我們起初對實驗中不同濃度桂附八味丸，探討培養 293 細胞影響，為何 濃度 0.2mg/ml 細胞生長情況最佳，而僅 2mg/ml 細胞就凋亡無法順利生 長感到疑惑，為何補益調養藥不如抗癌藥，後來在線粒體呼吸酵素基因 調控，其中所醞含深奧意義因而得到揭曉。應驗了內經素問陰陽應象大 論：「壯火食氣，少火生氣。」瞭解到肉桂性味：味辛甘，性『大熱、
有小毒』；附子性味：味甘辛，性『大熱、有毒』。更感佩經方用藥體認 之深、臨床觀察之細心，製劑用丸不用湯者：『丸者緩也、湯者蕩也』，
療效歷千年而不衰於此得到印證。
Cytochrome oxidase V1b(COXV1b)從人類骨骼肌基因庫解離出，由於 在不同組織如肝、骨骼肌、纖維母細胞和 MOLT 細胞之 COXV1b 基因，
其轉錄約 500 核甘酸 RNA，在北方吸乾實驗的單一雜交帶，所表達的都 呈穩定狀態，故推論本基因功能無組織特異性(23,46-48)。因此桂附八味丸 對於全身細胞，都能向上調控線粒體能量代謝，使位於線粒體內膜上呼 吸酵素複合物 IV，即細胞色素氧化脢活性增加，促進呼吸鏈複合物 V (ATPase)合成 ATP，增加身體細胞能源，達到腎陽虛主證“畏寒肢冷”之 治療目的。
中醫內經「陽虛則外寒，陰虛則內熱」：『陽虛』顯示致病機轉在細胞電 廠 ATP 合成不足-『線粒體功能低下-Hypomitochondrism.』，因此導致 細胞漿內環核甘酸(cAMP)下降。身體內橫紋肌所含線粒體最多(四肢軀 幹慢肌能源以線粒體為主而心肌線粒體佔胞漿一半以上)，肌肉產能嚴 重不足，臨床上即表現『外寒』。『陰虛』顯示細胞內葡萄糖、脂肪酸或 胺基酸不足，致『線粒體功能亢進-Hypermitochondrism.』，線粒體 ATP 合成增加送到胞漿內，透過細胞膜上腺甘環化脢(Adenylyl cyclase)生成
環腺核甘酸，因此陰虛者環腺核甘酸增加，肝臟為體內主要製造工廠且 含線粒體次多，因此臨症表現出『內熱』。臨床上糖尿病腎病變，雖然 血糖高甚至膽固醇、三酸甘油脂高，但是細胞膜上酪胺酸激脢接受器 (RTK)，缺乏胰島素啟動細胞內磷脂肌醇 3 氫氧激脢(PI3K)，無法啟動 細胞膜上葡萄糖輸送器(glucose transporter)增加，因此細胞內葡萄糖低、
甚至脂肪酸或胺基酸不足，故常見陰虛內熱證型，六味地黃丸治療糖尿 病陰虛內熱(49,44)，正合乎王冰所謂『益水之源，以制陽光。』
1979 鄺安 等 發表環腺核甘酸 cAMP 正常值 23.9±5.3Pmol/ml，範圍是 14.9∼39Pmol/ml，環鳥核甘酸 cGMP 正常值 6.2±2.2Pmol/ml，範圍是 1.2
∼9.6Pmol/ml； 1981 王明春 等 發 表環腺核甘酸男性正常值 25.01±
1.49Pmol/ml，女性正常值 22.36±2.0Pmol/ml。肝癌病人血中 cAMP 顯著 降低，cGMP 則顯著偏高，病程愈發展改變愈明顯，Granner 報告大鼠肝 癌中的 cAMP 含量僅正常肝細胞的 1/10。肺癌病人生存期發現和血中 cAMP 也有正相關，由於 cAMP 是細胞訊息傳遞第二信使，在細胞膜上腺 甘環化脢，接到細胞外第一信使荷爾蒙(增昇糖素、腎上腺素等)信息而 激活 cAMP，啟動蛋白激脢 PKA，在肝細胞分解肝糖為葡萄糖和抑制肝糖 合成，另外催化亞基和作用各異的調節亞基構成，催化亞基可使許多蛋 白質產生磷酸化反應，而調節亞基的 RⅠ和 RⅡ型，則分別調控細胞核 基因增殖與分化過程，二者功能的平衡是維持細胞正常生長與分化的前 提，RⅠ亞基的過度表達則細胞無限制生長，促細胞惡性轉化與癌腫形 成，桂附八味丸治療癌症陽虛時(50,51)，也許在調節 cAMP 降低所造成的失 衡，有助於細胞的良性分化，誠如王冰所謂『益火之源，以消陰翳。』
趙偉康等對老年大鼠肝線粒體能量代謝及其調控机制的研究(21)，在腎陰 虛組琥珀酸和 NADH 氧化脢下降，而細胞色素氧化脢活性升高，腎陽虛 組大鼠肝線粒體，琥珀酸和 NADH 氧化脢升高，細胞色素氧化脢活性下 降；而脂質代謝過氧化產物丙二醛(MDA)含量明顯高于腎陰虛組，因細
胞色素氧化脢活性下降，複合體Ⅲ還原態增高，易產生自身氧化呼吸鏈 電子傳遞溢出，估計氧化磷酸化呼吸鏈產能過程中，有 3-5%氧形成過 氧化氫而非水，氧自由基電子傳遞溢出，很容易造成線粒體 mtDNA 損 傷變異，線粒體 mtDNA 缺乏核 DNA 所具有的修補系統，因此線粒體 mtDNA 變異是核 DNA 的 10-16 倍以上(44)，易引起 mtDNA 片段缺失，由于 mtDNA 參與密碼呼吸鏈脢蛋白次單位的合成，如複合體 I 的 7 個次單位、複合 體Ⅳ的 13 個次單位和複合體Ⅴ的 2 個次單位，因此造成蛋白次單位合 成障礙，同時受精卵線粒體來自卵而非精虫，每個線粒體含許多複製 mtDNA，每個受精卵有幾千個線粒體，無法期待其複製均一致。在神經 肌肉細胞可能堆積了許多突變 mtDNA，推測可能是成年時期才發作常見 疾病，如巴金氏病(Parkinson’s)、阿茲海漠氏病(Alzheimer’s)、嫨廷 頓氏病(Huntington’s)之病因(44)。許多研究認為線粒體 mtDNA 損傷，
是細胞衰老和死亡的分子基礎，會使細胞正常功能線粒體數減少，細胞 能量不足從而發生一系列衰老變化，尤其 ATP 能量代謝旺盛的腦部和心 臟，首先出現功能衰退，形成衰老過程、自由基生成與線粒體損傷的惡 性循環。1969 杜克大學 Joe McCord 和 Irwin Fridovich 發現超氧化歧脢 (superoxide dimutase SOD) (44)，其唯一任務即破壞氧自由基，正常線粒 體氧化代謝才形成超氧化歧脢，腎陽虛呼吸鏈細胞色素氧化脢活性減 低，則超氧化歧脢形成下降。王傳社等實驗小鼠延緩衰老機理的比較
(30)，桂附八味丸增加超氧化歧脢活性、降低過氧化脂質(LPO)改善自由 基代謝、調整免疫功能、改善腎小球基底膜厚度(GBM)及間質炎症等，
抗衰老作用明顯優于六味地黃丸，中醫衰老腎虛特徵確為陰陽兩虛並存 但偏于陽虛，命門火衰。
Mevalonate diphosphodecarboxylase (MDD) 位於細胞 Peroxisomes 內，
在 肝 細 胞 促 進 Mevalonic acid 合 成 酯 醇 (sterol) 和 膽 固 醇 (cholesterol)，膽固醇和蛋白質、磷脂類、三酸甘油脂一起形成脂蛋
白，從血中送到睪丸或卵巢，合成男性賀爾蒙(Androsterone)睪丸酮 (Testosterone)或女性賀爾蒙(Estrone)、雌二醇(Estradiol)；在腎上 腺合成腎上腺皮質脂酮(Corticosterone)、皮質醇(cortisol)、可體松 (Cortisone)及醛固酮(Aldosterone)。提升腎陽虛血中低下性賀爾蒙、
腎上腺皮質激素和醛固酮，因而達到治療作用(24,52-55)。金匱要略“腎氣丸”
發揮了內經素問 “善補陽者，必於陰中求陽，則陽得陰助而生化無窮”
之醫理，以六味地黃丸滋養腎陰為基礎，僅用少量桂附以助腎陽，從基 因表達層面說明了，COXV1b 提升老年人線粒體能量代謝；MDD 加強皮 質激素和性荷爾蒙產生之機轉；生化層面上環核甘酸、性賀爾蒙、腎上 腺皮質激素和醛固酮得到了矯正；臨床證型層面上畏寒肢冷等腎陽虛症 狀獲得了改善，基因、生化與證型三者得到了串聯。
中醫對“腎”生理功能主生殖生長過程描述，最早見於內經素問上古天 真論：女子七歲腎氣盛，齒更髮長。二七而天癸至，任脈通，太衝脈盛，
月事以時下故有子。三七腎氣平均，故真牙生而長極。丈夫八歲腎氣實，
髮長齒更。二八腎氣盛，天癸至，精氣溢瀉，陰陽和故能有子。三八腎 氣平均，筋骨勁強，故真牙生而長極。五八腎氣衰，髮墮齒槁。七八、、、
腎臟衰，形體皆極。難經開始分左為腎，右為命門；“命門者，精神之 所舍也，原氣之所系也，男子以藏精，女子以系胞，其氣與腎通”。脈 經引＜脈法贊＞：腎與命門，俱出尺脈。宋 陳無擇：“左腎為腎藏，
其府膀胱；右腎為命門，其府三焦”。到明朝 虞搏認為兩腎固為真元 之根本，雖為水藏而實為相火寓乎其中，兩腎可總稱命門。張景岳認為：
命門居兩腎之中，即人身之太極，由太極以生兩儀，而水火具焉。基因 層面由 COXV1b 和 MDD 一起共同調控細胞能量、和內分泌腺軸腎上腺與 性腺，得以瞭解歷代醫家治療腎虛，其臨床體會分腎陽命門與腎陰深具 意義。而且兩千年前難經說：『生氣之原，十二經之根，腎間動氣，五 臟六腑之本，十二經脈之根，“呼吸之門”， “三焦之原”』，說明了命
門“呼吸之門”，為線粒體 COXV1b 掌控細胞色素氧化脢，促進氧氣接受 電子生成水，即三焦水及輸送水所需能量 ATP 的“源頭”。內經素問所謂:
『三焦者，決瀆之官，水道出焉。』內經靈樞：『腎合三焦膀胱，三焦 膀胱者，腠裡毫毛其應。』『元氣走三焦，肓膜腠裡。』說明了三焦輸 送線粒體能量代謝產生的水分，經“線粒體膜和細胞膜”到組織液，進入 淋巴血液循環(上中下三焦)，由腎膀胱排出。宋 陳無擇：左腎為腎藏，
其府膀胱；右腎為命門，其府三焦，臟者藏也，府者受納傳輸、瀉而不 藏。難經又說：『三焦者，原氣之別使也，主通行三氣，經歷於五臟六 腑』。說明水分輸送的同時攜帶了能源 ATP，驚嘆其生理功能描述如此 週全，「水分代謝」透過如此綿密細緻的機制，與環環相扣的途徑，這 就是臨床上糖尿病腎病變水腫或肝硬化腹水，西醫利尿劑無效時，中醫 臨床使用溫陽宣肺氣、疏通腠裡行皮裡膜外，益氣健脾鞏固療效，發揮 利水消腫的效果。(56,57)
Adenine phosphoribosyltransferase(APRT)腺甘磷酸核醣轉化脢，目 前冰島、美國報導此酵素缺乏家族遺傳疾病，大都將導致慢性腎炎腎 衰，甚至換腎後亦同樣發生間質性腎炎，腺甘磷酸核醣轉化脢和中醫腎 氣、慢性腎炎腎衰關係有待研究。(25,58)
Nitrilase 1：此酵素鍵解 nitrile 形成酸和銨(ammonium)，亦催化醯胺 (amide)水解成酸和銨，代謝關係有待研究。(59)
MAP kinase kinase(MAPKK)：cAMP 啟動蛋白激脢(PKA)，需要 MAPKK 參與傳訊到 MAPK，再啟動細胞核基因轉錄，調控細胞核 DNA 增殖與分 化。(60,61)
Caspase 10,apoptosis-related cysteine protease 293 細胞培養，為何濃度 0.2mg/ml 細胞生長情況最佳，而僅 2mg/ml 細胞就凋亡，中藥濃度及培 養時間 48 小時、24 小時或 12 小時，影響細胞生長與凋亡，是否和本基 因表達程度相關，有待進一步研究。
肉桂作用：能助腎中陽氣（命門之火）並能納氣歸腎，引火歸元；附子 主治：亡陽欲脫、命門火衰，溫補命門之主帥、回陽救逆之要藥。因此 肉桂附子何種成分調控線粒體能量代謝，使位於線粒體內膜上呼吸酵素 細胞色素氧化脢活性增加。而且這些有意義基因需再作 RT-PCR，確認 其基因功能及 mRNA 表達量，是下一步必須研究的課題。DNA 微陣列分析
肉桂作用：能助腎中陽氣（命門之火）並能納氣歸腎，引火歸元；附子 主治：亡陽欲脫、命門火衰，溫補命門之主帥、回陽救逆之要藥。因此 肉桂附子何種成分調控線粒體能量代謝，使位於線粒體內膜上呼吸酵素 細胞色素氧化脢活性增加。而且這些有意義基因需再作 RT-PCR，確認 其基因功能及 mRNA 表達量，是下一步必須研究的課題。DNA 微陣列分析