壹、 磁奈米的製備
我們製備磁奈米，大腸桿菌以不同濃度之磁奈米處理 22 小時，然後收集其 分泌性蛋白質，一邊進行毒性測詴，一邊也同時進行二維蛋白質電泳分析，電泳 後的蛋白質電泳膠片由 PDQuest Advanced 8.0.1 進行分析。本實驗使用化學共沉 澱法製備磁奈米粒子之後，先進行乾燥後保存備用。但磁奈米粒子應該越快使用 越好，否則可能會逐漸產生氧化、變質的現象(Jain et al., 2010)(Sahoo et al., 2005)。
貳、 顯微鏡觀察
察到的(Schwegmann, Feitz, & Frimmel, 2010)。參、 磁奈米對大腸桿菌 BCRC 11509 的毒性
時，越有可能抑制大腸桿菌 BCRC11509 的生長。研究磁奈米對大腸桿菌的毒性的 文獻很少(Au et al., 2007)(Das et al., 2010)(Ensenauer, Hartl, Vockley, Roscher, &Fuchs, 2010)，在一份針對奈米材料的毒性研究報告上指出，根據 American National Standard ISO 10993-5 的 實 驗 要 求 ， 以 Hepatoma HepG2 及 fibroblast NIH3T3 細胞株為對象，發現磁奈米沒有顯著毒性及影響。(Das et al., 2010)。在 2010 年，德國科學家 Schwegmann 等人指出由於奈米鐵粒子的表 面電位(zeta potential)，造成對大腸桿菌的毒性。在 pH 值＝4，以 24 mg/l 奈米鐵氧化物處理的情況下，大腸桿菌（4.5 x 107 cells/mL) 只有 1%的生存率，
然而酵母菌不受到氧化鐵奈米粒子處理的影響。微生物表面氧化鐵奈米粒子覆蓋 範圍會顯示具有靜電相互作用力。較小的氧化鐵奈米粒子吸附並覆蓋大腸桿菌而 造成對大腸桿菌的毒性。(Schwegmann et al., 2010)
肆、 電穿孔對大腸桿菌 DH10B 的毒性
本實驗有使用原始菌液濃度的 10-4倍進行抹盤實驗，但是因為菌落生長實在 太快太濃密，以致很難準確冹斷菌落的數量，以致得到的實驗數據並不一致，也 和另外兩種稀釋濃度的實驗數值有很大的差異，故本實驗只採用原始菌液 10-5、 10-6倍的濃度的數據進行分析。這樣的現象在上一個實驗中測量磁奈米菌液對大 腸桿菌 BCRC11509 的濃度效應，以及本實驗中研究電穿孔方式對大腸桿菌 DH10B 的毒性測詴上，都有相同的結果，這表示菌液的濃度不可太濃，若抹盤後菌落生 長的數量達到上千個的時候，則很容易造成計算上的誤差。此實驗結果說明當 DH10B 菌受到磁奈米濃度＝100μg/ml 或是電穿孔的影響下，都可以促進菌的生 長，但有趣的是，當磁奈米濃度和電穿孔效應同時作用時，卻無法促進菌的生長，
反而會抑制菌的生長，此現象值得以後進一步的探討。
伍、 蛋白質定量
由於使用 BCA 作蛋白質定量時，隨著時間流逝，各定量的標準液之吸光值會 不停的上升，是因為蛋白質與不斷在反應，所以必須在最短時間內測量完畢，否 則每經過一段時間後，吸光值便不斷地會改變，則會造成很大的誤差，結果發現 若定量的時間花得越少，時間上也要馬上定量，不要延遲時，則蛋白質定量的結 果會比較穩定，準確度也較高。此外，由於蛋白質標準液在 569 nm 時皆有最大 的吸光值，於是進行蛋白質定量，並且和 562 nm 的吸光值做比較，發現不論是 那一種光波長，所得到的蛋白質定量的標準曲線皆可以相當準確，所以冺用 BCA 作蛋白質定量時，必須要動作快，最好在 5 分鐘之內全部測量完畢，而且不要延 遲到很久才開始測量，則測量結果都不會有太大的誤差。
陸、 磁奈米對大腸桿菌蛋白質表現的影響:一維蛋白質電泳分析
本實驗過程中發現，若蛋白質用新鮮配製的緩衝液進行溶解，效果較佳，同 時可避免蛋白質降解，也才能分析各蛋白質大致的分子量(王沛懿(2007))。
柒、 磁奈米對大腸桿菌蛋白質表現的影響:二維蛋白質電泳分析
一、奈米磁對大腸桿菌 BCRC NO.11509 蛋白質表現的影響
王沛懿在 2007 年時曾以大腸桿菌 BCRC11509 為材料，並運用生物資訊分析 工具及蛋白質體學技術，建立一個整合性藥物篩選開發平台。她以 Vk3、
Adriamycin、Cisplatin、Mitomycin C、Sodium butyrate、及 2-Aminopurine 等幾種 作用機制已被深入探究的藥物作為測詴標準物，分析藥物處理及對照組之二維蛋 白質電泳膠片。藉由質譜儀技術將膠片上之蛋白質點予以鑒定，也冺用二維影像 軟體進行全膠蛋白質定位，進而比較不同條件下蛋白質表現的差異 (王沛懿 (2007))。以她的實驗為基礎，本論文探討磁奈米對此大腸桿菌的毒性及蛋白質 體的影響，發現磁奈米對大腸桿菌的蛋白質體沒有顯著的影響，磁奈米濃度皆在 100μg/ml 以內，而 BCRC11509 蛋白質量的變化不大，皆在兩倍以內。Schwegmann et al.研究發現磁奈米在濃度＝24mg/l 時就會對細胞有毒性，且實驗條件分冸 在不同的酸鹼值之下(Schwegmann et al.,2010)。
二、 磁奈米&電穿孔實驗對大腸桿菌 DH10B 蛋白質表現的影響
(2005))(王沛懿(2007)) (江峰村(2002))。