2-1 類黃酮類化合物
2-1-1 基本介紹
類黃酮 (flavnoids) 為水溶性物質，常存在於植物之中，它們賦予蔬菜、水 果顏色，例如：葡萄、蕃茄、櫻桃、柑橘類水果、豆科植物、洋蔥。目前發現的 類黃酮化合物及其衍生物已經超過四千種以上，類黃酮經常被當為維生素 P，它 能使維生素 C 與腎上腺素不被銅氧化，也幫助產生抗自由基的酵素。能抗病毒、
抗發炎反應、抗痙攣。在健康狀態下，類黃酮能協助維生素 C 儲存膠原，兩者 合併使用能發揮相助作用，強化彼此的功能，能提高血管的效能與調節滲透能力，
是維持生命所需的元素。芸香甘(Rutin)以及檞皮素(Quercetin)是生物中最常見之 類黃酮，芸香甘(Rutin)被用來治療牙齦出血，檞皮素(Quercetin)可抑制致癌物發 生作用，黃豆中也富含黃酮物質。
天然的類黃酮化合物被公認為非常好的抗氧化劑，抗氧化能力是維生素 E 的 50 倍，維生素 C 的 20 倍，且分子結構小，水溶性，易被人體吸收，無蓄積 性作用，因此廣泛地被當作藥物使用，一般認為此類化合物有療效是因為它的結 構可以吸收自由基。
2-1-2 結構及分類
類黃酮素的主要結構為一色烷(chromane)架構，在位於 C2 or C3的位子接上 一苯基(phenyl) [81]可見下圖所示：
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茶葉（茶樹；2000-2500 mg/kg），蘋果（44 mg/kg），紅洋蔥（1910 mg/kg），
紅葡萄，柑橘、西紅柿、西蘭花及其他綠葉蔬菜。此外還有許多漿果的
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之後以號碼稱呼各分析物時，亦以上述之號碼為主。
紅酒中常見之類黃酮化合物含有 quercetin 及 kaempferol，而蜂蜜製品常含有 以上四者分析物。
2-2 類黃酮化合物之毛細管電泳相關文獻
於 Web of Science 的 資 料 庫 中 ， 搜 尋 關 鍵 字 ”flavonoid” 及 ”capillary electrophoresis”不限年份會得到 580 篇文獻資料，2003 年以前為 130 篇，2003-2007 占了 227 篇而 2008-2012 年佔了 223 篇，若加上”wine”的關鍵字則文獻篇數縮至 44 篇，若以”flavonoid”及”HPLC”查詢會得到 12585 篇文獻，大致上可以觀察出 雖然 HPLC 還是有很多優勢存在，但也越來越多研究投入毛細管電泳應用在此類 化合物的分析之上，
大多類黃酮化合物的分離鑑定目前還是依賴高效能液相層析來達成，但其中 我們關心的是，如何以更節省有機溶劑以及時間的方式來達成分析的目的。
目前類黃酮化合物的分析技術有下列文獻報導過:薄層層析[90, 91]，氣相層 析[92, 93]，高效能液相層析[94-97]，毛細管電泳[98-102]。
大部分利用毛細管電泳來分析類黃酮類化合物[81, 103]，是使用在研究天然 物，如植物[104-106]、蔬菜水果[107]、草藥[108]及其他植物或蔬果汁之衍生產 品[109-111]上。主要分離方法會使用毛細管區帶電泳法(CZE)或微胞電動力層析 法(MEKC)，緩衝溶液主要為磷酸或是硼酸緩衝液，毛細管的內徑會選擇 50-100 μm，電壓範圍為 10-30 kV，注入樣品的體積範圍為 10-50 nL，主要以 UV 偵測，
但有時也會使用螢光偵測、電化學偵測或質譜儀偵測。
緩衝溶液經常選擇硼酸溶液是因為硼酸分子易與 1, 2-diol 位置形成五環錯 合物，或與 1, 3-diol 位置形成六環錯合物而有利分析的進行[112]。
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1994 年，Ferreres 等人[100] 以 MEKC 的方法分離了蜂蜜中 13 種類黃酮類 化合物，分離條件為：pH 8.0 的 200 mM 硼酸緩衝液添加 50 mM SDS 及 10 %甲 醇，75 cm 75 μm I.D.毛細管柱，外加電壓+20 kv，溫度為 30 ℃。
2004 年，Wang 等人[113]以 HPLC 及 CZE 的方法分析紅酒中之類黃酮化合 物，quercetin 的偵測期限為 60 ng/mL，naringenin 偵測期限為 100 ng/mL，hesperetin 偵測極限為 150 ng/mL。
2007 年，Zhu 等人[114]以將樣品溶於水之中，以反向遷移微胞濃縮法(SRMM) 及增強樣品進樣法(ASIW-Sweep-RMM)的方法分離草藥中之類黃酮化合物，
SRMM 法得到了 27~37 倍的增強效果，而 ASIW-Sweep-RMM 法得到了 45~194 倍的增強效果。分離條件：pH 2.0 之 20 mM 磷酸緩衝液加上 100 mM SDS 及 20
% ACN，52.5 cm 75 μm I.D.毛細管柱，外加電壓為-15 kV，hesperetin 之偵測極 限為 11.5 ng/mL。SRMM 法依然是依據 stacking 的概念。
2007 年，Herrero-Martinez 等人[115]以混合界面活性劑之 MEKC 方法在 20 分鐘內分離了蜂膠中的類黃酮化合物。分離條件：pH 7，50 mM 磷酸緩衝液含
2010 年，Pospisilova 等人[117]使用大體積樣品注入堆積(large volume sample stacking with polarity switching, LVSS)的技術分離植物萃取液中多酚類成分，分 離條件為 pH 9.0 的 50 mM 硼酸緩衝液，施加-25 kV 1.6 分鐘後轉為+ 25 kV，偵 測極限為 9~16 ng/mL。
2010 年，Cesla 等人[118]在 15 分鐘內以 MEKC 方法分離了 25 種黃烷酮類 化合物，分離條件為：pH 9.05 之 25 mM 硼酸緩衝液添加 10 g/L SDS 及 1.85 g/L
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S-β-CD，外加電壓為+20 kV。
2011 年，Cao 等人[119] 使用 MEEKC 的方法，得到 185~508 倍增強的訊號，
分離條件為：10 mM 硼酸緩衝液或 25 mM 磷酸緩衝液中添加 0.5 %乙酸乙酯，2
% SDS，9 mM DTAC 和 4 %正丁醇，47.5 cm 50 μm I.D.的毛細管柱，外加 25 kV 電壓，溫度為 25 ℃，偵測極限為 8~22 nL/mL。
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圖 2-2 類黃酮類化合物之結構及分類
O
O
OH
1. Flavonols (黃酮醇)
O
O
2. Flavonols (黃烷酮)
O
3. Flavones (黃酮)O
O
OH
4. Flavanols (黃烷醇)
O+
OH
5. Anthocyanidin (花青素)
O
O
Isoflavanols (異黃酮)
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表 2-1 The references about MEKC (part I).
Sample Flavonoids Buffer Ref. Year
Honey Pinobanksin,
naringenin, hesperetin,
methanol, 200 mM sodium borate at pH 8.0
[100] 1994
Azadirachta indica Astragalin,
nicotiflorinquercetin,
Tea leaves, tea beverages, Grapes, apples, red wines
Green tea catechin, Syringic acid, p-cumaric acid, vanillic acid, caffeic acid, gallic acid, 3,4-dihydroxybenzoic acid,
MEEKC: 2.89 % w/v SDS, 1.36 % w/v heptane, 7.66 % w/v cyclohexanol, 2
% w/v ACN, phosphate buffer at pH 2.0
[121] 2005
Green tea dietary supplements
Green tea catechins 50 mM SDS, 5 mM borate–60 mM phosphate at pH 7.0
[122] 2006
Theobroma cacao beans, chocolate
(−)-Epicatechin, caffeine, theobromine and procyanidin B1 and B2
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表 2-2 The references about MEKC (part II).
Sample Flavonoids Buffer Ref. Year
Alpinia katsumadai Hayata
Cardamonin, alpinetin RMEKC: SDS (20.9
%, w/v), water (13.0
%, v/v), 1-butanol(18
%, v/v), heptane (1.5 naringenin, morin, fisetin, quercetin, kaempferol, galangin, apigenin, chrysin
MEKC: 25 mM SDS, 25 mM SC, 10
% methanol, 50 mM phosphate at pH 7. 0
[115] 2007
Ixeridium gracile Luteolin-7-o-glucoside, 2', 4'-dihydroxy-dihydrochalcone, 7-hydroxy-flavanone,
quercetin-3-o-galactoside
MEKC: 15 mM
epicatechin, liquiritin, rutin, baicalein, hyperoside, quercitrin, naringin,
naringenin, luteolin, silymarin, alpinetin, wogonin
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表 2-3 The references about MEKC (part III)
Sample Flavonoids Buffer Ref. Year chrysin, acacetin, flavanone, flavone,
mMborate-phosphate pH 2.5, 25mM HP-β-CD
[129] 2009
Green tea beverages
Green tea catechins 50 mM SDS, 50 mM phosphatepH 2.0, 75 mM NaCl.
[130] 2009 Green tea
samples
Green tea catechins, flavones such as naringin, biochanin Radix et Rhizoma Salvia
Miltiorrhizae
Calycosin-7-O-β- salvianolic acid B, protocatechuic acid
MEEKC: 0.6 % w/v heptane, 3.0
% w/v SDS, 6.0 % w/v 1-butanol, 5 mM sodium tetraborate buffer (pH 9.0) + variable amounts of SC-SWNTs
[131] 2010
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表 2-4 The references about MEKC (part IV).
Sample Flavonoids Buffer Ref. Year
Radix Astragali Quercetin, rutin, calycosin, ononin,
calycosin-7-o-β-D-glucoside
MEEKC: 0.5 % ethyl acetate, 2 % SDS, 9 mM DTAC, 4 % 1-butanol, 10 mM sodium borate or 25 mM phosphoric acid at pH 2.0 phosphate at pH 8.0
[132] 2011
Brassica oleracea Kaempferol, quercetin LVSS: 10 mM sodium borate buffer at pH 8.4
[133] 2012
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