結 果

一、 甘草癒合組織之誘導

將表面消毒過之葉片接種於含有 0.5 mg/L BA 及 1 mg/L 2,4-D 之 MS 固體培養基中，在黑暗下培養，經 30 天後，葉片漸漸變黑褐 色及捲曲，並由葉脈及葉片邊緣長出癒合組織（Fig. 6B），將誘導出 之黃綠色生長良好的癒合組織以原培養基繼代培養，以形成出更多的 癒合組織供本試驗探討各種不同因素影響之用。

將消毒過之甘草種子，接種於 MS 基礎鹽類培養基中，經 3 天後 即長出根，待 30 天後根系發展後（Fig. 6C），切取甘草無菌苗之根為 培殖體，培養於含有 0.5 mg/L BA 及 0.5 mg/L 2,4-D 之 MS 固體培 養基中，誘導培養 30 天後根部漸漸彭大且長出黃綠色癒合組織（Fig.

6D），根部癒合組織為本試驗探討不同培植體誘導出的癒合組織對其 成分 glycyrrhizin 上的差異。

二、 甘草癒合組織之培養

1. 光照對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織分別培養於黑暗與 2000 lux 光源處理 下，經培養 35 天後測其鮮重。結果顯示，在黑暗環境下培養，癒合 組織生長較好，其平均鮮重為 0.830 g，而在 2000 lux 的光源下培養，

癒合組織生長較差，其平均鮮重為 0.446 g，從外觀可見光照處理的 癒合組織呈現綠色（Table 1; Fig. 10）。

2. 不同基礎鹽類對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織培養於含不同基礎鹽類（MS_A、MS、

N6、WPM、B5）培養基中，經暗培養 35 天調查其平均鮮重，結果顯 示培養於 MSA及 MS 培養基之癒合組織生長較好，其平均鮮重分別 為 0.701 g 及 0.654 g，培養於 N₆及 WPM 培養基之癒合組織次之，其 平均鮮重分別為 0.465 g 及 0.460 g，而培養於 B5培養基之癒合組織則 較差，其平均鮮重為 0.373 g（Table 2; Fig. 11）。

3. MS 鹽類濃度對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織培養於含不同 MS 濃度（1/2MS、MS 及 2MS）培養基中，經暗培養 35 天調查其平均鮮重。結果顯示培養

於 MS 培養基之癒合組織生長較好，其平均鮮重為 0.804 g，培養於 2 MS 培養基之癒合組織次之，其平均鮮重為 0.607 g，而培養於 1/2 MS 培養基之癒合組織則較差，其平均鮮重為 0.497 g（Table 3; Fig. 12）。

4. 不同碳源對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織培養於含不同碳源（sucrose、glucose、

fructose、maltose）之培養基中，經暗培養 35 天測其平均鮮重，結果 顯示培養於含 3 % sucrose 及 3 % glucose 培養基之癒合組織生長較 好，其平均鮮重分別為 0.653 g 及 0.621 g，培養於含 3 % fructose 培 養基之癒合組織次之，其平均鮮重為 0.421 g，而培養於含 3 % maltose 培養基之癒合組織幾無生長，其平均鮮重為 0.158 g（Table 4; Fig. 13）。 5. 不同蔗糖濃度對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織培養於含不同蔗糖濃度（0 %、1 %、

3 %、6 % 及 9 %）培養基中，經暗培養 35 天調查其平均鮮重，結果 顯示培養於含 3%蔗糖培養基之癒合組織生長較好，其平均鮮重為 0.830 g，其次為培養於添加 6 %蔗糖培養基之癒合組織，平均鮮重為 0.761 g，培養於添加 1 %及 9 ﹪蔗糖培養基之癒合組織最差，平均鮮 重分別為 0.438 g 及 0.432 g，而對照組（未添加蔗糖）則幾乎沒有生 長，其平均鮮重為 0.136 g（Table 5; Fig. 14）。

6. 不同凝膠物對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織培養於含不同凝膠物（0.35 % gelrite、

0.9 % Difco agar 及 0.175 % gelrite + 0.45 % Difco agar）培養基中，經 暗培養 35 天測其平均鮮重。結果顯示培養於含 0.35 % gelrite 培養基 之癒合組織生長較好，其平均鮮重為 0.923 g，培養於含 0.175 % gelrite + 0.45 % Difco agar 培養基之癒合組織次之，其平均鮮重為 0.699 g，

而培養於含 0.9 % Difco agar 培養基之癒合組織生長較差，其平均鮮 重為 0.645 g（Table 6; Fig. 15）。

7. 不同 gelrite 濃度對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織培養於含不同 gelrite 濃度（0.3 %、0.35

% 及 0.4 %）培養基中，經暗培養 35 天調查其平均鮮重。結果顯示 培養於添加 0.3 %至 0.4 % gelrite 濃度之間培養基，其平均鮮重分別 為 0.908 g、0.985 g 及 0.917 g。可知甘草癒合組織培養於添加 0.3%至 0.4 % gelrite 濃度之間培養基並無顯著差異（Table 7; Fig. 16）。

8. 不同酸鹼度對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織培養於不同酸鹼度（pH 4.7、pH 5.7、

pH 6.7）培養基中，經暗培養 35 天後調查其平均鮮重。結果顯示酸 鹼度在 pH 5.7 培養基之癒合組織生長較好，其平均鮮重為 0.835 g，

在 pH 4.7 及 pH 6.7 培養基之癒合組織生長較差，其平均鮮重分別為 0.644 g 及 0.676 g（Table 8; Fig. 17）。

9. Auxins 類植物生長調節劑對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織繼代培養於含有不同 auxin 類（0.5 mg/l NAA、IAA 及 2,4-D）植物生長調節劑之培養基中，經暗培養 35 天 後調查其平均鮮重，結果顯示培養於 0.5 mg/l 2,4-D 之培養基生長較 好，平均鮮重約 0.782 g；培養於含 0.5 mg/l NAA 及 0.5 mg/l IAA 培 養基之癒合組織，其平均鮮重分別為 0.531 g 及 0.535 g（Table 9; Fig.

18）。

10. Cytokinins 類植物生長調節劑對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織繼代培養於含不同 cytokinins（0.5 mg/l BA、zeatin、kinetin 及 0.05 mg/l TDZ）之培養基中，經暗培養 35 天 後調查其平均鮮重。結果顯示培養於含 0.5 mg/l zeatin 及 0.5 mg/l BA 培養基之癒合組織生長較好，其平均鮮重分別為 1.047 g 及 0.986 g，

培養於含 0.05 mg/l TDZ 培養基之癒合組織次之，平均鮮重為 0.775 g，而培養於含 0.5 mg/l kinetin 培養基之癒合組織生長較差，其平均 鮮重為 0.494 g（Table 10; Fig. 19）。

11. 不同 2,4-D 濃度對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之癒合組織培養於含不同濃度 2,4-D（0、0.1、0.5、1.0 及 2.0 mg/l）之 MS 基本鹽類培養基中，經暗培養 35 天後調查其平均 鮮重。結果顯示培養於含 0.5 mg/l 2,4-D 培養基之癒合組織生長較好，

其平均鮮重為 1.058 g；培養於添加 1 mg/l 2,4-D 培養基之癒合組織次 之，其平均鮮重為 0.900 g，而培養於添加 0.1 mg/l 2,4-D 及 2.0 mg/l 2,4-D 培養基之癒合組織，其平均鮮重分別為 0.768 g 及 0.807 g（Table 11; Fig. 20）。

12. 不同 BA 濃度對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織培養於含不同濃度的 BA（0、0.1、0.5、

1.0 及 2.0 mg/l）之 MS 基本鹽類培養基中，經暗培養 35 天調查其平 均鮮重，結果顯示培養於含 0.5 mg/l 及 1.0 mg/l BA 培養基之癒合組

織生長較好，其平均鮮重分別為 0.954 g 及 0.968 g；而培養於含 0.0.1 mg/l 及 2.0 mg/l BA 培養基之癒合組織，生長較差，其平均鮮重分別 為 0.710 g 及 0.765 g；對照組（未添加 BA）之平均鮮重為 0.340 g（Table 12; Fig. 21）。

13. 不同椰子汁濃度對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織培養於含不同椰子汁濃度（0%、10%

及 20%）培養基中，經暗培養 35 天後調查其平均鮮重。結果顯示對 照組（未添加椰子汁）及添加 10%椰子汁培養基之癒合組織生長較 好，其平均鮮重分別為 0.759g 及 0.700g，培養於含 20%椰子汁培養 基之癒合組織生長最差，其平均鮮重為 0.570 g（Table 13; Fig. 22）。

14. 添加不同濃度的 casein hydrolysate 對甘草癒合組織生長之影響 將 100 mg 之 甘 草 癒 合 組 織 培 養 於 含 不 同 濃 度 的 casein hydrolysate（0 mg/l、250 mg/l、500 mg/l 及 750 mg/l）培養基中，經 暗培養 35 天後調查其平均鮮重。結果顯示添加 250 mg/l casein hydrolysate 培養基之癒合組織生長較好，其平均鮮重為 0.844g，對照 組 （ 未 添 加 casein hydrolysate ） 培 養 基 及 添 加 500 mg/l casein hydrolysate 培養基之癒合組織之癒合組織生長次之，其平均鮮重均為 0.791g，添加 750 mg/l casein hydrolysate 培養基之癒合組織生長最 差，其平均鮮重為 0.778g（Table 14; Fig. 23）。

15. 添加不同濃度的 peptone 對甘草癒合組織生長之影響

將 100 mg 之甘草癒合組織培養於含不同濃度的 peptone（0 g/l、

1 g/l、2 g/l 及 4 g/l）培養基中，經暗培養 35 天後調查其平均鮮重。

結果顯示對照組（未添加 peptone）培養基之癒合組織生長較好，其 平均鮮重為 0.691 g，添加 1 g/l peptone 培養基之癒合組織生長次之，

其平均鮮重為 0.608 g，培養於含 2 g/l 及 4 g/l peptone 培養基之癒合 組織生長最差，其平均鮮重分別為 0.516 g 及 0.399g（Table 15; Fig.

24）。

三、 不同甘草檢品之甘草酸含量

檢品經 HPLC 偵測 glycyrrhizin 含量。結果顯示甘草之野生品

（GUW）含量百分比達 2.45 %為最高，其次依序為市售甘草之科學 濃縮品（GUS）、台灣進口之原藥材（GUX）、甘草之台灣栽培品

（GUT）、甘草之栽培品（GUF）及市售甘草之飲片（GUM），其含

量百分比依序為 1.75 %、1.43 %、1.24 %、0.93 %及 0.77 %（Fig. 25）。 四、 甘草癒合組織成分之測定

1. 對在不同基礎鹽類培養下的甘草癒合組織作 glycyrrhizin 之測定 甘草癒合組織培養於含不同基礎鹽類（MSA、MS、N6、WPM、

B5）培養基中，觀察結果以 MS_A及 MS 培養基之癒合組織生長較好。

但對在不同基礎鹽類培養下的甘草癒合組織作 glycyrrhizin 之測定，

結果均未測定到含有 glycyrrhizin（Fig. 26）。

2. 對在不同碳源培養下的甘草癒合組織作 glycyrrhizin 之測定

甘草癒合組織培養於含不同碳源（sucrose、glucose、fructose、

maltose）之培養基中，觀察結果以培養於含 3 % sucrose 及 3 % glucose 培養基之癒合組織生長較好。但對在添加不同碳源培養下的的甘草癒 合組織作 glycyrrhizin 之測定，結果均未測定到含有 glycyrrhizin（Fig.

27）。

3. 對在不同酸鹼度之培養基培養下的甘草癒合組織作 glycyrrhizin 之 測定

甘草癒合組織培養於不同酸鹼度（pH 4.7、pH 5.7、pH 6.7）培養 基中，觀察結果以酸鹼度在 pH 5.7 培養基之癒合組織生長較好。但 對在不同酸鹼度之培養基培養下的甘草癒合組織作 glycyrrhizin 之測 定，結果均未測定到含有 glycyrrhizin 存在（Fig. 28）。

4. 對在不同 auxin 類植物生長調節劑培養下的甘草癒合組織作 glycyrrhizin 之測定

甘草癒合組織繼代培養於含有不同 auxin 類（0.5 mg/l NAA、IAA 及 2,4-D）植物生長調節劑之培養基中，觀察結果以培養於 0.5 mg/l 2,4-D 之培養基生長較好。但對在不同 auxin 類植物生長調節劑培養 下的甘草癒合組織作 glycyrrhizin 之測定，結果均未測定到含有 glycyrrhizin 存在（Fig. 29）。

5. 對在不同 cytokinin 類植物生長調節劑培養下的甘草癒合組織作 glycyrrhizin 之測定

甘草癒合組織繼代培養於含不同 cytokinin（0.5 mg/l BA、zeatin、

kinetin 及 0.05 mg/l TDZ）之培養基中，觀察結果以培養於含 0.5 mg/l zeatin 及 0.5 mg/l BA 培養基之癒合組織生長較好，但對在不同

cytokinin 類植物生長調節劑培養下的甘草癒合組織作 glycyrrhizin 之 測定，結果均未測定到含有 glycyrrhizin 存在（Fig. 30）。

6. 對添加不同椰子汁濃度培養下的甘草癒合組織作 glycyrrhizin 之測 定

甘草癒合組織培養於含不同椰子汁濃度（0%、10%及 20%）培 養基中，觀察結果以對照組（未添加椰子汁）及添加 10%椰子汁培養 基之癒合組織生長較好。但對添加不同椰子汁濃度培養下的甘草癒合 組織作 glycyrrhizin 之測定，結果均未測定到含有 glycyrrhizin 存在（Fig.

甘草癒合組織培養於含不同椰子汁濃度（0%、10%及 20%）培 養基中，觀察結果以對照組（未添加椰子汁）及添加 10%椰子汁培養 基之癒合組織生長較好。但對添加不同椰子汁濃度培養下的甘草癒合 組織作 glycyrrhizin 之測定，結果均未測定到含有 glycyrrhizin 存在（Fig.