牡丹皮粗萃物之製備與分析

物的抗氧化與抑制酪胺酸酶活性能力評估，大綱如下表所列(表 3.1)。各 實驗所用之儀器設備、材料、試劑與實驗方法分述如下：

表 3.1 實驗流程大綱

一、實驗材料、藥品與儀器設備

1. 中藥材料之來源

本實驗所使用之牡丹皮皆購自彰化縣員林鎮弘益中醫診所，由黃美 華中醫師鑑定並確認藥材無誤。

2. 藥品

2.1 中藥材萃取物之製備 z 無水乙醇 購自 Panreac z 牡丹皮 購自弘益中醫診所

2.2 含中藥萃取物之 β-環糊精包合物製備

z β-環糊精 Beta-cyclodextrins ( β- CD ) 購自 ALDRICH

z 羥丙基 β-環糊精 Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin (HP-β-CD) 購自 ALDRICH

z 中藥萃取物

z 丹皮酚 Paeonol pure compound 購自 ALDRICH z 無水乙醇 購自 Panreac

2.3 中藥萃取物抗老化能力 清除自由基之效果

z α,α-diphenyl-β-pricrylhydrazyl ( DPPH ) radical 購自 SIGMA

z 對苯二酚 Hydroquinone ( HQ ) 購自 SIGMA z 無水乙醇 購自 Panreac

2.4 中藥萃取物對美白的有效能力評估

中藥萃取物體外抑制酪胺酸酵素活性的影響 z Tyrosinase 購自 SIGMA, T8566

z L-Tyrisine 購自 SIGMA, T3824 z Phosphate Buffer Saline ( PBS )

３. 儀器設備

z 分光光度計 (Chromtech UV-3100)

z ELISA 分光光度計 (Spectramay340 PC-384) z 減壓濃縮機 (EYELA N-1)

z 電子天秤 (Denver instrument TB-214) z 冷凍乾燥機 (EYELA FDU-1200) z 水流抽氣機 (EYELA )

z 真空烘箱 (Instruments corp. VO-27) z 循環冷卻機

z 超音波震盪器 z 4℃ 冰箱

z -20℃ 冷凍櫃 z 粉碎機

z 96 - well plate z 八孔分注器 z 微量分注器

z 15 ml 與 50 ml 無菌離心管 z 燒杯

z 血清瓶

z 100 ml 定量瓶

二、實驗方法

1. 牡丹皮粗萃物之製備與分析 1.1 牡丹皮粗萃膠之製備

將購買回來的牡丹皮分批放入粉碎機中打碎，將所有打碎之牡丹皮 粉末收集到塑膠袋中攪拌均勻，放入密封罐中放置防潮箱中保存。

取牡丹皮粉 150 g 加入 1000 ml 以無水乙醇製備好的 95% 酒精溶 劑中提取，置於室溫下 24 小時，以濾紙濾除雜質及其他不溶的部分，

濾液再以減壓濃縮機除去乙醇後，將濃縮液放置冷凍乾燥機以 -50℃ 進 行烘乾，得到萃取膠後再置於防潮箱中備用。

1.2 牡丹皮粗萃物之分析

a. 紫外光圖譜繪製及波長選擇

精密秤取標準品丹皮酚適量置於定量瓶中，加入經無水乙醇稀釋過 後而得之 95% 乙醇作為溶劑，使其溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得到 丹皮酚的標準溶液。以 95% 乙醇當作空白，在 200 nm ~ 400 m 波長範

圍掃描，得到274 nm 為最大吸收波長並訂定為測定波長。

b. 丹皮酚乙醇溶液標準曲線制備、測定與繪製

取丹皮酚乙醇標準溶液至不同定量瓶中，以 95% 乙醇稀釋至刻 度，配製成丹皮酚乙醇標準系列溶液。以 95% 乙醇為空白，於 274 nm 此 波長測定吸光值可分別得到一系列均值。以吸光值為縱座標，溶液濃度 為橫坐標，計算一元線性迴歸與相關係數並繪製成表，即得到範圍內良 好線性關係。

c. 牡丹皮濃縮液內丹皮酚含量測定

精密秤取牡丹皮粗萃膠1 mg 精密稀釋 100 倍。依照標準曲線制備 所述方法測定，並將所得到之結果帶入標準方程式，計算牡丹皮粗萃膠 所含丹皮酚濃度。