一、實驗對象
於 2002-2003 年間在彰化基督教醫院神經外科，收集四十八小時內經 過接受腦血管攝影證實為顱內動脈瘤破裂的臨床案例，總共收集 37 位急性 自發性蜘蛛膜下腔出血的患者，其中包括 20 名男性及 17 名女性，平均年 齡 62 歲，其中十名病患為早期血管痙攣(如下圖)。
註：長箭頭所指為前大腦動脈血管痙攣處，短箭頭為左大腦後交通枝動脈 瘤
二、實驗方法 (一) 實驗流程
分別收集患者蜘蛛膜下腔出血後的第 1 天、第 2 天、第 5 天、第 10 天、
第 15 天的靜脈血液，分析血漿中維生素 C、維生素 E 及 TBARS 的濃度。另 外收集 274 個正常人靜脈血液中，分析血漿中維生素 C、維生素 E 及 TBARS 的濃度。
(二) 樣品收集及製備 經由靜脈抽血至含有 EDTA-K3的抗凝血管，將血液在 4 ℃下，以 1000
xg 離心 10 分鐘,分離出血漿，即刻進行血漿中維生素 C、維生素 E 及分析 血漿中 TBARS 的濃度。
(三) 實驗材料 見附錄
第二節 研究變相及操作型定義 (一) 實驗分析項目
一、血液小分子抗氧化物分析
(1)血漿還原型抗壞血酸 (ascorbic acid) 分析 (Ayekyaw, et al.；1978)
【藥品製備】
Color reagent：25 ﹪Na2WO4 . 2H2O，18.8 ﹪KH2PO4 . 7H2O， 6.25﹪ H2SO4 1.取 25 g Na2WO4 . 2H2O 加入 25 ml D.D.W 中，隔水加熱溶解，再加入 18.8
g KH2PO4 . 7H2O 溶解。2.將 6.25 ml H2SO4加入 15 ml D.D.W 稀釋。最後將
1, 2 混合置於冷凝管中加熱萃取 4-5 小時，冷卻後再定量至 100 ml，在 4 ℃下可冷藏一個月。
標準品的稀釋液：50 mM PCA
【藥品製備】
取 700μl 血漿加入等量 color reagent，充分混合暗反應 30 分鐘後，
再以 7000 rpm 離心 10 分鐘，取上層液用紫外光分光光譜儀測量 700 nm 下的吸光值。再利用抗壞血酸標準品做標準曲線，經由標準曲線來計算其 濃度。抗壞血酸標準品的濃度為 0.5，1，2，5 mg/ml，最後濃度以 mg/dl plasma 表示。
(2) 血漿維生素 E 分析 (Catignani, et al.；1983)
【藥品製備】
取 200μl 血漿加入 50 μl 50 μg/ml
α
- tocopheryl acetate 及 1.88 μg/ml retinyl acetate，充分振盪 1.5 分鐘，再加入 200 μl hexane 充分振盪 2 分鐘，以 1000 xg 離心 2 分鐘，收集上層至另一試管，重複上述步驟 2 次，三次的萃取液以氮氣吹乾，加入 350 μl methanol溶解，用NYLON 13MM 0.45UM (Millipore)過濾膜過濾，再注射 20 μl 到高效液相層析儀(HPLC)中分析血 漿中維生素 E 濃度，利用標準曲線所得到的斜率，依照公式計算濃度。最 後血漿中維生素 E 濃度表示為 μg/ml。
【HPLC 系統】
L- 7100 intelligent pump, L-7455 DAD detector (Hitachi′Ltd.,
Tokyo , ′Japan), Mobile phase: 98% methanol; Detector wavelength:
292 nm ; Sensitivity: 0.01 AUFS, HPLC column: 3.9 x 300 mm stainless steel packed with microbondapak C-18 .
【血漿維生素 E 計算公式】
(1)血漿脂質過氧化物 (TBARS)分析 (Fraga, et al.；1988)
【藥品製備】
20mM 磷酸緩衝溶液:取 2.09 g K2HPO4，1.09 g KHPO4加入 D.D.W 至 1 公升。
0.7 ﹪Thiobarbituric acid: 取 3.5 g thiobarbituric acid 加入 D.D.W 至 500 ml 並在 37℃下水浴直到溶解。
【實驗步驟】
取 25 μl 血漿加入 375 μl D.D.W 及 100 μl 0.25 mM TBH 到試管中，
充分混合，於 37 ℃下水浴 30 分鐘，冷卻後加入反應液包括 500 μl 3 % SDS、
2 ml 1N HCl、0.3 ml 10 % phosphotungstic acid 及 1 ml 0.7 % thiobarbituric acid 充分混勻，於 100 ℃下煮沸 30 分鐘，取出冷卻後，
加入 5 ml 1-butanol 萃取 TBARS，利用 1100 xg 離心 5 分鐘，取上層液利 用螢光光譜儀於 excitation 515nm 及 emission 555nm 下測吸光值再對照 標準曲線計算濃度。以 1,1,3,3-tetramethoxy propane
(TMP)為標準品配成五種濃度分別為 0，1，2.5，5，10 μM。最後濃度以 μM 表示。
第三節 臨床評估
(1)於第 1st 2nd 3rd 4th 5th 10th 15th 住院日收集有關 ASAH 病患之昏迷指數 包括 Glasgow coma scale(GCS)、Hunt & Hess grade scale(HHGS)，腦電 腦斷層蜘蛛膜下腔出血級數(CT-Fisher grade)及死亡率(mortality)，同 時利用腦血管攝影區別早期血管痙攣有無。
第四節 資料處理與分析方法
以 SPSS 軟體執行統計分析，利用 ANOVA test 、Mann-Whitney test、
chi-square test 及多因子迴歸分析，判定實驗結果平均值間是否達到統計 上顯著的差異。