照駔）、OVA 致敏前鼻腔內注射 α-GalCer（以下簡稱為 α-GalCer before）與 OVA 致敏後鼻腔內注射 α-GalCer（以下簡稱為 α-GalCer after），最後在第 40 天
BALB/c 小鼠 OVA 致敏與給予 α-GalCer，將小鼠分為四組分別為：「naïve PBS」 屬於 innate-like immune system，可藉由快速分泌細胞激素調控 adaptive immune system；所以我們分析小鼠在 OVA 致敏前與致敏後給予 α-GalCer 後兩小時
（naïve PBS）並無統計上差異（圖七(b)），但 iNKT cells 佔 lymphocytes 之百分
cells 佔 lymphocytes 之百分比相較於對照組（OVA PBS）非但沒有升高，反而顯 著下降（圖七(a)）。
3.2.2 小鼠在 OVA 致敏前或致敏後給予 α-GalCer 兩小時後肺泡沖洗液中 Th2 cytokines 濃度之變化
由於上述實驗已證實 OVA 致敏前與致敏後鼻腔內注射 α-GalCer 會影響肺部 iNKT cells 佔 lymphocytes 的百分比，我們接著探討這群 iNKT cells 的功能是否受 到影響，於是我們在鼻腔內注射 PBS 或 α-GalCer 兩小時後犧牲小鼠，並利用 cells 佔 lymphocytes 的百分比升高，且使 Th2 cytokines 濃度升高；而 OVA 致敏 之後給予 α-GalCer 兩小時後會使肺部 iNKT cells 佔 lymphocytes 百分比降低，且 使 Th2 cytokines 濃度降低；由上述結果我們推論在 OVA 致敏前與致敏後給予 α-GalCer 會影響肺部 iNKT cells 佔 lymphocytes 之百分比，進而影響 iNKT cells 分 泌Th2 cytokines-例如 IL-4、IL-5 與 IL-13-多寡程度不同。
3.2.3 小鼠在 OVA 致敏前或致敏後給予 α-GalCer 兩小時後肺泡沖洗液中 eotaxin 濃度之變化
在給予 PBS 或 α-GalCer 兩小時後犧牲小鼠，並以 ELISA 測量 BALF 中各種 細胞激素濃度時，我們意外地發現在 OVA 致敏前給予 α-GalCer 的小鼠其肺部 eotaxin 顯著高於對照組（naïve PBS）（naïve PBS=36.98±7.34 pg/ml，naïve α-GalCer=131.40±27.14 pg/ml，p<0.01，圖九），甚至高於 OVA 致敏兩次並給予 PBS 的小鼠（OVA PBS）；但 OVA 致敏後給予 α-GalCer 的小鼠其肺部 eotaxin 則是與對照組（OVA PBS）無異（圖九）。
3.2.4 小鼠在 OVA 致敏前或致敏後給予 α-GalCer 兩小時後肺泡沖洗液中 TSLP 濃度之變化
由 於 近 年 發 現 TSLP 在 氣 喘 當 中 也 扮 演 一 重 要 角 色 ， 它 主 要 由 non-hematopoietic cells 例如纖維母細胞、上皮細胞和不同種類的 stromal 或 stromal-like cells 分泌(67)；在 asthma-stromal-like 的情況下，TSLP 分泌量會升高，而 TSLP 的升 高可使抗原呈獻細胞促使T cell 偏好分化成 Th2 cells(30)。 兩小時與五天後小鼠肺部中 iNKT cells 佔 lymphocytes 之百分比（圖七(a)和圖十 二(a)）和細胞數（圖七(b)和圖十二(b)），結果顯示不論給予 PBS 兩小時或五天 後，小鼠兩次OVA 致敏後的 iNKT cells 皆比 naïve 小鼠之 iNKT cells 較高（不論 百分比或細胞數），表示兩次 OVA 致敏可使小鼠肺部 iNKT cells 升高，可作為 支持「iNKT cells 在 OVA-induced murine asthma model 中扮演一個重要的角色」
3.4 探討小鼠在 OVA 致敏前或致敏後給予 α-GalCer 五天後，肺部之細胞組 成與細胞激素有何變化
由於上述結果我們觀察到 OVA 致敏前與致敏後給予 α-GalCer 兩小時後，肺 部 Th2 cytokines、eotaxin 與 TSLP 濃度皆受到影響，故接著我們將犧牲時間點延 至鼻腔內注射 PBS 或 α-GalCer 五天後，觀察肺部較晚期之細胞激素與細胞組成 胞總數高於對照組（naïve PBS）十倍以上（naïve PBS=0.24±0.05×106，naïve α-GalCer=2.72±0.72×106，p<0.001，圖十一）；而 OVA 致敏後給予 α-GalCer 則只 高於對照組（OVA PBS）約 2.5 倍（OVA PBS=0.35±0.07×106，OVA α-GalCer
=0.94±0.13×106，p<0.01，圖十一）。
更進一步，將 OVA 致敏之前與致敏之後給予 α-GalCer 的小鼠肺泡沖洗液中 的細胞總數相比，則 OVA 致敏前給予 α-GalCer 的小鼠高於致敏後給予的組別近 三倍（naïve α-GalCer=2.72±0.72×106，OVA α-GalCer =0.94±0.13×106，p<0.01，圖 十一），證明同樣給予 α-GalCer，但在 OVA 致敏前給予的組別會使細胞 migrate 升高（naïve PBS=1.34±0.03%，naïve α-GalCer =9.11±0.81%，p<0.001），細胞數
則有兩百倍以上的升高（naïve PBS=0.02±0.00×104，naïve α-GalCer=2.36±0.35
×104，p<0.001，圖十二）；而 OVA 致敏後給予 α-GalCer 分別只使 iNKT cells 佔 lymphocytes 的百分比與細胞數上升兩倍和六倍（naïve PBS 百分比與細胞數分別 為2.45±0.67%與 0.15±0.05×104，naïve α-GalCer 為 4.76±1.11%與 1.08±0.39×104， p 值分別為 p=0.1636 與 p=0.0667，圖十二），且若將 OVA 致敏之前與之後給予 total BAL cells 中 eosinophils 所佔百分比與細胞數各高於對照組（naïve PBS）近 40 倍與 600 倍（naïve PBS 百分比與細胞數分別為 1.25±0.07%與 0.003±0.000×106， naïve α-GalCer 為 48.15±8.55%與 1.828±0.727×106，p 值皆為 p<0.001，圖十三），
證實 OVA 致敏前給予 α-GalCer 將使小鼠肺部產生嚴重的 eosinophilia；而 OVA 致敏後給予 α-GalCer 的小鼠其 eosinophils 百分比與細胞數比起對照組（OVA PBS）則分別約只上升 10 和 30 倍（OVA PBS 百分比與細胞數分別為 0.90±0.27%
與0.003±0.001×106，OVA α-GalCer 為 11.97±1.96%與 0.113±0.023×106，p 值皆為 p<0.001，圖十三），且若將 OVA 致敏之前與之後給予 α-GalCer 的小鼠其肺部 eosinophils 佔 total BAL cells 之百分比與細胞數相比，則 OVA 致敏之前給予的小 鼠皆顯著高於之後給予組別（圖十三）。
CD8+ T cells 以及 NK cells 細胞數的上升（圖十四），其中 conventional CD4+是 於給予 PBS 的小鼠（naïve PBS）有顯著升高（naïve PBS=36.98±7.34 pg/ml，
naïve α-GalCer= 131.24±30.90 pg/ml，p<0.01，圖十六）；而在 OVA 致敏後才給 予 α-GalCer 之小鼠則與給 PBS 的小鼠（OVA PBS）相較後有些微降低（圖十
（OVA PBS=164.90±55.49 pg/ml，OVA α-GalCer= 18.24±8.38 pg/ml，p<0.01，圖 十七）。
3.5 研究 α-GalCer 是否可直接影響初代培養之肺臟細胞產生 eotaxin 之能力 由我們的數據中發現 OVA 致敏前給予 α-GalCer 兩小時後，小鼠肺部的
要由上皮細胞、內皮細胞與纖維母細胞分泌(23, 68)，其中並無文獻指出 iNKT 此「naïve 小鼠給予 α-GalCer 後可吸引 eosinophils 至給予 α-GalCer 之局部部位」
的現象是否只侷限於呼吸道，抑或者可延伸至其它部位，故我們設計一個實驗將 照組（腹腔注射 PBS）約兩倍（PBS=2.22±0.24×106，α-GalCer=4.13±0.80×106， p<0.05，圖二十(a)），而腹腔沖洗液中 eosinophils 不論是佔所有細胞之百分比或 細胞數皆高於對照組三倍與六倍（PBS 的百分比與細胞數分別為 3.15±0.58%與 0.74±0.21×105，而 α-GalCer 為 10.35±1.64%與 4.62±1.30×105，p 值皆為 p<0.01，
圖二十(b)與(c)），推論給予 naïve 小鼠 GalCer 後可吸引 eosinophils 至給予 α-GalCer 的局部部位，造成局部性 eosinophilia。