桂附八味丸培養 293 細胞基因表達上調和下降最多的 20 個基因，其中 3-4 個基因有顯著意義。Cytochrome oxidase V1b 向上調控線粒體內膜 上呼吸酵素-細胞色素氧化脢活性增加，增加線粒體 ATP 合成。
Mevalonate diphosphodecarboxylase(MDD) 調 控 酵 素 於 細 胞 Peroxisomes 內，促進合成酯醇和膽固醇。
Adenine phosphoribosyltransferase(APRT)此酵素缺乏的遺傳疾病，
大都將導致間質性慢性腎炎腎衰，有顯著臨床意義。
MAP kinase kina 在 cAMP 啟動蛋白激脢(PKA)，需要 MAPKK 參與調控細 胞核 DNA 增殖與分化。
中醫診斷腎的疾病，從經驗中分為兩個層面，由脈分左腎右命門、證分 腎陽虛和腎陰虛，生命之門-腎陽、命門火就如同線粒體能源的供應，
對於細胞身體生存那麼重要，腎陰涵蓋內分泌腺軸腎上腺、性腺、腎藏，
對於細胞身體生長發育居主導功能。由以上基因調控瞭解到桂附八味丸 治療之機轉。同時中西醫生理功能術語，在基因的解讀中腎陽命門火和 線粒體、腎陰和腎上腺及性腺得到串聯，命門與三焦清晰闡明了水分與 能量的產生、輸送和代謝。
DNA 微陣列分析基因表達層面，使用在中藥複方與証型研究才剛開始，
我們需要收集更多有效資料，包括找出新基因以及對基因功能正確及更 新的認識。
參 考 文 獻
1. 左言富:入世後中醫藥科技面臨的機遇、挑戰與對策.南京中醫藥大 學學報.2000;16(6):321-325
2. 王傳,陳可冀:中西結合臨床研究的思路與方法.中國中西結合雜 誌.2000.Feb;20(2):136-137.
3. 于 爾 辛 ： 中 西 醫 結 合 學 . 上 海 醫 科 大 學 出 版 社 . 第 一 版.1996:2-5,23-33.
4. 許建陽,李占平,李梅:關于中醫學現代化的思考.中國中醫基礎醫學 雜誌.2001;7(3):175-176.
5. Charlie C.Xiang, Yidong :c DNA Microarry technology and its applications.Biotechnology.Advances 2000;18:35-46.
6. Cynthia A. Afshari, Emile F. Nuwaysir, and J.Carl Barrett.:
Application of Complementary DNA Microarray Technology to Carcinogen Identification, Toxicology,and Drug Safety Evaluation.Prospectives in Cancer Research.1999;59:4759- 4760.
7. Javed K, LaoH.S,Michael LB, Yidong C,Jeffrey MT, Paul SM.:
Expression profiling in cancer using cDNA microarrays, Electrophoresis.1999;20:223-229.
8. Christine Debouck & Peter N. Goodfellow.:DNA microarrays, in drug discovery and development. Nature genetics supplement.1999;21:48-50.
9. Chistina A H, Carsten R and Jacques R.:Monitoring gene expression using DNA microarrays. Current Opinion in Microbiology.2000;3:285-291.
10. Nicole L.W.van H., Oscar V.,Adele M.M.L.van H., Esther J.
Kok, Ad Peijnenburg, Asaph A.,Arjen J.van T.,Jaap K: The
application of DNA microarrays in gene expression analysis.
J of Biotech.2001;78:271-280.
11. 嚴燦,吳偉康.李艷:從人類基因組計畫探討新世紀中醫藥發展之路.
中國中西醫結合學會 20 周年大會論文集.2001:140-141.
12. 錢彥方:加強臨床研究是中醫發展的內在動力.中國中醫基礎醫學雜 誌.2001;7(1):78-81.
13. 朱文鋒:辨証統一體系的創立.中國中醫基礎醫學雜誌.2001;7(4):
244-246.
14. 王忠,王階,王永炎:後基因組時代中醫証候組學研究的思考.中國中 西醫結合雜誌.2001;8(21):621-623.
15. 陳拱北預防醫學基金會 :公共衛生學. 巨流圖書公司:1997;第一 版:39.
16. 焦淑芳,喻紅:溫陽通腑降濁法治療慢性腎衰竭陽虛濁毒證療效觀察.
湖南中醫學院學報.2001;21(2):51-52.
17. 青姚.張志哲:腎陽虛患者血清甲狀腺激素水平變化及溫補腎陽的療 效觀察.深圳中西醫結合雜誌.2001;11(5):0271-0272.
18. 宋春風.馬洪駿.呂佩源.尹桂山:補腎中藥對腎陽虛大鼠垂體-睪丸 超微結構的影響.中醫藥研究.2001;17(4):45-46.
19. 宋春風.呂佩源.尹桂山:腎陽虛證的中西醫結合研究概況.中國中醫 基礎醫學雜志.2001;(7):556-559.
20. 劉旭光,宋開源,劉雨星,余曙光,魏焦祿:陰虛、陽虛模型大鼠體 溫晝夜節律參數差異的研究.中國中醫基礎醫學雜志. 2001;7(1):71 -73.
21. 趙偉康,周志東,金國琴:老年期腎陰陽虛損大鼠的線粒體能量代謝 及其調控机制的研究,中國中醫基礎醫學雜誌.2000;7(3):31-34.
22. 薛莎,湯學軍,馬威,馬利,管竟環,吳文莉,曹陽,李軍:右歸丸對家免
腎 陽 證 生 化 指 標 及 皮 質 醇 的 影 響 .JTCM 實 驗 研 究 2001;42(7):
434-437.
23. Taanman JW, Scharge C, Ponne NJ, Das AT, Bolhuis PA, de Vries H,Agsterrible E.:Isolation of cDNA encoding subunit VIb of cytochrome c oxidase and steady-state levels of coxVIb mRNA in different tissues.Gene1990;93(2):285-291.
24. Bonanno J B, Edo C, Eswar N, Pieper U, Romanowski MJ, Ilyin V, Gerchman SE, Kycia H, Studier FW, Sali A, Burly SK.:
Structural genomics of enzymes involved in sterol/isopre- noid biosynthesis.Proc Natl Acad Sci USA 2001;98(23):
12896-901.
25. Benedetto B, Madden R, kurbanov A, Braden G, Freeman J, Lipkowitz GS:Adenine phosphoriboxyltransferase deficiency and renal allograft dysfunction.Am J Kidney Dis 2001;37(5):
E37.
26. 戴新民.中醫診斷學.臺灣啟業書局有限公司.再版 1986:299-302.
27. 陳 華 . 中 醫 的 科 學 原 理 . 台 灣 商 務 印 書 館 . 第 一 版 1999: 67 -68,167,196-198.
28. 李東濤,田濟遠,王守海等:陽虛的內在實質研究回顧與展望.現代中 西醫結合雜誌.2000;9(13),1213-15.
29. 傅萬山,丁伯平,楊解人:六味地黃丸對甲亢型腎陰虛大鼠滋陰作用 的研究.中國實驗方劑學雜志.2001;7(5)16-18.
30. 王傳社,李順成:桂附八味丸和六味地黃丸延緩衰老機理的比較, 中 藥 藥 理 與 臨 床 研 究 進 展 , 北 京 軍 事 醫 學 科 學 出 版 社 . 第 四 冊 .19 96:193-201.
31. 余無言.金匱要略前義.文光圖書公司.第一版.1970:94.
32. 葉定江,張世臣,陳奇.中藥炮製學上海科學技術出版社.第一版.
1998:239
33. 曾立崑.本草新用途.人民軍醫出版社.第一版 1999:193-196.
34. Li-Li Hsiao, Robin L S, Robert L H, Steven RG.: Prospective use of DNA microarrays for evaluating renal function and disease. Current Opinion in Nephrology and Hypertension.
2000;9:253-258.
35. Robert E B, F J Montz. Human papilloma virus: Molecular biology and screening application in cervical neoplasia- a primer for primary care physicians. Prim care update Ob/Gyns.1998;5:238-246.
36. Alexander von G, Henritte S, Elke H, Hans E and Soren R. The genetics of enuresis: A Review. The Journal of Urology.2001;166: 2438-2443.
37. David AA, Kulkarni P, Iwao W, at all.:Future Molecular Approaches to the Diagnosis and Treatment of Glomerular Disease. Seminars in Nephrology 2000;20:20-31.
38. Julia YL, Alexander JL, Anna L, William HY, Mary SR, Jeffrey HM, Lydia MS, Alexander VL, and Keith LB.: Overexpression of chain-containing laminins in human glial tumors identified by gene microarray analysis. Cancer Reserch 20 01;61:5601-5610.
39. 趙學軍,李任先,郎建英.:論証的研究思路.中國中醫基礎醫學雜 誌.2001;7(6):401-402.
40. 李勁平,王培訓:基因蕊片在中醫藥研究中的應用.中醫雜誌 JTCM.
2001;12(42):750-75
41. 唐辰龍.中醫學.上海醫科大學出版社.第一版.1996:31.
42. 戴新民.腎的研究.臺灣啟業書局有限公司.再版 1986:2-10.
43. Josephine S, Modica-Napolitano and Keshav K S: Mitochondria as targets for detection and treatment of cancer.Expert reviews in molecular medicine 2002;Apr.(www.expertreviews.
org).
44. Gerald Karp. Cell and Molecular Biology: Concepts and Experiments. 2nd Edition.1999,USA,John Wiley ＆ Sons inco:
25,198-209；157-158,658-663,675-677；212-213；36.
45. Chen JJW, Wu R, Yan PC, Huang JY, Sher YP, Han MH, Kao WC, Lee PJ, Chiu TF, Chang F, Chu YW, Wu CW, Peck K: Profiling expression patterns and isolating differentially expressed genes by cDNA microarray system with colorimetry detection Genomics.1998;51:313-324.
46. Carrero-Valenzuela RD, Quan F, Lightowlers R, Kennaway NG, Litt M, Forte M.:Human cytochrome c oxidase subunit V1b:
characterization and mapping of a multigene family.Gene 1991 Jun;102(2):229-36.
47. Taanman J W, Scharge C, Bokma F, Reuvekamp P,Agsteribbe E, De Vries H.:Nucleotide sequence of the last exon of the gene for human cytochrome c oxidase subunit V1b and its flanking regions. Biochem Biophys Acta 1991 Jun;1089(2):283-5.
48. Ohtsu K, Nakazono M, Tsutsumi N, Hirai A.:Characterization and expression of the gene for cytochrome c oxidase subunit V1b(COX6b) from rice and Arabidopsis thaliana. Gene 2001 Feb;264(2):233-9.
49. 傅萬山,丁伯平,楊解人:六味地黃丸對甲亢型腎陰虛大鼠滋陰的研 究.中國實驗方劑學雜誌.2001;7(5):16-18.
50. 張建敏,黃克希:溫腎補陽法治療腫瘤的理論基礎與臨床運用.福建 中醫藥.2001;32(1):35-36.
51. 彭世橋,王耀獻:溫腎陽法治療消渴的源流及運用.河南中醫藥學 刊.2000;15(3):10-11.
52. Yang D, Shipman LW, Roessner CA, Scott AI, Sacchettini JC.
Structure of the methanococcus jannaschii mevalonate kinase - a member of the GHMP kinase superfamily. J Biol Chem 2001 Dec;(epub ahead of print)
53. Sakakura Y, Shimano H, Sone H, Takahashi H, Inoue N,Toyo- shima H,Suzuki S,Yamada N,Inoue K.:Sterol regulatory element- binding proteins induce an entire pathway of cholesterol synthesis. Biochem Biophys Res Commun 2001;286 (2):176-83.
54. Olivier LM, Krisans SK.:Peroxisomal protein targeting and identification of Peroxisomal targeting signals in cholesterol biosynthetic enzymes. Biochim Biophys Acta 2000;
1529(1-3):89-102.
55. Olivier LM, Kovacs W, Masuda K, Keller GA, Krisans SK.
Identification of Peroxisomal targeting signals in cholesterol biosynthetic enzymes. AA-CoA thiolase, hmg-coa synthase,MPPD,and FPP synthase.J Lipid Res 2000;41(12): 1 921-35.
56. 時振聲,時氏中醫腎臟病學.北京中國醫藥科技出版社.第一版.1997:
43-50.
57. 魏連波,葉任高,陳旭紅,李智軍,呂瑞和,欒圖:中西結合治療老年人 原 發 性 腎 病 綜 合 征 臨 床 觀 察 . 中 國 中 西 醫 結 合 雜 誌 .2000;
20(2):99-101.
58. Edvardsson V, Palsson R, Olafsson I, Hjaltadottir G, Laxdal T. Clinical features and genotype of adenine phosphoriboxyl transferase deficiency in Iceland. Am J Kidney Dis.2001;38 (5):473-80.
59. Kobayashi M, Goda M, Shimizu S.:Nitrilase catalyzes amide hydrolysis as well as nitrile hydrolysis. Biochem Biophys Res Commun.1999;255(2):549.
60. Kostic TS, Tomic M, Andric SA, Stojilkovic SS.: Calcium -independent and cAMP-dependent modulation of soluble guanylyl cyclase activity by G-protein-coupled receptors in pituitary cells. J Biol Chem.2002 Feb;(epub ahead of print) 61. Shell SA, Fix C, Olejniczak D, Gram-Humphrey N, Walker WH.
Regulation of cyclic adenosine 3',5'-monophosphate response binding protein(CREB) expression by Sp1 the mammalian testis.
Bio Reprod.2002 Mar;66(3):659-66.
Abstract
Objective: This research was to analyze gene expression of 293cell line cultured in
herbs by using DNA microarray to detect mRNA. Methods : The human embryonic kidney (HEK) cell line (293cell) cultured in two groups, 0.2mg/ml、0.5mg/ml and 1mg/ml of Liu Wei Di Huang Wan and Ba Wei Di Huang Wan. For this, mRNA from 293 cell cultured in DMEM was analyzed by DNA microarray. Analyses of 293cell mRNA by using Dr Peck Konan microarray. Results : To indicate that Cortex Cinnamomi and Radix Acconiti in Ba Wei Di Huang Wan modulated the expression of several genes. The gene expression revealed changes in 40 genes, up and down regulation each 20 genes, and found 3 significant up regulated genes
(Cytochrome oxidase V1b, Mevalonate diphosphodecarboxylase, Adenine phosphoribosyltransferase).
Conclusion : The kidney ying or yan deficiency is used to find in chronic renal insufficiency or renal failure. Many researches shows the kidney yan deficiency decreased in c-AMP, thyroxin, free T3 , cytochrome c oxidase in mitochondrial energy metabolism and increased c-GMP but ying deficiency is opposite. Our results revealed Ba Wei Di Huang Wan to effect at least 3 up regulated genes to modulated the effects to be compatible with the ATP synthesis in mitochondria, hormone changes in blood and correct the clinical pictures. Microarray
t e c h n o l o g y m a y p r o v i d e n e w u n d e r s t a n d i n g o f t h e f u n d a m e n t a l moleculobiological activity of how the Chinese hot herbs affect the development and function of individual cells and set up the gene expression patterns of the Chinese medical ying-yan theory after to induct animal study in the next step.
Key words: DNA microarray; Chinese herb; gene expression.
Mitochonrial energy metabolism.
縮寫與中英對照
縮寫 英文 中文 1.AC Adenylyl cyclase 腺甘環化脢
2.APRT Adenine phosphoribosyltransferase 腺甘磷酸核醣轉化脢 3.ATP Adenine triphosphate 腺甘三磷酸
4.ATPase Adenine triphosphatase 腺甘三磷酸脢 5.cAMP cyclic Adenosine monophosphate 環(腺)核甘酸 6.COX VIb Cytochrome oxidase V1b 細胞色素氧化脢 7.cGMP cyclic Guanine monophosphate 環鳥核甘酸 8.GBM Glomerular basement membrane 腎小球基底膜 9.LPO Lipid peroxidase 過氧化脂質
10.MAPK Mitogen-activated protein kinase 有絲原啟動蛋白激脢 11.MDD Mevalonate diphosphodecarboxylase M 雙磷酸脫羧脢 12.mRNA messenger ribonucleic acid 訊息核糖核酸
13.mt DNA mitochondrial deoxyribonucleic acid 線粒體去氧核糖核酸 14.PI(3)K phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase 磷脂肌醇 3 氫氧激脢 15.PKA protein kinase A 蛋白激脢 A
16.RTK Receptor tyrosine kinase 酪胺酸激脢接受器 17.RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction--反轉錄聚合脢聯鎖反應 18.SNP Single nucleotide polymorphism 單核甘酸多態性 19.SOD Superoxide dimutase 超氧化歧脢
20.TCA cycle Tricarboxylic acid cycle 檸檬酸環或三羧酸環
作者簡歷
學歷：私立中國醫藥學院中醫學系 59.9- 66.6 中國醫藥學院中西結合研究所 89.9-91.6 經歷：1)台北市立和平醫院實習醫師 65.7-66.6 2)空軍防砲少尉醫療組組長 67.3-68.8 3)台北市私立博仁綜合醫院外科住院醫師 68.8-69.2 4)台北市立中興醫院泌尿科住院醫師 69.2-72.5 5)台北縣三重縣立醫院外科主治醫師 72.5-73.5 6)台中市私立仁愛綜合醫院外科主治醫師 73.5-75.3 7) 台北縣陽德綜合醫院副院長 75.4-75.7 8)台中縣沙鹿童綜合醫院泌尿科主治醫師 75.8-76.7 9)台中市順天綜合醫院外科主任 76.8-85.7 10)台中市私立慈濟中醫診所主治醫師 85.7-88.2 11)台中市長祿中醫診所院長 88.3-88.5 12)台中市中國附設醫院中西合作醫療中心主治醫師 88.9-91.6 現任:嘉義大林慈濟綜合醫院中醫科主任 91.7
其它：1)66 年考試院中醫師檢覈考試及格 2)67 年考試院西醫師檢覈考試及格 3)72 年考試院公共衛生醫師特考及格 4)77-82 年台北榮民總醫院短期講習訓練 5)82 年度台中市優良醫師表揚
6)中國醫藥學院臨床兼任講師 7)中華民國泌尿科醫學會專科醫師 8)中華民國中西整合醫學會永久會員 9)中華民國針灸學會會員