實驗設計與假說

本 研 究目 的 在探 討富 含 之特 殊脂 肪 酸 cis9, trans11, trans13-conjugated linolenic acid (c9, t11, t13-CLN)的苦瓜籽油(BMSO)之降體脂功能、需要劑量及 可能機制。

實驗一

目的：初步探討苦瓜籽油是否有降體脂功效。

策略：以高奶油飲食誘發小鼠肥胖後，比較苦瓜籽油(BMSO)與大豆油降體脂效 果，實驗設計大綱如圖 3-1 所示。為了解功能成分是否來自 CLN，使用 兩種品系苦瓜籽分別含高或低 c9, t11, t13-CLN，並測量脂肪組織脂質代 謝相關 gene 表現，以期為後續機制探討提供方向。

實驗二

目的：在證實 BMSO 有降體脂的功效後，進一步探討 BMSO 的作用機制及所需 劑量。

策略：小鼠分別給予不同比例大豆油混苦瓜籽油(30:0, 25:5, 20:10, 15:15)長期餵 食，觀察降體脂效果是否有劑量-反應關係，並尋找苦瓜籽油降體脂可能 機制：包括腸道脂質吸收、PPAR活化、AMPK、PKA 或 leptin 傳訊，

實驗設計大綱如圖 3-2 所示。

第三章 材料與方法

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實驗一之實驗設計

‧組織秤重 ‧血液生化值測定 ‧脂肪組織切片與脂肪細胞大小

‧副睪脂之脂質含量測定 ‧脂肪組織 mRNA 含量測定

圖 3-1 實驗一實驗設計示意圖

實驗一之動物犧牲與樣品收集

本實驗設計是利用奶油將小鼠誘發肥胖再給予不同油脂觀察其降體脂功效，

奶油為一飽和脂肪酸(SFA)可誘導肥胖，而大豆油為不飽和脂肪酸(PUFA)可使小 鼠較不易肥胖，所以皆以奶油誘發肥胖之後，再給與奶油和大豆油分別會肥胖 及較不易肥胖的油脂與苦瓜籽油做比較。動物在犧牲前予以禁食 12 小時，利用 二氧化碳將動物窒息，秤取動物犧牲前之體重，以眼窩採血採集小鼠禁食血清，

並迅速取出組織包括肝臟，腹膜後脂肪 (Retroperitoneal fat，RE)及副睪脂 (Epididymal fay, EP)、鼠鼷脂肪(Inguinal fat)、小腿腓腸肌、腎臟、心臟、胰臟 和脾臟等，取出後立即秤重並投入液態氮中，保存於 -80℃，供日後實驗分析。

Epididymal fat 剪下一小塊泡在 10%甲醛中，以供日後切片用。

2 週(適應期) 10 週(誘導肥胖) 5 週(試驗飲食)

六週齡 八 十八 二十三

第三章 材料與方法

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實驗二之實驗設計

‧組織秤重 ‧血液生化值測定 ‧脂肪組織切片與脂肪細胞大小

‧肝臟之脂質含量測定 ‧脂肪組織發炎相關指標測定

‧脂肪組織及肝臟 mRNA 含量測定 ‧脂肪組織及肝臟蛋白質磷酸化測定

圖 3-2 實驗一實驗設計示意圖 實驗二之動物犧牲與樣品收集

本實驗設計是給予不同油脂觀察其體脂堆積情形，由於上個實驗已有與奶 油做比較，且發現苦瓜籽油降體脂效果較奶油好，所以在實驗二我們就只與大 豆油做比較。動物在餵食試驗飲食 4 週，取眼窩血測血清三酸甘油酯及 Leptin，

第 8 週收集糞便測腸道脂質吸收率。動物在犧牲前予以禁食 12 小時，利用二氧 化碳將動物窒息，量小鼠鼻肛長做為測量小鼠的 BMI ( Lee’s index )，秤取動物 犧牲前之體重，以眼窩採血採集小鼠禁食血清，並迅速取出組織包括肝臟，腹 膜後脂肪(RE )及副睪脂(EP )、鼠鼷脂肪( Inguinal fat )、小腿腓腸肌、腎臟、心 臟、胰臟、脾臟、下視丘等，取出後立即秤重並投入液態氮中，保存於 -80℃，

供日後實驗分析。Epididymal fat 剪下一小塊泡在 10%甲醛中，以供日後切片 用。

3 週(適應期) 11 週(試驗飲食)

六週齡 九 二十

第三章 材料與方法

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