaniline、3-chloroaniline、4-chloroaniline 1,8-diaminonaphthalene、1,5-diaminonaphthalene、
1,3-bis(aminomethyl)benzene、epicatechin、catehin hydrate、chrysin。
3.6 以 HPLC 分離
使用的管柱是 Thermo 的 C18 管柱，型號是 Hypersil BDS C18，Dim.
(mm)：150×3，Particle Sz. (μ)：5，流動相比例主要為 0.5% CH3COONH4
(pH 6.9)：MeOH=70：30 為最佳條件，其中分離 ABTS.+與 1,3-benzendiol 反應生成物時，0.5% CH3COONH4的 pH 調整為 6.2；分離 ABTS●+與苯 benzenediol(ortho-、para-)、benzenediamine (ortho-、para-)、aminophenol(三 種異構物)反應生成物時，流動相比例為 0.5% CH3COONH4 (pH 6.9)：
MeOH=65：35。