4.2.1 槐花對大鼠腦缺血-再灌流損傷引發腦梗塞面積的效用
SD 大鼠兩側總頸動脈和右側中大腦動脈血流阻斷 90 分鐘，經 24 小 時再灌流之後，經 TTC 染色，梗塞區腦組織為白色，而非梗塞區的腦組 織為紫紅色(圖 4.4)。腦梗塞面積的百分比，在 control 組為 9.3 ± 1.7
% ，P-50 組為 9.0 ± 2.5 % ， PBS 組為 9.0 ± 1.7 %，三者都比 P-100 組的 0.7 ± 0.7%，P-200 組的 1.2 ± 1.0 % 和 D-200 組的 1.6 ± 1.8 % 大( all p < 0.001；圖 4.4，圖 4.5)。control 組，P-50 組和 PBS 組，
三者之間腦梗塞面積之百分比相似( all p > 0.05；圖 4.4，圖 4.5)。
4.2.2 槐花對大鼠腦缺血-再灌流損傷引起大鼠神經學狀態的效用 SD 大鼠兩側總頸動脈和右側中大腦動脈血流阻斷 90 分鐘，經 24 小 時再灌流後，都造成神經缺損。神經缺損等級，在 P-100 組是 0.2 ± 0.4，
P-200 組是 0.5 ± 0.5 和 D-200 組是 0.8 ± 0.4，都比 control 組的 2.5
± 0.5，P-50 組的 2.0 ± 0.6 和 PBS 組的 2.2 ± 0.4 低( all p ＜ 0.05；
圖 4.6)，而 control 組，P-50 組和 PBS 組，三者之間的神經缺損等級 相似( p ＞0.05；圖 4.6 )。
4.2.3 槐花對大鼠腦缺血-再灌流損傷引發 ED1 染色陽性細胞的效用 SD 大鼠兩側總頸動脈和右側中大腦動脈血流阻斷 90 分鐘，經 24 小
時再灌流之後，取鼠腦冠切進行免疫染色。計算從 SD 大鼠鼠腦冠切第 三和第四片間右側大腦梗塞區 1 ｍ㎡的 ED1 染色陽性細胞在控制組(C) 為 1007.3 ± 157.4，PBS 組為 1070.0 ± 132.1，兩者都比假手術組(S) 的 125.3 ± 67.5 多( both P < 0.001；圖 4.8，表 4.1)。槐花 200 mg/kg (P-200)組為 211.7 ± 92.7 比控制組(C)和 PBS 組有較少的 ED1 染色陽 性細胞(both P < 0.001；圖 4.8，表 4.1)。
4.2.4 槐花對大鼠腦缺血-再灌流損傷引發 IL-1β染色陽性細胞的效用 大腦梗塞區 1ｍ㎡ 的 IL-1β染色陽性細胞控制組(C)為 1453.5 ± 116.1，
PBS 組為 1289.7 ± 125.6，兩者都比假手術組(S)的 182.0 ± 47.6 多( both P <
0.001；圖 4.8，表 4.1)。槐花 200 mg/kg ( P-200 )組為 394.7 ± 57.9 比控 制組(C)和 PBS 組有較少的 ED1 染色陽性細胞( both P < 0.001；圖 4.8，表 4.1)。
4.2.5 槐花對大鼠腦缺血-再灌流損傷引起細胞凋亡(cell apoptosis)的 效用
在控制組(C)為 423.0 ± 38.2，PBS 組為 544.2 ± 118.1，兩者都比 假手術組(S)的 0.7 ± 1.6 多(both P < 0.001；圖 4.8，表 4.1)。槐花 200 mg/kg (P-200)組是 24.7 ± 18.7 比控制組和 PBS 組有較少的 ED1 染色陽性細胞(both P < 0.001；圖 4.8，表 4.1)。
第五章 討 論
由實驗的結果顯示大鼠兩側總頸動脈和右側中大腦動脈血流阻斷 90 分鐘，然後再灌流 24 小時後，所有大鼠都發生腦梗塞，經 TTC 染色後 梗塞區為白色，而非梗塞區為紅紫色。動物行為包括左側前肢屈曲且掌 指抓力減弱，對外力阻抗降低，以及大鼠行動朝向左痲痺肢環繞的現 象。這個動物模式與人類的腦梗塞非常類似(28.33)。而且大鼠的神經缺 損與大腦梗塞面積具有正的相關關係(29.30)。
研究結果顯示，在大鼠兩側總頸動脈和右側中大腦動脈阻斷前 30 分 鐘注射丹參 30 mg/kg 和 15 mg/kg 能減少腦梗塞面積。另外，我們在大 鼠兩側總頸動脈和右側中大動脈阻斷前 30 分鐘注射槐花 100 mg/kg 和 200 mg/kg 及腦血流阻斷後 30 分鐘注射 200 mg/kg 能減少腦梗塞面積及 改善腦梗塞大鼠的神經缺損。因此我們認為丹參與槐花均可用來治療人 類的腦梗塞。
很多研究證實缺血-再灌流會導致組織細胞死亡如缺血性心臟疾 病、腦缺血、肝臟和肺臟病疾，而 oxygen-derived free radicals 扮 演了一個重要角色(130.131.132.133.134.135.136)。一些先前研究已知 oxygen free radicals 包括 superoxide anion，hydrogen peroxide，hydroxyl radical 和 nitric oxide 對缺血所造成神經細胞的損傷和誘發延遲性神
經細胞死亡扮演了一個關鍵性的角色(20.21)。我們的結果顯示丹參 15 mg/kg、 30 mg/kg 能減少缺血-再灌流損傷大鼠的 Luminol-CL counts，
而在 Lucigenin-CL counts 則沒有變化，這些結果可能與測量的時間點 有關。Lucigenin-CL counts 對 superoxide anion 有反應的特定性
(135.137.138)， 而 Luminol-CL counts 主 要 是 針 對 reactive oxygen
species，而 reactive oxygen species 包括 superoxide anion，hydroxyl radicals，hydrogen peroxide 和 hypochlorous acid 是由 activated neurotrophil 產生(136.137.138.139.140.141.142)。有研究發現在腦缺血-再灌 流過程中 neutrophil 是 oxygen radicals 的主要來源(131)。
當腦缺血發生時，梗塞區休息狀的 microglia 會受激發而增殖與活 化成具有吞噬作用的 activated microglia，清除梗塞區的神經細胞碎 片，同時在隨後的免疫反應也扮演了一個關鍵的角色(108)。有些報告指 出活化的 microglia，astrocyte，oligodendrocyte，perivascular macrophage，monocyte 會分泌 IL-1β(112)。IL-1β為一強力的發炎介 質，作用於血管內皮細胞及黏附細胞如 E-selectin，ICAM-1、VCAM(119)。 黏附細胞促使血管內白血球黏附、滲透、聚集至缺血組織，導致缺血神 經細胞損傷。又由於白血球的黏附作用，傷害到血管內皮細胞，同時增 加 blood-brain barrier 的通透性導致腦水腫，更加速腦細胞的損傷
(19.118.119)。
許多研究發現在中大腦動脈血流阻斷後，腦神經細胞死亡至少有二 種形式：一種為早期的壞死性死亡，另一種為神經元的延遲性死亡，涉 及 DNA 的損傷(127)。在缺氧、缺血的新生大鼠模式可誘發 apoptosis(27)。 一 些 研 究 也 說 明 缺 血 後 ， CAI pyramidal 神 經 元 延 遲 死 亡 就 是 apoptosis(143.144.145)。它的產生牽涉到不同的機轉，有別於 necrosis。
Apoptosis 發生在較緩和的缺血區，在腦中風的療法上可當作一個指標 發展成為一個治療窗口(26.27)。而且，一些研究也說明在腦缺血、缺氧 下由於 glutamate 的釋出，氫氧自由基、超氧自由基、一氧化氮自由基 的產生及神經細胞發炎、細胞激素、黏附細胞和 IL-1β等皆參與了 apoptosis 的產生(128.129)。
先前研究已知丹參為一很強的 superoxide anion 清除劑，對豬心肌 缺血-再灌流模式中由於氧壓力(oxygen stress)所致的脂質過氧化具有 保護作用，而且可改善微循環和降低血小板的凝集(146)。此外，也有研 究說明在兔子心肌梗塞模式，丹參具有抑制循環中 neutrophil 的功能
(86)。 槐 花 與 銀 杏 (Ginkgo biloba) 均 含 有 相 同 的 成 分 Rutin 與 Quercetin(6.7.8.9.10)。許多研究指出，銀杏的萃取物在缺血-再灌流動物 模式中具有清除自由基、降低自由基生成、減少脂質過氧化、減少腦梗 塞面積的作用(12.13)。
本研究結果顯示丹參 15 mg/kg 、30 mg/kg 能減少缺血-再灌流損傷 大鼠的腦梗塞面積和 Luminol-CL counts。槐花 100、200 mg/kg 於腦血 流阻斷前 30 分鐘給藥; 200 mg/kg 於腦血流阻斷後 30 分鐘給藥都能減 少缺血-再灌流損傷大鼠的腦梗塞面積和神經缺損狀態。而且槐花 200 mg/kg 於腦血流阻斷前 30 分鐘給藥能減少缺血-再灌流大鼠腦梗塞區的 ED1、IL-1β染色陽性細胞和 apoptosis 細胞的數目。丹參抗腦梗塞的 作用可能與自由基的清除有關，而槐花減少腦梗塞面積的作用與抑制發 炎細胞 microglia、IL-1β和 apoptosis 有關。
第六章 結 論
結果顯示丹參 15 mg/kg、30 mg/kg 能減少大鼠腦缺血-再灌流損傷 引發的梗塞面積和 Luminol-CL counts。槐花 100、200 mg/kg 於腦血流 阻斷前 30 分鐘給藥; 200 mg/kg 於腦血流阻斷後 30 分鐘給藥都能減少 大鼠腦缺血-再灌流損傷引發的腦梗塞面積和神經缺損狀態。而且槐花 200 mg/kg 於腦血流阻斷前 30 分鐘給藥能減少大鼠腦缺血-再灌流引發 腦梗塞區的 ED1、IL-1β染色陽性細胞和 apoptosis 細胞的數目。丹參 減少腦梗塞面積的作用部份與自由基的清除有關，而槐花減少腦梗塞面 積的作用與抑制發炎細胞 microglia、IL-1β和 apoptosis 有關。丹參 和槐花可以使用來治療人類的腦梗塞
圖 3.1 丹參組之實驗流程