毛細管電泳因為具備了操作簡單、分離快速、低消耗量而在 近幾年被廣泛使用。螢光偵測器具有高靈敏度、低干擾和非破壞 性的優點。所以本實驗採用毛細管電泳連結螢光偵測器發展分離 ofloxacin 的分析方法。在緩衝溶液中添加 HP-β-CD 作為對掌選 擇劑，測試不同 pH 值、濃度的緩衝溶液、不同濃度的 HP-β-CD 對 分 離 的 影 響 ， 並 嘗 試 添 加 低 黏 度 的 幾 丁 聚 醣 （chitosan） 和 金 屬離子於緩衝溶液中，測試其對分離效果的影響，最後使用最佳 化的實驗條件對 levofloxacin 作定量的線性範圍及應用在測試藥 物的不純度與服藥病人尿液中 levofloxacin 的含量。以期對監控 病人的服藥量、藥物的代謝路徑提供一種便利、快速的分析方法。
一、 儀器：
測試樣品激發與放射波長的螢光儀為 Hitachi F-4500，毛細 管電泳儀器連接的螢光偵測器型號為 Jasco FP-1520，設定激發波 長（excitation） 292 nm，放射波長（emission） 493 nm。 電泳 實 驗 是 以 商 業 化 的 儀 器 進 行 ， 型 號 為 Model prince 4-tray CE System 使用 WPrince 32 bits 軟體從電腦控制，SISC 32 2.0 中文 版 軟 體 系 統 擷 取 數 據 ， 計 算 面 積 及 分 離 度 。pH 計 使 用 Horiba
pH/ion meter D-23。所有的水溶液皆以 Barnstead 製造的純水配 製，電阻值皆大於 18 MΩ/cm。所使用的空毛細管內徑為 75 μm，
外徑 375 μm，總長度為 80 公分，有效長度為 54 公分。
二、 藥品及溶液
動相緩衝溶液（running buffer）的配製是混合不同比例的磷 酸、磷酸二氫鈉及磷酸氫二鈉，並測定其 pH 值。hydroxypropyl β-cyclodextrin (Aldrich) 母液（stock solution）的濃度為 200 mM，
溶在純水中。levofloxacin (Fluka)、ofloxacin (Sigma)都溶在甲醇 中，母液濃度分別為 10-2 M 及 10-3 M。存放在冰箱中，可保存約 二個星期，實驗時以純水稀釋至需要的濃度。低黏度的幾丁聚醣
（low-viscosity chitosan, Fluka)在酸性的條件下溶解度較好，以 重量百分比為 0.01 % 溶解在 0.05 M HCl，CuCl2 (Aldrich) 、 ZnCl2 (Riedel-de Haën)及 CoCl3 (J.T.Baker)的母液為 10-3 M 溶在水 溶液中，以上所使用的溶劑皆為 LC 級。
三、 樣品配製
目前販售的 levofloxacin 成藥分為藥錠及藥劑，本次實驗所 使用的是藥錠，外觀看起來為白色、圓凸形，上面有紅色的記號 D 723，一粒藥錠重約 200 毫克，包裝上標明內含 100 毫克的
levofloxacin。藥錠樣品配製依以下步驟進行：將藥錠秤重紀錄，
以研缽磨碎後再次紀錄取用的重量，用 10 mL 的甲醇溶解，以超 音波器震盪 15 分鐘，以 6000 rpm 離心後取上層澄清液，將不溶 物去除，再以 0.22 µm 的尼龍過濾膜過濾後，稀釋到 25 mL，置 於冰箱作為母液，實驗時依需要以純水稀釋成不同濃度使用。
依患者感染的部位不同，levofloxacin 的投藥量也不盡相同，
服藥後 1 至 2 小時內會達到血中最高濃度，以原來的形式從尿液 中 排 出 ， 故 可 以 在 服 藥 的 病 人 尿 液 中 直 接 檢 測 到 levofloxacin。
此次分析的尿液樣品來源是每天服藥量約 400 毫克，連續服藥四 天的病人，收集第四天服藥後 3~4 小時的尿液，保存於冰箱中，
實驗時依需要的濃度以純水稀釋偵測。
四、 毛細管電泳實驗流程
新的空毛細管先以 0.5 N NaOH 充滿，隔夜後以純水沖洗 10 分鐘後，再以緩衝溶液沖洗 15 分鐘，就可開始使用。樣品以 100 psi 施壓 0.1 分鐘注入毛細管中，以 15 kV 進行電泳，電泳完後 用緩衝溶液以 1000 psi 推出剩餘物質，接著以緩衝溶液沖洗三分 鐘，便可開始下一次的實驗。實驗結束後，以 0.5 N NaOH 沖洗 15 分鐘，再以純水沖洗 10 分鐘即可關機。