討 論

一、 甘草癒合組織之誘導

植物組織培養常利用添加適量生長調節劑於培養基來誘導培植 體產生癒合組織，而成功與否，培植體來源具有相當重要的地位。1977 年 Murashige 指出選擇培殖體必須考慮取材部位、培植體大小、培植 體年齡及取材時間等因素⁽⁸⁴⁾。1982 年 Gu 將當歸（Angelica sinesis DIELS）的葉柄，接種於含有 2,4-D 的培養基上，成功的誘導出癒合組

織⁽¹⁶²⁾。1982 年 Noboru et al. 指出以 0.1 µM 2,4-D 可誘導 70 %柴胡之

嫩葉形成癒合組織，而相同濃度的 NAA 只有 20 %成功率⁽¹⁶³⁾。 然 而 單 一 種 類 生 長 調 節 劑 的 誘 導 方 式 不 一 定 是 最 好 的 ， auxin/cytokinin 比例變化的運用是植物組織培養常用的方法。 1957 年 Skoog and Miller 即藉著調節培養基中 auxin 與 cytokinin 之比 例，成功的誘導菸草癒合組織分化及植株再生；其後學者更進一步發 現 auxin / cytokinin 的比值，在高比率時，可促進根及癒合組織的形 成，而於低比率時，則可促進芽之分化⁽⁸⁰⁾。1995 年孟與賈指出 0.5 mg/l BA 與 2 mg/l 2,4-D 配合使用，可使秦九子葉及下胚軸的癒合組織誘 導率達到 100 ﹪⁽¹⁶⁴⁾。1998 年王等以丹參之嫩葉為培植體，培養於以 MS 為基本鹽類，添加 NAA、2,4-D 及 kinetin 之培養基中，成功的誘 導出癒合組織⁽¹⁶⁵⁾。本試驗以 MS 為基礎鹽類添加 1.0 mg/l 2,4-D 及 0.5 mg/l BA 之培養基，可順利誘導出甘草葉片之癒合組織；以 MS 為基 礎鹽類添加 0.5 mg/l 2,4-D 及 0.5 mg/l BA 之培養基，可誘導出無菌苗 根部之癒合組織。

二、 癒合組織之生長與繼代培養

癒合組織培養常於黑暗下培養，而少以光照培養，主要在於照光 的目的是生長與分化的一種刺激或誘導因素，並不是供給植物進行光 合作用產生養分。1984 年 George and Sherrington 指出使用適當的光 源培養，有助於植物的生長，但在誘導癒合組織時，一般多以不照光

較好⁽¹¹³⁾。1989 年 Nigra et al.指出暗處理對於 Solanum eleagnifalim 的

癒合組織生長良好，但光照對 solasodine 的生成較有利⁽¹⁶⁶⁾。本試驗 結果顯示，暗培養的甘草癒合組織生長較好，光照培養下的癒合組織 呈現綠色且有褐化現象。

常用的基礎培養基有 MS (Murashing and Skoog, 1962)、 White

(White’s, 1963)、 LS (Linsmaier and Skoog, 1965)、 B5 (Gamborg et al., 葉玄參 (Scrophularia yoahimurae) 的癒合組織生長較有利⁽¹⁶⁸⁾。醣類 主要功能為提供植物生長所需碳源及調節滲透壓，濃度太低可能造成 此添加的種類與濃度會影響植物生長結果。1989 年 Morimoto 指出，

提高 gellam gum 或 agarose 的濃度，雖然降低了 Croton sublyratiun 癒合組織的生長速率，但卻可以促進 phytosterol 的生成⁽¹⁷¹⁾。1997 年劉指出竹葉柴胡癒合組織在 0.9 % agar 濃度培養基培養中生長最好 Dendrobium aphyllum 及 D. moschatum 培養於 MS 基本培養基，添加

4.5µM(1ppm) TDZ 的濃度，可使一個芽體增殖為 36~40 個芽體⁽¹⁷⁵⁾。

椰子汁（coconut milk, CM）、水解酪蛋白（casein hydrolysate, CH）

及蛋白凍（peptone）為最常加入癒合組織生長培養基中的三種有機添 加物。1981 年 Kerbauy and Handro 發現於培養基中添加 15 % 椰子 汁，可使 Cattleya epidendrum 之未成熟胚發育成芽球⁽¹⁷⁶⁾。1982 年 Bajaja et al.指出花生之雜交培養中，培養基添加 CH 有助癒合組織

之產生⁽¹⁷⁷⁾。1995 年劉及張亦指出 500 mg/l CH 對西洋參之癒合組織

生長有促進的效果⁽¹⁷⁸⁾。2000 年吳指出添加（1,2,3,4 g/l）peptone 的培 養基有助於馬兜鈴癒合組織之生長⁽¹⁷⁹⁾。本試驗顯示添加椰子汁及 peptone 其濃度越高褐化情況越嚴重且不利生長，而添加 250 mg/l CH 有利於生長，但當其濃度越高褐化情況越明顯且不利生長。

deltoida 細胞形成 diosgenin⁽¹⁸²⁾。此與植物種類與成分不同，auxin 類 植物生長調節劑表現出不同的調節作用。1991 年張指出於台灣白芷 懸浮細胞培養基中加入不同的 cytokinin，發現以 BA 對 imperatorin 的生合成較有助益，其中以 1 mg/L BA 處理時所得含量最高⁽¹⁸³⁾。2002 年郭指出水解酪蛋白(casein hydrolysate, CH) 和椰子汁 (coconut milk,

(7)。

1999 年蔡指出添加（1,2,4 g/l）peptone 的培養基有助於 schizandrin

的生成⁽¹⁸⁴⁾。

1990 年 Hayashi et al.指出從光果甘草（Glycyrrhiza glabra.）細胞 懸浮培養的細胞中分離出與 18β-glycyrrhetinic acid 相似的兩種成 分，然而甘草中的主要成分 glycyrrhizin 未偵測到⁽¹⁸⁵⁾。2000 年 Wei Li 指出從光果甘草（Glycyrrhiza glabra.）毛狀根培養中產生高量的黃酮 類成分，但是在多數甘草品種中含有的 glycyrrhizin 並未偵測到⁽¹⁸⁶⁾。 本試驗結果與上述前人相似，甘草癒合組織以 HPLC 進行測定，沒有 glycyrrhizin 之成分。然而，從圖譜中觀察到有兩個波峰（peak A 與 peak B）其 UV 圖譜顯示可能為 saponins 類的成分，值得做更進一步 之研究與分析（Fig. 36）。