樣品基質的影響

樣品 L 和 S 具有不同的 pH，代表兩者的基質不同，處於不同基質 中的ε-PL 可能會有特定的構型，造成樣品 L 和 S 在 Column 1 中有不同 的表現。為了更進一步瞭解，樣品 pH 的不同是不是造成 Column 1 中 ε-PL 有不同的分離效果，於是將樣品 S 以 1 M 氨水調整 pH 到與樣品 L 相同的 8.35，以 HPLC-UV-MS 在 MeOH : 0.1% TFA 為 25 : 75 的條件下 進行分析，所得到的結果如圖 4-26，經調整 pH 後的樣品 S 並未與樣品 L 表現相同，反而是提前至 t0前就被沖提出。顯示樣品基質的改變顯著 影響了ε-PL 聚合物在管柱中的表現。

圖 4-26 樣品 S 在（A）pH 值= 4.65 及（B）8.35 時的 TIC 圖

出乎意外之外，上述調整 pH 後的 S 溶液放置數天後再次進行實 驗，所得到的結果與圖 4-23 完全不同（圖 4-27，C 圖），顯示 ε-PL 於基 質改變後需一段時間才能達到新的穩定態（構型）。此外新的穩定態 ε-PL 表現仍然是與樣品 L 不盡相同（圖 4-28，A 圖）。顯示樣品調整到相 同 pH 還不足以消弭基質對 ε-PL 構型的影響。

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圖 4-27 樣品 S 在（A）pH 值= 4.65、（B）6.65 及（C）8.35 時 的 TIC 圖

圖 4-28 樣品 L 在（A）pH 值= 4.65 及（B）8.35 時的 TIC 圖 針對樣品 pH 對分離 ε-PL 的影響，樣品 S 溶液的除了 pH 4.65 和 8.35，我們還調整 pH 到 6.65，這個溶液中 ε-PL 在管柱中的表現與 pH 4.65 溶液相似（圖 4-27），顯示近中性和酸性 S 溶液中的 ε-PL 有近似的

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構型，而鹼性中的ε-PL 則有不同的構型。

於圖 4-28 資料中擷取聚合度為 32 的 ε-PL 波峰，檢視其中離子資訊

（圖 4-29），可以清楚看到隨著 pH 值逐漸調高，質譜訊號強度隨之減 弱，但ε-PL 所帶的電荷數分布沒有差異。綜合圖 4-26、4-27、4-29 的 結果，暗示調節 pH 到 8.35 可能有導致部分 ε-PL 沉澱，以致 S 溶液進 樣時的實際濃度是嚴重高估了。

圖 4-29 聚合度為 32 的樣品 S 於（A）pH 值= 4.65、（B）6.65 及

（C）8.35 環境下所得質譜圖

與上述實驗相同，我們改將樣品 L 以甲酸調整至與樣品 S 相同的 pH 進行分析，同樣的，pH 4.65 和 8.36 的 L 溶液有不同的表現（圖 4-28）。在 pH 4.65 L 溶液中的 ε-PL 似乎保有較高的離子性，分析時快速 析出，而 pH 8.36 L 溶液中的 ε-PL 減少了離子性，造成較長的滯留時間 和好的分離效果。此外 pH 4.65 L 溶液中 ε-PL 的表現（圖 4-28，B

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圖），也不同於相同 pH 的 S 溶液（圖 4-26，A 圖）。

當擷取圖 4-25 中聚合度為 22 的 ε-PL 波峰的離子訊號進行檢視，發 現除離子強度減弱外，ε-PL 所帶的電荷數分布並沒有差異（圖 4-30）。

圖 4-30 在（A）pH 值= 8.36 與（B）4.65 環境下，樣品 L 聚合度為 22 的質譜圖比較

這章節的實驗結果顯示一個出乎預期的現象，也就是樣品的基質會 影響ε-PL 的分離效果。實驗時樣品的注射量只有 20 μL，相對於流動相 1 mL/min 的流速，原先預期樣品注入 HPLC 系統後，流動相會將樣品液 稀釋，兩種不同樣品的基質效應會消失，理論上相同聚合度的ε-PL 在 管柱中分離效果應該一致，然而實際結果卻與預期相反。我們認為因為 基質的不同，不同樣品中相同聚合度的ε-PL 具有不同的構型，當環境 改變時構型的轉變需要相當的時間（參考圖 4-26 和圖 4-27），因此雖然 分析時來自樣品 L 和 S 的 ε-PL 處在相同的流動相，可是緩慢的應變構 型轉換，導致管柱中來自樣品 L 和 S 的 ε-PL，仍然存在某種程度的差 異性。

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