活性成分之結構鑑定

石榴萃取物依據抗菌活性追蹤分︽離純化得到 1-4 四種成分︽經 HPLC 測試純

度均大於 90%︽利用 NMR 光譜解析︽並根據文獻比對︽四種成分結構皆為

ellagitannin︽如圖六︽分別 1 為 Punicalagin︾2 為 Punicalin︽其產率為 0.14 %及 0.02 %︾3 為 Strictinin A︾4 為 Granatin B︽其產率為 0.0014 %及 0.03 %^104-110〈 (1) (2)

(3) (4)

圖六︾石榴分離所得之四個ellagitannin 化學結構︽ punicalagin (1)︾punicalin (2)︾

strictinin A (3)及 granatin B (4)

O

第五節︾石榴多酚抗痤瘡活性評估 一︾石榴多酚抗菌活性評估

利用常引起痤瘡之病源菌︽金黃葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 與痤瘡桿菌 (Propionibacterium acnes)︽以紙錠瓊脂擴散試驗評估石榴多酚抗菌活性︽結果顯示：

1 與 2 具有劑量依存性的抑制金黃葡萄球菌生長︽如圖 七(A)，其最小抑菌濃度 (MIC)為 6.25 µg，其次為 4 與 3 如表二十四所示。抑制痤瘡桿菌生長以 2 與 3 具有 較好的活性，如圖七(B)，而 4 抗痤瘡桿菌活性較弱，1、2 與 3 成分的 MIC 為 12.5 µg，4 為 100 µg，如表二十四所示。

綜合兩種病源菌以紙錠瓊脂擴散試驗評估抗菌活性，石榴多酚對抗菌具有良好 的抑制作用，其中又以對抗金黃色葡萄球菌有較佳的結果。

另外︽利用掃描式電子顯微鏡(Scanning Electron Microscope︽SEM)︽觀察石榴 多酚於濃度 100 µg/ml︽對於金黃葡萄球菌與痤瘡桿菌細菌形態學的影響〈結果如

圖八(A)顯示：金黃葡萄球菌未加藥前︽形態為球狀︾表面光滑完整(C)︽加入 1 作

用 12 小時後︽細菌表面有明顯的皺縮與破損︽周圍產生顆粒狀凸起，顯示 1 對於

金黃葡萄球菌有明顯抑制作用。2 會產生與 1 相同的現象︽有破損與變形〈3 對於

金黃葡萄球菌抑制較不明顯，但多數細菌表面仍有顆粒狀凸起，4 細菌外觀改變成

橢圓形︽表面有破損的現象〈

結果如圖八(B)顯示：痤瘡桿菌未與石榴多酚接觸前︽形態為桿狀 (C)︽加入 1

與 2 作用 12 小時後︽細菌周圍產生顆粒狀凸起︽部份細菌有膨脹的現象︽或形狀

變形呈球形，顯示1︾2 與 3 對於痤瘡桿菌有明顯抑制作用〈

表二十四︾石榴多酚最小抑菌濃度與最小殺����������������������������������菌濃度比較

Anti-bacteria 1 2 3 4

S. aureus

MIC/MBC (µg) 6.25/12.5 6.25/12.5 25/50 12.5/25

P. acnes

MIC/MBC (µg) 12.5/25 12.5/25 12.5/25

100/-(A)

(B)

圖七︾石榴多酚樣品之抗菌活性分析

(A)對於金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)之抗菌活性 (B)對於痤瘡桿菌(Propionibacterium acnes)之抗菌活性 n=3

Diameter of inhibition zone (mm)

1 2 3 4

Diameter of inhibition zone (mm)

1 2 3 4

Penicillin

(A)

C 1 2 3 4 (B)

C 1 2 3 4 圖八︾痤瘡桿菌處理石榴多酚後之形態圖

(A)對於金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)之抗菌活性 (B)對於痤瘡桿菌(Propionibacterium acnes)之抗菌活性 掃描式電子顯微鏡拍攝︽「表示細菌破碎處

二︾石榴多酚脂質分解酵素抑制活性評估

利用脂質分解酵素(lipase)︽與受質 4-methylumbelliferyl butyrate solution︽反 應後產生之螢光強弱︽評估石榴多酚是否具抑制脂質分解酵素的能力〈結果顯示「

在濃度為 200 µg/ml 時︽石榴萃取物有 20%的抑制能力︽石榴多酚中 1︾3 及 4 成

分︽於相同濃度時︽皆有超過 30%的抑制能力︽與石榴萃取物相比︽有較強的抑

制作用︽如圖九〈

圖九︾石榴萃取物與石榴多酚抑制脂質分解酵素活性 石榴萃取物與多酚類����������������������������������成分濃度皆為200 µg/ml

*「p<0.05︽ n=3

Lipase activity inhibition (%)

0 10 20 30 40 50

1 2 3 4

Compound (200 µg/ml) P.G.

*

* *

三︾石榴多酚角質細胞增生抑制評估