登革熱病毒非結構蛋白 NS2 與 NS4 的表現

3.6.1.1 pET 5T△ -D2NS2A-HAHis, pET 5T△ -D3NS2A-HAHis 蛋白質表現結 果

欲表現DV-2 PL046 strain 與 DV-3 H87 strain 兩種 strain 之 NS2A，所 得到轉譯完成之蛋白質分別為D2NS2A-HAHis 與 D3NS2A-HAHis，分子量

PL046 與 H87 strains，無論是上清液與 pellet 皆無法清楚看到蛋白質大量表 現（over-expression）的現象。

以Western blot 偵測，在 DV-2 PL046 strain 以 anti-HA 抗體做偵測，可 在 C41（DE3）與 C43（DE3）菌株於 pellet 中偵測到一條符合預期的蛋白 質片段（DV2- NS2A-HAHis,約 29 kDa），並於 60 kDa 與 17 kDa 大小附近 也可以被偵測到蛋白質【圖3.9】。

在DV-3 H87 strain 中，以 anti-HA 抗體做偵測，除了 C41（DE3）偵測 不到符合預期大小的片段之外（DV3-NS2A-HAHis,約 29 kDa），其餘結果皆 與DV-2 PL046 strain 部分相似，於 60 kDa 與 17 kDa 大小附近也可以被偵

3.6.1.2 pET 5T△ -D2NS2B-HAHis, pET 5T△ -D3NS2B-HAHis 蛋白質表現 結果

欲表現DV-2 PL046 strain 與 DV-3 H87 strain 兩種 strain 之 NS2B，所得 到轉譯完成之蛋白質分別為D2NS2B-HAHis 與 D3NS2B-HAHis，分子量大 小分別為預測為19.4 kDa 與 18.8 kDa。由 Coomassie blue staining 分析 PL046 與 H87 strains，無論是上清液與 pellet 皆無法清楚看到蛋白質大量表現

（over-expression）的現象。

以Western blot 偵測，在 DV-2 PL046 strain 中，除了 C41（DE3）菌株

的上清液之外，皆可以 anti-HA 抗體偵測到一條約符合預期大小的片段

（DV2-NS2B-HAHis,約 19 kDa），但在 19 kDa 大小附近也偵測到另外兩條 分子量大小相似蛋白質【圖3.11】。

不同於PL046 strain，H87 strain 在兩種菌株 pellet 的表現下，可在 43、

19 與 17 kDa 大小附近以 anti-HA 與 anti-His 抗體偵測到蛋白質，其中 19 kDa 符合預期的大小（DV3-NS2B-HAHis,約 19 kDa）【圖 3.12】。

Anti-HA Anti-His

3.6.1.3 pET 5T△ -D2NS4A-HAHis, pET 5T△ -D3NS4A-HAHis 蛋白質表現 結果

DV-2 PL046 strain 與 DV-3 H87 strain 兩種 strain 之 NS4A，所得到轉譯 完成之蛋白質分別為D2NSBA-HAHis 與 D3NS4A-HAHis，分子量大小分別 為預測為21.7 kDa 與 21 kDa。由 Coomassie blue staining 分析 PL046 與 H87 strains，無論是上清液與 pellet 皆無法清楚看到蛋白質大量表現（over- expression）的現象。

以Western blot 偵測，DV-2 PL046 strain 中 C41（DE3）與 C43（DE3）

菌株可在上清液與pellet 中偵測到符合預期大小的片段（DV2-NS4A-HAHis, 約22 kDa），不過在 pellet 中，C41（DE3）與 C43（DE3）菌株亦有 17 kDa 的片段與inclusion body 的現象發生，將 pellet 的蛋白質含量降低分析（約 10 mg），則可觀察到 44 與 60 kDa 等片段【圖 3.13】。

H87 strain 可於兩菌株之 pellet 以 anti-HA 抗體測到兩條分子量約 40 kDa 與符合預期大小的片段（DV3-NS4A-HAHis,約 21 kDa），以 anti-His 抗體偵 測，僅能從pellet 偵測到分子量約 40 kDa 的片段（約預期片段兩倍大小）

3.6.1.4 pET 5T△ -D2NS4B-HAHis, pET 5T△ -D3NS4B-HAHis 蛋白質表現 結果

欲表現DV-2 PL046 strain 與 DV-3 H87 strain 兩種 strain 之 NS4B，所得 到轉譯完成之蛋白質分別為D2NS4B-HAHis 與 D3NS4B-HAHis，分子量大 小分別為預測為32.1 kDa 與 31.2 kDa。由 Coomassie blue staining 分析 PL046 與H87 strains，無論是上清液與 pellet 皆無法清楚看到蛋白質大量表現（over- expression）的現象。

以Western blot 偵測，在 PL046 strain 中，可在 C41（DE3）與 C43（DE3）

菌株之上清液與 pellet 以 anti-HA 與 anti-His 抗體皆可以偵測到符合預期大 小的片段（DV2-NS4B-HAHis,約 32 kDa）。不過在pellet 的部分，以 anti-HA 在兩種菌株的表現下，另有兩條20 kDa 與 17 kDa 大小的蛋白質可以被偵測

【圖3.15】。

H87 strain 在 DV3-NS4B-HAHis 的表現結果與 PL046 strain 結果相似，

在兩種抗體的偵測下皆可以於C41（DE3）與 C43（DE3）菌株之上清液與

pellet 以偵測到符合預期大小的片段（DV3-NS4B-HAHis,約 32 kDa），在 17 轉譯完成之蛋白質分別為D2E-HAHis 與 D3E-HAHis，分子量大小分別為預 測為 59 kDa 與 58.3 kDa。由 Coomassie blue staining 分析 PL046 與 H87 strains，無論是上清液與 pellet 皆無法清楚看到蛋白質大量表現（over- expression）的現象。

以Western blot 偵測，在 DV-2 PL046 strain 中以 anti-HA 抗體於 C41（DE3）

與C43 （DE3）菌株之 pellet 偵測到 70 kDa 大小的蛋白質，並於 C41（DE3）

菌株中另可可測得表現符合 DV2-E 大小的蛋白質（DV2-E-HAHis,約 59 kDa）【圖 3.17】。

H87 strain 在 C41（DE3）與 C43（DE3）菌株的表現方面一致，在上 清液與pellet 中以 anti-HA 抗體可以偵測到符合預期的片段（DV3-E-HAHis, 約58 kDa），pellet 的部分亦有 70 kDa 與 50 kDa 大小蛋白質被偵測，利用 anti-His 抗體則可在 pellet 偵測到符合預期大小的蛋白質【圖 3.18】。