一、生理食鹽水對照組在第一至第五腰椎左、右兩側背角的 Fos 神 經細胞數
本研究福馬林疼痛刺激前共經過以下各種不同的處置過 程:(一)生理食鹽水對照組,(二)300、1000、3000 nM L-NAME 實驗組(300、1000、3000),(三)十倍、二十倍左右兩側電針 組(10 L、10 R、20 L、20 R),(四)十倍、二十倍左側電針加 300、1000 nM L-NAME 結合治療組(10L300、10L1000、20L300、
20L1000)等十二種不同之處置過程,各種參數變化甚大,為確 定本研究之正確性,我們先觀察生理食鹽水對照組之脊髓各層
(L1~L5)左右兩側 c-fos 量之變化情形,結果顯示:生理食鹽 水對照組左側(福馬林施打於左腳掌)表淺層(S)L4 及 L5 之 c-fos 量明顯高於 L1、L2 及 L3 各組,而且 L4 亦高於 L5,中間 層(NP)L4 及 L5 之 c-fos 量亦明顯高於 L1、L2 及 L3 各組,深 層(D)L4 之 c-fos 量明顯高於 L1、L2 及 L5 各組,而 L3 高於 L1 及 L2,L5 高於 L1;總量部分可見 L4 之 c-fos 量明顯高於 L1、
L2、L3 及 L5 各組,而 L3 及 L5 又高於 L1 及 L2。(如表十及圖 七)而右側部分無論是表淺層、中間層、深層或是總量 L1~L5 之間 c-fos 量皆無明顯差別,可見本實驗在各項操作手續上皆符 合標準。(如表十一及圖八)
二、不同劑量的一氧化氮合成酵素抑制劑(L-NAME)對福馬林測試 誘發之 c-fos 表現以及疼痛行為反應
在生理食鹽水控制組中,在注射福馬林腳同側的第四腰椎脊髓背 角可發現許多 Fos 標記的神經細胞(168 土 37 個 Fos 標記神經細胞/
每一片切片),在對側則很少。Fos 標記神經細胞的層區分布和過去我 們的研究差不多 149、150 ,大部分的 Fos 標記神經細胞分布在表淺層
superficial laminae 以及深層 deep laminae (分別佔了全部 Fos 標記 神經細胞數量的 30%以及 46%) ,在中間層的分布則較少。L-NAME (300,1000,3000 nM) 以劑量依賴的方式降低福馬林刺激後脊髓 Fos 標記神經細胞的總量 (各為生理食鹽水控制組之 74%,69%,
52%) 。L-NAME 對各層區的 Fos 標記神經細胞抑制也是呈劑量依 賴性的,依 300,1000,3000 nM L-NAME 的次序它們在各層區的 抑制效果分別是:表淺層 Superficial laminae 為生理食鹽水控制組的 75%, 67%,57%, 中間層 Nucleus proprius 為生理食鹽水控制組 的 67%,70%,50%,深層 Deep laminae 為生理食鹽水控制組的 77%,70%,51% 。L-NAME 對各層區的 c-Fos 標記神經細胞抑制 比較之下,所有劑量的 L-NAME 對表淺層、中間層以及深層 Fos 標 記神經細胞的抑制皆呈劑量依賴性之趨勢。(如表十二及圖九)
皮下注射 5% 福馬林產生兩個階段的疼痛行為模式 117。第一階 段(早期階段)在注射福馬林之後立刻發生,持續約 3-5 分鐘,之後約 有 10-15 分鐘動物安靜下來,幾乎沒有表現任何疼痛行為。第二階段 (晚期階段)約在注射 15-20 分鐘之後展開,並持續 20-40 分鐘左右。
L-NAME (300,1000,3000 nM )脊髓注射可以降低早期及晚期階段 福馬林疼痛反應。(如表十三及圖十、十一、十二)
三、不同強度電針對福馬林測試誘發之 c-fos 表現以及疼痛行為反應 依十倍強度電針刺激左側足三里 (簡稱 10 L) ,十倍強度電針刺 激右側足三里 (10 R) ,二十倍強度電針刺激左側足三里 (20 L) , 二 十倍強度電針刺激右側足三里 (20 R) 的順序亦分別降低了福馬林刺 激後第四腰椎脊髓背角 Fos 標記神經細胞的總量(各為生理食鹽水 控制組的 76%, 28%, 67%, 45%),不僅上述的電針刺激均能有效的降 低 Fos 的表現 (p<0.001 Scheff’s Test 事後檢定) ,且對側電針刺激 的抑致效果優於同側電針刺激 (10 L>10 R、20 R;20 L>10 R) 而十 倍電針強度與二十倍電針強度彼此間無明顯差異,而對各層區 Fos
標記神經細胞的抑制依 10 L,10 R,20 L,20 R 的順序分別為:表 淺層(S)為生理食鹽水控制組的 58%, 17%, 44%, 25%;中間層(NP)
為生理食鹽水控制組的 88%, 43%, 70%, 61%;深層(D)為生理食鹽 水控制組的 83%, 26%, 80%, 48%。(如表十四及圖十三)而皮下注射 5﹪福馬林的疼痛行為四組的電針刺激中早期階段以 10 L 及 20 L 較有疼痛的抑制效果 (p<0.01 Duncan’s Multipal Range Test) ;而晚期 階段則以 10 L 及 10 R 有較佳的疼痛抑制效果(p<0.05) 。(如表十 五及圖十四、十五、十六)
四、不同強度電針刺激與 L-NAME 結合的鎮痛研究
在生理食鹽水控制組中,在注射福馬林腳同側的第四腰椎脊髓背 角可發現許多 Fos 標記的神經細胞(168 土 37 個 Fos 標記神經細胞/
每一片切片),在對側則很少。大部分的 Fos 標記神經細胞分布在表 淺層 superficial laminae 以及深層 deep laminae (分別佔了全部 c-Fos, 標記神經細胞數量的 30%以及 46%) ,在中間層的分布則 較少。實驗組能有效的降低 Fos 的表現 (p<0.001 Scheff’s Test 事後 檢定) ,依 1000 nM L-NAME /0.9% 生理食鹽水 10μl 加十倍強度電 針刺激於左側足三里 (10L1000)、300 nM L-NAME/0.9% 生理食鹽 水 10μl 加十倍強度電針刺激於左側足三里(10L300)、1000 nM L-NAME/0.9% 生理食鹽水 10μl 加二十倍強度電針刺激於左側足三 里(20L1000)、300 nM L-NAME/0.9% 生理食鹽水 10μl 加二十倍強 度電針刺激於左側足三里(20L300),(10L1000、10L300、20L1000、
20L300)的順序分別降低福馬林刺激後第四腰椎脊髓背角 Fos 標記 神經細胞的總量 (各為生理食鹽水控制組之 36%、70%、28%、
49%) 。對各層區的 Fos 標記神經細胞抑制也大致符合此規律,依 10L1000、10L300、20L1000、20L300 的次序它們在各層區的抑制效 果分別是 : 表淺層(S) 為生理食鹽水控制組的 32%、46%、16%、
33%, 中間層(NP) 為生理食鹽水控制組的 46%、88%、43%、61%,
深層(D)為生理食鹽水控制組的 34%、75%、28%、52% 。對各層 區的 Fos 標記神經細胞抑制比較之下,所有劑量的 L-NAME 及電針 刺激對表淺層、中間層以及深層 Fos 標記神經細胞的抑制皆呈劑量 依賴性之趨勢。(如表十六及圖十七)。
L-NAME (300、1000 nM)脊髓注射加同側電針刺激足三里穴
(10L、20L)可以降低早期及晚期階段福馬林疼痛反應(p<0.01 Duncan’s Multipal Range Test)(如表十七及圖十八、十九、二十)。 五、10L 電針刺激與 L-NAME 結合的鎮痛研究
在生理食鹽水控制組中,在注射福馬林腳同側的第四腰椎脊髓背 角可發現許多 Fos 標記的神經細胞(168 土 37 個 Fos 標記神經細胞/
每一片切片),在對側則很少。大部分的 Fos 標記神經細胞分布在表 淺層 superficial laminae 以及深層 deep laminae (分別佔了全部 Fos 標記神經細胞數量的 30%以及 46%) ,在中間層的分布則較少。實 驗組能有效的降低 Fos 的表現 (p<0.001 Scheff’s Test 事後檢定) , 依十倍強度電針刺激於左側足三里 (10 L)、300 nM L-NAME/0.9%
生理食鹽水 10 μl 加十倍強度電針刺激於左側足三里(10L300)、
1000 nM L-NAME/0.9% 生理食鹽水 10 μl 加十倍強度電針刺激於 左側足三里(10L1000),(10L、10L300、10L1000)的順序分別降低福 馬林刺激後脊髓 Fos 標記神經細胞的總量 (各為生理食鹽水控制組 之 76%、70%、36%) 。對各層區的 Fos 標記神經細胞抑制也大致符 合此規律,依 10L、10L300、10L1000 的次序它們在各層區的抑制效 果分別是 : 表淺層(S) 為生理食鹽水控制組的 58%、46%、32%,
中間層(NP) 為生理食鹽水控制組的 88%、88%、46%,深層(D)
為生理食鹽水控制組的 83%、75%、34% 。對各層區的 Fos 標記神 經細胞抑制比較之下,所有劑量的 L-NAME 及電針刺激對表淺層、
中間層以及深層 Fos 標記神經細胞的抑制皆呈劑量依賴性之趨勢。
(如表十八及圖二十一)。
10L、10L300、10L1000 三組均可以降低早期及晚期階段福馬林 疼痛反應(p<0.01 Duncan’s Multipal Range Test),由於顫動、舔腳與加 權計分顯示之結果均頗一致,而加權計分為所有大鼠疼痛反應之總 合,更能全面代表大鼠之疼痛反應,故從本部分開始僅呈現加權計分 之結果(如表十九及圖二十二)。
六、20L 電針刺激與 L-NAME 結合的鎮痛研究
在生理食鹽水控制組中,在注射福馬林腳同側的第四腰椎脊髓背 角可發現許多 Fos 標記的神經細胞(168 土 37 個 Fos 標記神經細胞/
每一片切片),在對側則很少。大部分的 Fos 標記神經細胞分布在表 淺層 superficial laminae 以及深層 deep laminae (分別佔了全部 Fos 標記神經細胞數量的 30%以及 46%) ,在中間層的分布則較少。實 驗組能有效的降低 Fos 的表現 (p<0.001 Scheff’s Test 事後檢定) , 依二十倍強度電針刺激於左側足三里 (20L)、300 nM L-NAME/0.9%
生理食鹽水 10 μl 加二十倍強度電針刺激於左側足三里(20L300)、
1000 nM L-NAME/0.9% 生理食鹽水 10 μl 加二十倍強度電針刺激 於左側足三里(20L1000),(20L、20L300、20L1000)的順序分別降低 福馬林刺激後脊髓 Fos 標記神經細胞的總量 (各為生理食鹽水控制 組之 67%、49%、28%) 。對各層區的 Fos 標記神經細胞抑制也大致 符合此規律,依 20L、20L300、20L1000 的次序它們在各層區的抑制 效果分別是 : 表淺層(S) 為生理食鹽水控制組的 44%、33%、
16%, 中間層(NP) 為生理食鹽水控制組的 70%、61%、43%,深 層(D)為生理食鹽水控制組的 80%、52%、28% 。對各層區的 Fos 標記神經細胞抑制比較之下,所有劑量的 L-NAME 及電針刺激對表 淺層、中間層以及深層 Fos 標記神經細胞的抑制皆呈劑量依賴性之 趨勢。(如表二十及圖二十三)。
20L、20L300、20L1000 三組均可以降低早期及晚期階段福馬林 疼痛反應(p<0.01 Duncan’s Multipal Range Test)(如表二十一及圖二十
四)。
七、不同劑量的 L-NAME 及不同強度電針對福馬林測試誘發之 c-fos 表現以及疼痛行為反應
比較生理食鹽水對照組、十倍與二十倍強度電針刺激於左側足三 里組、十倍與二十倍強度電針刺激於右側足三里組、300 nM L-NAME 、1000 nM L-NAME 、3000 nM L-NAME 等八組福馬林疼 痛測試與 Fos 蛋白的表現。實驗組能有效的降低 Fos 的表現 (p<0.001 Scheff’s Test 事後檢定) ,依 10L、10R、20L、20R、300 nM、
1000 nM、3000 nM 的順序分別降低福馬林刺激後第四腰椎脊髓背角 Fos 標記神經細胞的總量 (各為生理食鹽水控制組之 76%、28%、
67%、45%、74%、69%、52%) 。其中 10R 和 20R 的 Fos 表現更明 顯低於 10L、300 nM 和 1000 nM 組;而 10R 組的 Fos 表現亦低於 20L 和 3000 nM 組。對各層區的 Fos 標記神經細胞抑制也大致符合此規 律,依 10L、10R、20L、20R、300 nM、1000 nM、3000 nM 的次序 它們在各層區的抑制效果分別是:表淺層(S) 為生理食鹽水控制組 的 58%、17%、44%、25%、75%、67%、56%, 中間層(NP) 為 生理食鹽水控制組的 88%、43%、70%、61%、67%、70%、50%,深 層(D)為生理食鹽水控制組的 83%、26%、80%、48%、77%、70%、
50%。(如表二十二及圖二十五)。
10L、20L、300 nM、1000 nM、3000 nM 等五組可以降低早期階 段福馬林疼痛反應(p<0.01 Duncan’s Multipal Range Test);10L、10R、
300 nM、1000 nM、3000 nM 等五組可以降低晚期階段福馬林疼痛反 應(p<0.01 Duncan’s Multipal Range Test)(如表二十三及圖二十六)。
八、比較左側十倍、二十倍電針組在第一至第五腰椎左側背角的 Fos 神經細胞數
左側十倍電針組在第一至第五腰椎左側背角的 Fos 神經細胞數
顯示:表淺層(S)L4 之 c-fos 量明顯高於 L1、L2、L3 及 L5 各組,
而 L5 亦高於 L1;中間層(NP)L4 之 c-fos 量亦明顯高於 L1、L2、
L3 及 L5 各組,而 L5 亦高於 L1 及 L2;深層(D)L3 及 L4 之 c-fos 量明顯高於 L1、L2 及 L5 各組;總量部分可見 L4 之 c-fos 量明顯高 於 L1、L2、L3 及 L5 各組,而 L3 又高於 L1 及 L2,L5 也高於 L1。
(如表二十四及圖二十七)
左側二十倍電針組在第一至第五腰椎左側背角的 Fos 神經細胞
左側二十倍電針組在第一至第五腰椎左側背角的 Fos 神經細胞