電壓對肌酸酐與尿尿酸分析之影響

在電泳實驗中，電壓越大可增加電場強度度，提高分離離效果與速度度，但也會造 成焦耳熱上升，而產生再現性不不佳的問題。本實驗分別以 17.5 kV、20.0 kV、22.5 kV、25.0 kV、27.5 kV 五種不不同電壓進行行電泳分析，希望找出分離離快，又能保 有良良好再現性的電壓條件，其電泳圖結果如圖十二所示，而波峰高度度與遷移時間 的結果列列於表二十、表二十一。隨著電壓提高，分離離時間會縮短，在 27.5 kV 下，

分離離肌酸酐和尿尿酸只需 9 分鐘，然而因電流流值過高（＞100 μA），容易易發生基 線不不穩的情況，且尿尿酸訊號出現波峰寬度度變寬的情形，故沒有繼續嘗試更更高的電 壓進行行探討。當施加電壓為 17.5 kV、20.0 kV、22.5 kV 時，肌酸酐和尿尿酸的解 析度度良良好，但遷移時間過超過 13 分鐘，且整體分析物的波形較其它電壓來來得寬，

推測是由於溶質在毛細管內停留留時間比較久，產生擴散作用的影響。最後選擇 25.0 kV 為最佳分離離條件。

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圖十二、不不同電壓分析肌酸酐與尿尿酸所得的毛細管電泳圖譜

Fig. 12 Electropherograms of creatinine and uric acid with various separating voltage

分析條件：磷酸鹽緩衝溶液pH 3、分離離電壓 20 kV、偵測波長 240 nm。使用(A) 17.5 kV、 (B) 20.0 kV、 (C) 22.5 kV、 (D) 25 kV、 (E) 27.5 kV，等不不同分離離電 壓，分析肌酸酐與尿尿酸標準品所得的電泳圖譜。分析物標示：(1) 肌酸酐，(2) 尿尿 酸

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表二十、不不同電壓分析肌酸酐與尿尿酸所得的波峰高度度

Table 20. Effect of various voltage on peak height of creatinine and uric acid

Peak height (mV)

Voltage (kV) 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5

Cr 6.907 6.842 6.549 7.162 5.173

UA 13.263 12.512 13.791 12.206 14.108

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表二十一、不不同電壓分析肌酸酐與尿尿酸所得的遷移時間

Table 21. Effect of various voltage on migration time of creatinine and uric acid

Migration time (min)

Voltage (kV) 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5

Cr 4.86 4.04 3.46 2.80 2.60

UA 18.73 12.62 11.83 10.20 8.01

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四、 方法確效

上述實驗所得到的分析肌酸酐和尿尿酸標準品的最佳分離離條件列列於表二十二，

應用此條件可在 11 分鐘內完成分離離，其線性範圍，精精密度度，與偵測極限以及定 量量極限如表二十三所示。本方法偵測肌酸酐和尿尿酸之線性範圍皆為 50   μM   ~   1000  μM，兩兩種分析物之偵測極限（LOD）分別為肌酸酐 1.99  μM，尿尿酸 0.83  μM   (S/N = 3)，而定量量極限（LOQ）分別為肌酸酐 6.63  μM，尿尿酸 2.78  μM  (S/N  =  10)。

而且同日間與異異日間，重複測量量固定濃度度的肌酸酐和尿尿酸五次所得波峰高度度的相 對標準偏差 (RSD) 皆小於 5％，顯示本方法再現性良良好，具有可靠性。

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表二十二、分離離肌酸酐與尿尿酸的最佳化條件

Table 22. Optimal conditions for separating creatinine and uric acid

Wavelength 240 nm

pH 3

Buffer 20 mM phosphate solution

Applied voltage 25 kV

Total length 60 cm (50 cm effective length) Capillary 75  μm  I.D.  and  375  μm  O.D.

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表二十三、檢量量線的線性範圍，精精密度度，偵測極限，定量量極限

Table 23. Linearity, linear range of calibration curve, precision, limit of detection and limit of quantitation

table 13

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creatinine 到 3.96 ± 1.14 μM / mM creatinine 都都曾被報導過，都都在本方法的偵測 極限 0.65 μM   上下，因此不不易易偵測。

健康對照受試者 (n=10) 中，腺苷平均含量量為 48 μM / mM creatinine，胞苷 平均含量量為 19 μM / mM creatinine，尿尿苷平均含量量為10 μM / mM creatinine，肌 苷平均含量量為 49 μM / mM creatinine。癌症病人組，尿尿液中腺苷平均含量量為 286 μM / mM creatinine，胞苷平均含量量為 197 μM / mM creatinine，尿尿苷平均含量量為 89 μM / mM creatinine，肌苷平均含量量為 140 μM / mM creatinine。癌症病人尿尿液 中核苷平均值有高於健康對照受試者的趨勢。

癌症病患組中，70％ 可偵測到 3 個以上尿尿核苷濃度度上升高於對照組平均值

（7/10），而對照組則只有 20％（2/10）可偵測到的 2 個尿尿核苷濃度度上升高於對 照組平均值；若若扣除接受化學治療療，腫瘤血管栓塞塞術以及射頻腫瘤滅除術的病患

（n=4），則治療療前 100％ 病患可偵測到 3 個以上尿尿核苷濃度度上升高於對照組平 均值（6/6）。此外，若若病患接受化學治療療或腫瘤血管栓塞塞之後，無殘餘腫瘤者

（Cancer No 1，10），則尿尿中可偵測到的核苷數數目為 2 個，且其尿尿核苷濃度度也接 近對照組。雖然本研究觀察的病患人數數不不多，無法達到統計學差異異的門檻，但仍 可觀察到癌症病人尿尿中核苷平均濃度度高於健康對照組的趨勢，此外，癌症治療療後，

尿尿中核苷也有下降降的趨勢，與文獻上的觀察相符合 [28,33]。而癌症分期與核苷 濃度度的關聯聯性，則需要更更多數數據來來證實。

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表二十三、癌症病患與健康對照受試者基本資料料與尿尿液中核苷/肌酸酐的比值

Table 23. Demographic characteristics of cancer patients and healthy control subjects and their urinary nucleosides to creatinine ratios

T : 腫瘤本身大小 N : 淋淋巴結轉移的情況 M : 遠處轉移的情況 CCRT：同步放射及化學治療療 TAE：動脈血管栓塞塞治療療術 RFA：射頻腫瘤滅除術 -：無法偵測 NP：未測 Nil：無

-：無法偵測

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圖十三、分析癌症病患與無病對照受試者尿尿液中核苷的毛細管電泳圖譜

Fig. 13 Electropherograms of urinary nucleosides in cancer patients and healthy control subjects

(A)為癌症病患尿尿液經 30 倍稀釋後進行行分析所得的電泳圖譜，(B)為無病對照受 試者尿尿液經20 倍稀釋後進行行分析所得的電泳圖譜。分析條件：15 mM 硼酸鹽緩 衝溶液（pH 9.4）含 30 mM HP-β-CD，並於樣品中添加 2 mM 硼酸鹽溶液、分 離離電壓16 kV、偵測波長 254 nm。核苷分析物標示：(2) Adenosine、(3) Cytidine、

(5) Uridine、(6) Inosine

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