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先製作出四種濃度(0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)的磁奈米水 溶液,直接作用在大腸桿菌 BCRC11509 及 DH10B 的菌液中,並使用兩種倍率(40 倍及 100 倍)觀察它們的外觀形態,同時磁奈米的作用時間分成兩種〆2 小時與

度在 25μg/ml 時,有促進 BCRC11509 大腸桿菌生長的效果,在濃度 50μg/ml 時對菌的生長,則沒有顯著的影響,然而濃度在 100μg/ml 時,對菌的生長則開 始有抑制的效果。磁奈米的四種菌液濃度(0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100 μg/ml)對 BCRC11509 菌的影響,將三次實驗結果進行統計之後,發現磁奈米四 種濃度對 BCRC11509 大腸桿菌並無顯著的毒性,分析如圖 3-3-1 所示。

有電穿孔々濃度 100μg/ml、無電穿孔々濃度 100μg/ml、有電穿孔。磁奈米的 濃度分為 0μg/ml 及 100μg/ml,濃度 0μg/ml 的配製過程是以加入二次水配製 濃密不易計算,和上一個實驗對大腸桿菌 BCRC11509 探討磁奈米濃度變因的實驗 有相似的情形,同時和其他兩種稀釋濃度也較無一致性,故本次實驗只取濃度稀 g/ml、有電穿孔々濃度 100μg/ml、沒有電穿孔々濃度 100μg/ml、有電穿孔) 對 DH10B 大腸桿菌的影響,經由五次實驗結果進行統計之後,發現磁奈米濃度與 電穿孔效應對 DH10B 大腸桿菌並無顯著的毒性,分析如圖 3-4-1 所示。

伍、 蛋白質定量

本實驗以牛血清白蛋白(BSA)作為定量的標準液,原始濃度為 2mg/ml。各取 50μL 的標準液 10 管(各含 25、50、100、150、200、250、300、400、500、600μg/ml 的 BSA)和 1000μL 的蛋白質染料(protein dye)以 1〆20 混合,蛋白質染料是 以 BCA protein assay reagent A 及 BCA protein assay reagent B 以體積比 50〆1 混合。用分光光度計測其在 562 nm 的吸光值,一開始需設定二次水的吸

光值=0,接著將各蛋白質樣品經過 37℃下、30 分鐘的處理後,紀錄各冸的吸光 0μg/ml、沒有電穿孔々濃度 0μg/ml、有電穿孔々濃度 100μg/ml、沒有電穿孔々 濃度 100μg/ml、有電穿孔)進行一維電泳分析,電泳前蛋白質樣品會先和染劑 (0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)對 BCRC11509 菌分泌性蛋白質表現 的影響,藉由二維蛋白質電泳的膠片上,找出幾個蛋白質點,冺用 PDQuest 軟體 研究這些蛋白質產生了何種變化。每一種濃度皆重複三次實驗,冺用 PDQuest

軟體分析四種磁奈米菌液濃度影響 BCRC11509 菌的分泌性蛋白質之二維蛋白質

本實驗使用不同濃度的磁奈米菌液(0μg/ml 及 100μg/ml)以及電穿孔的有 無來對 DH10B 大腸桿菌進行測詴,作用時間一樣是 22 小時,看看 DH10B 菌分泌 性蛋白質表現的影響,藉由二維蛋白質電泳的膠片上,找出幾個蛋白質點,冺用 PDquest 軟體研究這些蛋白質產生了何種變化。此實驗總有四種測詴條件〆濃度 0μg/ml、無電穿孔々濃度 0μg/ml、有電穿孔々濃度 100μg/ml、無電穿孔々濃 度 100μg/ml、有電穿孔。此外,冺用 PDQuest 軟體分析四種測詴條件影響 DH10B 菌的分泌性蛋白質之二維蛋白質電泳圖時,在電泳片上特冸選出 4 個蛋白質點來

name MW pI 1 DppA 52555 5.47 2 G6pD 51633 5.61 3 AroG 38081 6.13 4 G3p1 36458 6.58 5 OmpF 36246 4.6 6 Udp 27960 5.86 7 AhpC 21579 5.0 8 SodF 22160 5.53 9 Dhe4 45417 5.96 10 GlyA 46051 6.04 11 AroG 38081 6.13 12 G3p1 36458 6.58

name MW pI A Dhe4 45417 5.96 B GlyA 46051 6.04 C HypD 41794 5.8 D SyfA 38765 5.85 E UspE 34492 5.3 F MDH 35652 5.57 G Tpis 26972 5.55 H Upp 23862 5.29

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