第三章 實驗結果
七、 方法確效
以 HP-β-CD 結合硼酸鹽緩衝溶液分離離核苷的最佳分離離條件如表十二所示。
應用此條件可在7分鐘內完全分離離六六種核苷。使用此最佳化條件分析六六種核苷標 準品的線性範圍，皆介於 3 μM ~ 500 μM 之間，如表十三所示。以訊號/雜訊比 為3 所對應的濃度度定義為偵測極限 LOD 時，則六六種核苷之 LOD 值分別是：
8-羥基去氧鳥苷為 1.47 μM ；腺苷為 1.31 μM ；胞苷為 1.12 μM ；N2,N2-雙甲 基鳥苷為 0.65 μM ；尿尿苷為 1.35 μM ；肌苷為 1.14 μM 。當訊號/雜訊比為 10 所對應的濃度度定義為定量量極限 LOQ 時，則六六種核苷之 LOQ 分別是：8-羥基去 氧鳥苷為 4.91 μM ；腺苷為 4.37 μM ；胞苷為 3.72 μM ；N2,N2-雙甲基鳥苷 為 2.17 μM ；尿尿苷為 4.50 μM ；肌苷為 3.81 μM 。同日間（Intraday）RSD 小 於2.25 %，且異異日間（interday）RSD 小於 2.81 %。
我們同時也使用標準品添加法測量量尿尿液樣品中核苷的回收率率率，結果其範圍介 於 86 ~ 110 % 之間（表十四），在 80 ~ 120% 可接受範圍之內。綜合以上之數數 據資料料顯示本研究所開發之方法再現性良良好，具有可靠性。
將本研究所開發出來來的方法與表一中其他毛細管電泳分析尿尿液核苷的研究 比較，本方法分離離時間短，且樣品不不需複雜的固相萃取之前處理理，而偵測極限也 不不亞於其他以紫外光偵測訊號的研究（表十五），因此有潛力力可應用於大量量實際 樣品的分析。
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表十三、檢量量線的線性範圍，精精確度度，偵測極限與定量量極限
Table 13. Linearity, linear range of calibration curve, precision, limit of detection and limit of quantitation
LOQ: S/N=10；LOD: S/N=3；RSD for 3 replicate injections on the same day (repeatability) or over successive days (reproducibility) of peak height
Compound Linear range (μM) Linear equation R Repeatability (%) Reproducibility (%) LOD (μM)a LOQ (μM)a
8OHdG 5-300 Y = 62005 X - 0.0508 0.9938 1.40 1.87 1.47 4.91
A 5-300 Y= 68982 X - 0.1847 0.9917 1.75 1.97 1.31 4.37
C 3-100 Y = 36208 X - 0.0444 0.9967 2.25 2.81 1.12 3.72
m22G 3-300 Y = 76790 X - 0.3589 0.9905 1.57 2.29 0.65 2.17
U 5-500 Y = 38553 X - 0.3534 0.9912 0.80 1.60 1.35 4.50
I 3-300 Y = 72240 X - 0.1344 0.9947 0.58 1.86 1.14 3.81
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表十四、準確度度(回收率率率) Table 14. Accuracy (recovery)
Ingredient Original (μM) Added (μM) Found (μM) Recovery (%)
8OHdG ND 10 11 110
A 47 10 54 95
C 12 10 19 86
m22G ND 10 9 90
U 13 10 23 100
I 61 10 74 104
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表十五、以毛細管電泳法分離離尿尿液中核苷的研究及其分析條件
Table 15. Analytical conditions of studies determining urinary nucleosides by capillary electrophoresis Real
sample
Preparation Detection type Condition Analysis time range from 190 to 390 nm
BGE: 25 mM borate, 42.5 mM phosphate
pH 6.7, 200 mM SDS; uncoated fused-silica
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貳、 分析肌酸酐最佳化條件探討
肌酸酐（creatinine）是由肌肉中的能量量傳遞單位：肌酸（creatine）和磷酸 肌酸（phosphocreatine）所產生的代謝廢物。在正常情況下，它會以恆定的速率率率 經由腎臟排泄至尿尿液中，而肌酸酐的產生量量會與個體的肌肉質量量成正比。尿尿液中 的肌酸酐含量量，通常以肌酸酐清除率率率的形式來來表示，用以評估腎臟功能或肌肉功 能障礙。此外，尿尿中的肌酸酐濃度度也經常被用來來當作一個標準化的工具，當尿尿液 中藥物濃度度或外源性化學物質的濃度度除以尿尿液中肌酸酐的濃度度所得的比值作為 一個定量量的評估時，可避免尿尿液中水含量量的差異異造成的干擾。正常人尿尿液中肌酸 酐濃度度範圍為 2.5 至 23 毫莫爾濃度度 （mM)，而低於 0.45 mM 時則可能出現 加入尿尿液以外的液體做稀釋的情況。傳統上肌酸酐的定量量法是由肌酸酐與苦味酸
（picric acid）在鹼性溶液中形成有色的錯合物 (JAFFE 反應)，之後以分光光度度 計測定波長 505 nm 的吸收值來來定量量肌酸酐。與化學方法相比，儀器分析如毛細 管電泳法能提供更更高的準確度度和精精確度度 [63]。本研究也參參考 Munoz 等人發表於 2010 年年的方法 [64]，以毛細管電泳法偵測尿尿液中肌酸酐與尿尿酸濃度度，並探討的 緩衝溶液 pH 值，磷酸鹽緩衝溶液的濃度度與分離離電壓對分離離效率率率的影響。實驗 初期，吾人計畫偵測尿尿液中肌酸酐濃度度，用來來標準化尿尿液中核苷的含量量，同時計 畫觀察腺嘌類類核苷代謝的終產物『尿尿酸』在癌症病人尿尿液中的變化，但之後考慮 到影響尿尿酸濃度度的因素太多（如飲食，藥物等等），且專一性不不佳，因此最後並 未量量測癌症病患尿尿液中的尿尿酸濃度度。
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