(Penh methacholine /Penh normal saline )表示。
3.3.1 感染腺病毒之樹突細胞於小鼠系統性免疫中誘發特殊 T 細胞的
能力
將腺病毒感染的樹突細胞經由尾靜脈注射到小鼠體內，十三天後 取出脾臟細胞加入OVA 共同培養 72 小時，之後再加入 PMA 與 ionmycin 刺激 CD4
+
T 細胞分析其分泌 IFN-γ與 IL-10 的能力。由細胞 質內染分析的結果中發現：Ad-IL-10/IL-12 組有較高比例的 CD4+
T 細胞會同時分泌IFN-γ+
及 IL-10+
細胞激素，和Ad-Mock 組比較在統 計上有極為顯著的差異 (Fig. 8)。（一） 合併給予 Ad-IL-10/IL-12 感染的樹突細胞在預防過敏氣喘動 物的效果
3.3.2.1 OVA 專一性抗體 IgE、IgG1 與 IgG2a 在氣喘動物模式致敏
期間的表現狀況
整個實驗流程如Fig. 9 所示，在致敏過程中的第零天、第七天、
第十四天與第十八天進行眼窩採血後分離出血清測量血中 OVA 專一
性抗體的濃度變化，由Fig. 10 的結果看到 IgE 在對照組與 Ad-Mock 組中隨著致敏次數的增加而提高，Ad-IL-10/IL-12 與 naive 組則沒有。
有給予致敏的三個組別 IgG1 都隨著致敏次數增加而提升，IgG2a 在
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Ad-IL-10/IL-12 組中有顯著的增加。
3.3.2.2 Ad-IL-10/IL-12 在預防呼吸道阻力的效果
在連續兩天鼻腔與三天呼吸道過敏原刺激後二十四小時，利用不 同濃度的methacholine 作呼吸道阻力測試 (Fig. 11)。結果發現對照組 與Ad-Mock 組的呼吸道阻力會隨著 methacholine 的濃度增加而提高，
而在Ad-IL-10/IL-12 組中則與 naive 的結果相近，尤其以濃度 50 mg/ml 與100 mg/ml 的刺激下有明顯降低呼吸道阻力的預防效果。
3.3.2.3 Ad-IL-10/IL-12 對於肺部發炎細胞聚集的影響
在呼吸道阻力測試實驗後犧牲小鼠，收集肺部沖洗液中的細胞，
比較主要的細胞（巨噬細胞、嗜酸性白血球、嗜中性白血球及淋巴細 胞）組成發現 (Fig. 12)，對照組與 Ad-Mock 組的啫酸性白血球明顯 增加，嗜中性白血球在Ad-Mock 組較其他兩組聚集多，而淋巴細胞 各組皆沒有差異， Ad-IL-10/IL-12 組的嗜酸性白血球細胞大大的減少，
嗜中性白血球細胞也有降低的趨式，反之則是巨噬細胞加。總體而言 給予Ad-IL-10/IL-12 組的小鼠可以減少肺部發炎細胞的浸潤。
3.3.2.4 給予 Ad-IL-10/IL-12 對於肺部發炎物質與細胞激素分泌的影 響
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利用ELISA 除了測量肺部沖洗液中 Th1 與 Th2 細胞激素分泌的 情形外，並檢測趨化嗜酸性白血球的eotaxin 與趨化嗜中性血白球的 KC 含量 (Fig. 14)。 與 Ad-Mock 組相比較，Ad-IL-1-/IL-12 組不但可 以有效的抑制Th2 細胞激素 IL-4、IL-5 及 IL-13 的分泌 (Fig. 13)，且 會產生較高量的Th1 細胞激素 IFN-γ。此外，Ad-IL-1-/IL-12 組亦能 表現較多量的IL-10 在肺部中。而在趨化激素的調控方面，則可觀察 到Ad-IL-1-/IL-12 組的 eotaxin 及 KC 的表現量降低(Fig. 14)。
3.3.2.5 給予 Ad-IL-10/IL-12 對細胞增生及細胞激素分泌的影響
觀察裂殖素及不同劑量的過敏原刺激脾臟細胞增生的反應，在 Fig. 15 中可以看到 Ad-IL-10/IL-12 組的增生反應皆比其他兩組顯著的 增加。因此認為在系統性的免疫反應中，Ad-IL-10/IL-12 組或許可誘 發較多有功能的作用T 細胞增生。在細胞激素的分泌情形來觀察 (Fig.
16)，Ad-IL-10/IL-12 組有效的抑制 Th2 細胞激素 IL-4 及 IL-13 的分泌，
且產生較高量的IL-10 及 Th1 細胞激素 IFN-γ。同樣地，在給予胸部 附近取出的淋巴細胞過敏原的刺激也發現產生較高量的IL-10 及 IFN-γ (Fig. 17)。
3.3.2.6 給予 Ad-IL-10/IL-12 對於肺部組織的病理變化影響
將肺組織做H&E 染色後，在 400×顯微鏡底下觀察到，Fig. 18 中
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對照組與Ad-Mock 組的肺部組織發炎與細胞浸潤的情況非常明顯，
而Ad-IL-10/IL-12 組的肺部組織細胞聚集發炎的現象則有明顯的改 善。
(二) 合併給予 Ad-IL-10/IL-12 感染的樹突細胞對治療過敏氣喘動物 的效果
3.3.3.1 單獨與合併給予 Ad-IL-10/IL-12 感染的樹突細胞對治療呼
吸道阻力的效果
整個實驗流程如Fig. 19 所示。在 Fig. 20 中，與對照組和 Ad-Mock 組相比，單獨給予Ad-IL-10 感染的樹突細胞無法有效降低呼吸道阻 力，而Ad-IL-12 組只在 Mch 100 mg/ml 高劑量刺激下，有減輕呼吸 道阻力的效果，反觀合併給予Ad-IL-10/IL-12 組其結果與 naive 組相 近，不管Mch 的刺激劑量為何，都有減少呼吸道阻力的效果。
3.3.3.2 單獨與合併給予 Ad-IL-10/IL-12 感染的樹突細胞影響肺部 發炎細胞聚集情形
給予致敏的氣喘動物不同腺病毒載體感染的樹突細胞，之後再給 予過敏原刺激後，觀察此修飾過的樹突細胞是否能夠改善小鼠肺部發 炎細胞浸潤情形。Fig. 21 結果發現，不論是細胞組成或細胞總數，單 獨給予Ad-IL-12 組與合併給予 Ad-IL-10/IL-12 組都能減少嗜酸性白
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血球，並且反而是 marcophage 的大量減少，而非 neutrophil 的聚集，
而在Ad-IL-10 組則與 Ad-Mock 組結果相似，皆無法降低呼吸道的發 炎情形。
3.3.3.3 單獨與合併給予 Ad-IL-10/IL-12 感染的樹突細胞對於肺部
細胞激素與發炎介質分泌的影響
測量肺沖洗液中細胞激素 (IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、IFN-γ) (Fig.22) 與趨化物質 (eotaxin、KC) 的含量 (Fig. 23)。比較各組別 分泌Th2 細胞激素 (IL-4、IL-5 與 IL-13) 與趨化物質 (eotaxin 和 KC) 情形，與Ad-Mock 組相比，單獨給予 Ad-IL-12 組其所分泌的 Th2 細胞激素都有明顯的降低，而Ad-IL-10/IL-12 組的分泌情形也類似 於Ad-IL-12 組，但在統計上卻沒有差異。在 Th1 細胞激胞 IFN-γ表 現的情形，則是Ad-IL-12 與 Ad-IL-10/IL-12 這兩組皆比 Ad-Mock 組的分泌量高。另外，Ad-IL-12 組皆可有效降低 eotaxin 及 KC 的產 量；而Ad-IL-10/IL-12 組亦可明顯減少 eotaxin 的分泌，在 KC 方面 也有此趨勢。
3.3.3.4 單獨與合併給予 Ad-IL-10/12 感染的樹突細胞對於脾臟細胞 的增生與細胞激素分泌影響
在PHA 及不同劑量的過敏原刺激下，各組的脾臟細胞對 PHA 皆
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有明顯的增生，且隨著OVA 濃度的提高細胞增生情形也有增加 (Fig.
24)。
Th2 細胞激素 (IL-4、IL-5 和 IL-13) 在 Ad-IL-12 與 Ad-IL-10/IL-12 這兩組其分泌都比對照組、Ad-Mock 與 Ad-IL-10 組量少。而 Th1 細 胞激素IFN-γ則相反分泌較多，尤以 Ad-IL-12 組較明顯。IL-10 在 Ad-IL-12 組分泌量最低，其他各組間分泌皆相似，沒有統計上的差異 (Fig. 25)。
3.3.3.5 單獨與合併使用 Ad-IL-10/IL-12 感染的樹突細胞對於肺組
織病理變化的影響
比較單獨與合併給予Ad-IL-10/IL-12 樹突細胞組別的組織切片結 果，可觀察到對照組、Ad-Mock 組與 Ad-IL-10 組的肺部組織皆有嗜 酸性白血球浸潤與肥厚的杯狀細胞層產生；至於Ad-IL-12 與
Ad-IL-10/IL-12 組則與 naive 組的結果相似，沒有明顯的發炎細胞聚 集，也沒有杯狀細胞或黏膜組織增厚的情形 (Fig. 26)。
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