3-1 實驗藥品
3-1-1 分析物
Hesperetin，Naringenin 購買於 Alfa Aesar (Ward Hill, MA, USA)公司，
Kaempferol 購買於 TCI (Tokyo, Japan)公司，Quercetin and Sudan III 購買於 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)公司，Sodium tetraborate 與 Dodecyl sulfate sodium (SDS) 購買於 Acros (New Jersey, USA)公司， Boric acid 、 disodium hydrogen phosphate 和 sodium dihydrogen phosphate dihydrate 購買於 Showa Chemicals (Kyoto, Japan)公司，蜂蜜購買於 Gee bees farm (Nantou, Taiwan)，紅酒 皆買於學校附近超商，其中梅若紅葡萄酒製造於智利，紅麴紅酒製造於台灣，
everyday 紅酒製造於美國加州，cristina 紅酒產於西班牙。
圖 3-1 左一為智利紅酒梅若紅，左二為台灣紅麴紅酒，左三為美國加州紅酒，
左四為西班牙克里斯提娜紅酒 3-1-2 緩衝溶液
硼酸(H2BO3)與四硼酸二鈉(Na2B4O7)分別為日本 SHOWA 及德國 Merck 公司
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之產品。
3-1-3 緩衝溶液添加劑
本實驗所使用的陰離子界面活性劑為正十二烷基硫酸鈉(Sodium Dodecyl Sulfate, SDS)為德國 Merck 公司之產品，其分子量為 288.38 g/mole 及分子式為 CH3(CH2)11OSO2ONa，如表 3-1 其 25 ℃下於純水中之臨界微胞濃度值(critical micelle concentration, CMC)為 8.2 mM[134]，在 pH 較低(pH < 4)時 CMC 值會降 至 6 mM[135]，在 8.2 mM 濃度下微胞約為 62 個單體組成[136]。
3-1-4 其他試劑與藥品
氰甲烷(acetonitrile, ACN)購買於美國 Fisher 公司的 HPLC 級試藥。氫氧化鈉 (NaOH)與鹽酸(HCl)購買於日本 Kanto Chemical 公司的分析級試藥。二次去離子 水以美國 Millipore 的 Milli-Q 系統(Millipore, Bedford, MA, USA)純化之。在本 實驗中，μeof 的中性標示劑為氰甲烷，μmc的標示劑為 Sudan Ⅲ。所有的溶液在 使用之前，皆以 0.22 μm 的薄膜過濾。
3-2 實驗設備及耗材
3-2-1 毛細管電泳儀
如圖 3-2 使用的電泳儀為 Beckman P/ACE System MDQ (Fullerton, CA, USA) 全自動化毛細管電泳儀，連接 PDA (photo-diode array)偵測器，能偵測的波長範 圍為 190 ~ 600 nm (256 Element Diode Array)。電泳儀的操作電壓範圍為-30.0 ~ +30.0 kV；恆溫控制範圍：15 ~ 40 ℃；進樣時間範圍：1.0 ~ 600.0 秒；水動力 注入壓力範圍：0.1 ~ 25.0 psi；真空進樣壓力範圍：0.10 ~ 5.00 psi；電力進樣電 壓範圍：-1.0 ~ -10.0 及+1.0 ~ 10.0 kV (1.0 ~ 99.9 秒)；洗滌(rinse)壓力範圍：0.1 ~ 100.0 psi。儀器的控制與資料的處理經由個人電腦(586-IBM AT-compatible PC) 及控制軟體(P/ACE MDQ system version 2.3 for window)連線控制，並使用 IEEE-488 界面板將電腦與儀器連線。
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圖 3-2 Beckman P/ACE MDQ 毛細管電泳儀 3-2-2 毛細管柱
如 圖 3-3 本 實 驗 所 採 用 的 熔 溶 矽 膠 (fused silica) 毛 細 管 為 PolymicroTechnologies 公司(Phoenix, AZ, USA)之產品，其內壁沒有衍生化修飾，
表面覆蓋一保護層-聚乙烯胺(polyimide)，外徑(O. D.)為 363 μm，內徑(I. D.)為 50 μm，總長(Lt)為 60.2 cm，至偵測器的有效長度(Ld)為 50 cm。並且在近偵測器端 燒出一個約 3 mm 之窗口，作為 UV-Vis 光源穿透毛細管及偵測毛細管柱內的分 析物。
圖 3-3 毛細管
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3-2-3 實驗室型酸鹼度/氧化還原電位計(Laboratory pH Meter) 如圖 3-4 酸鹼度計為台北上泰(Suntex)公司之產品，型號為 SP-2300，內附 有溫度校正的功能，其電極(InLab 410)為瑞士 Mettler-Toledo 公司之產品，其 pH 值的測定範圍為 pH -2.00～+16.00，準確度為±0.01 個單位，具有 0 ~100 ℃自動 或手動溫度補償。
圖 3-4 酸鹼度計
3-2-4 實驗室型導電度計(Laboratory conductivity meter)
如圖 3-5 導電度計為台北上泰(Suntex)公司之產品，型號為 SC-170，內附有 溫度校正的功能，其電極(980-K19/120)為瑞士 Mettler-Toledo 公司之產品，其導 電度的測定範圍為 0.00 μs/cm ~2000 ms/cm，具有六段測量範圍，可自動或手動 切換。在 50 ms/cm 內導電度之精確度為±1 % (當使用 1.0 Cell)；其溫度測定範圍 為 0 ~ 100 ℃，溫度精確度±0.4 ℃，具有自動溫度補償及 Hold 等功能。
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圖 3-5 導電度計 3-3 實驗方法
3-3-1 分析物之配製
樣品分析物之母液濃度為 1000 μg / mL，皆溶於含 100 %甲醇中，平時冷藏 於 4 ℃的冰箱。先將四種分析物母液混合並再以甲醇稀釋 10 倍成為二次母液(10 μg / mL 及含 100 % 氰甲烷)後，再依據實驗條件稀釋至所需的偵測濃度。
3-3-2 緩衝溶液之配置
H2BO3與 Na2B4O7的母液濃度皆為 200 mM 溶解於水溶液，平時冷藏於 4 ℃ 的冰箱中，實驗進行時將相同濃度的 H2BO3與 Na2B4O7以適當的體積比例互相 混合調配至所需 pH 值的硼酸鹽緩衝溶液，再稀釋至偵測所需的濃度，必要時以 1 M 的鹽酸或氫氧化鈉來微調 pH 值。
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實驗用之 SDS 母液濃度為 200 mM 之水溶液，平時冷藏於 4 ℃的冰箱中，
實驗進行時再稀釋至偵測所需的濃度。
3-3-3 紅酒樣品之萃取
取 10 mL 紅酒及 10 mL 乙醚以超音波萃取，萃取後取上層乙醚層置入減壓 濃縮儀濃縮，濃縮完成之剩餘物以 10 %甲醇溶液調配成 5 mL 的樣品溶液，接著 以 0.22 μm 的薄膜過濾。
3-3-4 蜂蜜樣品之萃取
根據文獻，取 50 克之蜂蜜溶於 100 mL 的 pH 2 鹽酸溶液中，以脫脂棉過濾 後，加入 20 克 XAD-2 樹酯(吸附類黃酮類化合物)，之後通入 20 mL 玻璃管柱中，
以 40 mL 的 pH 2 鹽酸溶液及 60 mL 的水清洗，隨後以 40 mL 甲醇將樣品流出並 放入減壓濃縮儀，最後的濃縮物再加入甲醇，接著以 0.22 μm 的薄膜過濾。
3-3-5 毛細管的處理
為了保持毛細管的暢通及活化，將清洗分為四個部份：新管柱之清洗、每日 實驗前之清洗、每組實驗間之清洗及每次實驗間之清洗。一支新的毛細管柱，在 未使用之前，先以二次去離子水清洗五分鐘，接著以 1M 的 NaOH 清洗二十分鐘，
再以 0.1M NaOH 清洗二十分鐘，最後以二次去離子水清洗二十分鐘，所有步驟 之溫度皆在 25 ℃下進行，以確保管壁之矽醇基的活化。在每日進行實驗之前，
先以二次去離子水清洗五分鐘，接著以 1M 的 NaOH 清洗十分鐘，再以 0.1M NaOH 清洗十分鐘，最後以二次去離子水清洗四十分鐘，以確保毛細管的暢通，
隨後及可進行每日實驗。在每組進行實驗之前，先以二次去離子水清洗二分鐘，
接著以 1M 的 NaOH 清洗十分鐘，再以 0.1N NaOH 清洗十分鐘，最後以二次去 離子水清洗十分鐘，以確保毛細管的流通舒暢，隨後及可進行每組實驗。在每次 實驗進行之間，皆以二次去離子水清洗一分鐘，接著以 1.0 N 的 NaOH 清洗二分
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鐘，再以 100 % ACN 清洗二分鐘，最後以二次去離子水清洗五分鐘，使管內的 pH 值與緩衝液達成平衡，所有步驟之溫度皆於 25 ℃下進行，隨後即可進行下 一個實驗。
3-3-6 實驗操作
實驗的偵測波長定為 200 nm，區帶電泳的操作電壓為+25 kV，LVSS 模式的 操作電壓為+25 kV 切換為-25 kV，反向掃及模式的操作電壓為-15 kV，電流控制 在 0 ~ 100 μA 之間，樣品進樣方式為水動力注入，注入時間在一般區帶電泳(CZE) 為 5 秒，濃縮時注入時間為 120 秒或 480 秒，壓力差設為 1.0 psi (68.9 mbar)，管 柱溫度控制在 25 ℃，其他實驗條件於結果與討論部份再詳加敘述之。
3-3-7 毛細管電泳之相關計算 (1) 電滲流 μeo與溶質有效電泳遷移率μep
(3-12)
(
) (3-13)
其中 teo為電滲流的遷移時間(sec)，Lt為毛細管總長(cm)，Ld為毛細管進樣端到 偵測器的有效分離長度(cm)，V 為外加電壓(voltage)，μap為分析物的視遷移率，
tr為分析物的遷移時間(sec)。
(2) 相對半高峰寬(Relative ΔW1/2)
⁄ ⁄
⁄
(3-14) 其中 W11/2，W21/2分別為分析物 1 與 2 的半高峰寬。
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a. The data were from Scifinder Scholar Database, Ver. 2011. 12, by 2011 American Chemical Society
hesperetin naringenin
quercetin kaempferol
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圖 3-7 Beckmann 軟體 120 sec 樣品注入的計算
圖 3-8 Beckmann 軟體 480 sec 樣品注入的計算.
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Detergent CMC (mM) N
Anionic
Sodium dodecyl sulfate (SDS) 8.2 62
Cholic acid 14 2~5
Glycocholic acid 13 2
Taurocholic acid 10~15 4~5
Cationic
Cetyltrimethylammonium bromide (CATB) 1 78 Dodecyltrimethylammonium bromide
(DTAB) 15 50
Hexadecyltrimethylammonium bromide 0.026 168 Zwitterionic
CHAPS CHAPSO Nonionic
Polyoxyethylene dodecanol 0.1
Triton X-100 0.24 140
表 3-1 MEKC 常用界面活性劑之臨界微胞濃度值(CMC)及單體聚集數(N)[137].
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