脂肪肝生物指標—血漿 DPP4 含量

DPP4 是會隨著肝臟傷害而被分泌至血漿的蛋白質，其在血漿中的濃度 會與雞隻脂肪肝的嚴重程度呈正相關，因而適合作為預判脂肪肝的生物標 記。圖二十呈現五個處理組在 12 週處理後及 20 週處理後兩次犧牲時間點的 血漿 DPP4 濃度，其中，圖二十 A 的結果中，可以看到靈芝 0.5%組及靈芝 1%組的血漿 DPP4 濃度顯著低於控制組，表示在此兩種處理下的日本鵪 鶉，肝臟中堆積脂肪的程度較控制組輕微。但拉長處理時間至 20 週，控制 組及其餘 4 種處理組之間的血漿 DPP4 濃度並無統計上的差異，顯示在 20 週處理後，控制組與其餘飼糧處理組間在肝臟的脂肪蓄積量上並無明顯不 同。

總結而言，從以上結果可以推測：添加 0.5%及 1%的靈芝於日常飼糧中 並餵飼 14 週齡的日本鵪鶉 12 週後，脂肪肝的嚴重程度獲得改善，但處理時 間繼續拉長，則改善的效益將會減弱，所以在 20 週處理後並無法看到添加 蟲草或靈芝有降低日本鵪鶉脂肪肝程度的效果。

圖二十、飼糧中不同濃度的北蟲草及靈芝對 14 週齡日本鵪鶉在血漿 DPP4 濃度上的影響。

(A)飼糧處理 12 週後。(B) 飼糧處理 20 週後。

Figure 19. Plasma DPP4 concentration of 14-week-old Japanese quails in response to different concentration of C. militaris and G.lucidum included in daily diet. (A) after 12-week-treated and (B) after 12-12-week-treated . n=6. Mean ± S.E.M. *P<0.05 vs. control.

2.5 12 週處理下的肝臟組織 H&E 染色結果及油紅染色結果

從以上結果可以做出以下推測：於飼糧中添加 1%北蟲草並餵飼 12 週 後，對 14 週齡的日本鵪鶉在肝臟脂質堆積狀況並未出現明顯影響。但在低 濃度的靈芝(0.5%及 1%)處理 12 週後，可以改善 14 週齡日本鵪鶉因動情素 影響而生成的天然性脂肪肝，然而，在 12 週的高濃度靈芝(2%)處理下，14 週齡的日本鵪鶉肝臟內反而有更嚴重的脂質堆積發生。

肝臟組織切片的染色結果可以最直接地呈現不同飼糧處理對肝臟生理造 成的影響與變化，但後續也還需要透過統計上的定量分析，讓結果更具說服 力道。因此，為了支持 H&E 染色所呈現的結果，而對肝臟中的三酸甘油酯 含量(圖二十三)進行檢測。另外，油紅染色的結果也使用圖像軟體(Image J) 進行染色區域的定量，並以控制組為基準，比較相對染色區域的大小(圖二 十四)。

圖二十一、14週齡日本鵪鶉在北蟲草及不同濃度的靈芝處理12週後其肝臟切片經H&E染色的結果。 (A)控制組。(B) 北蟲草1%組。(C)靈芝0.5%組。(D)靈芝1%組。(E)靈芝2%組。 Figure 21. H&E staining of liver of 14-week-old Japanese quails in response to different concentration of C. militaris and G.lucidum added in daily diet after 12-week-treated. (A) control group (B) C. militaris 1% group (C)G.lucidum 0.5% group (D) G.lucidum 1% group and (E) G.lucidum 2% group.

(放大倍率200x)

圖二十二、14週齡日本鵪鶉在北蟲草及不同濃度的靈芝處理12週後其肝臟切片經油紅染色的結果。 (A)控制組。(B) 北蟲草1%組。(C)靈芝0.5%組。(D)靈芝1%組。(E)靈芝2%組。 Figure 22. Oil red O staining of liver of 14-week-old Japanese quails in response to different concentration of C. militaris and G.lucidum added in daily diet after 12-week-treated. (A) control group (B) C. militaris 1% group (C)G.lucidum 0.5% group (D) G.lucidum 1% group and (E) G.lucidum 2% group.

(放大倍率200x)

2.6 12 週處理下的肝臟三酸甘油酯(TAG)含量結果及油紅染色定量結果 在肝臟 TAG 的含量檢測(圖二十三 A)中可以看到支持上述肝臟組織切 片經 H&E 染色後呈現的趨勢：首先，北蟲草 1%組的肝臟 TAG 含量與控制 組間並無統計上的差異。接著，靈芝 1%組的肝臟 TAG 含量明顯低於控制 組；但靈芝 2%組的肝臟 TAG 含量顯著地高於控制組。最後，雖然沒有與控 制組間達到統計上的差異，但仍可見靈芝 0.5%組有較低的肝臟 TAG 含量。

另一方面，在油紅染色的定量結果(圖二十三 B)中，可以看到以下趨 勢：首先，北蟲草 1%組的油紅染色範圍經統計上的分析後，與控制組間並 無差異。接著，靈芝 0.5%組及靈芝 1%組的染色區域雖未與控制組間達到顯 著差異，但仍呈現較少的染色面積。最後，從結果中可以確定靈芝 2%組的 油紅染色區域顯著多於控制組。以上結果，可為前文中對肝臟切片形態的相 關分析，提供明確的統計數據。

圖二十三、飼糧中不同濃度的北蟲草及靈芝在 12 週處理下對 14 週齡日本鵪鶉在肝臟脂質 堆積程度的影響。(A)肝臟內三酸甘油酯含量。(B)油紅染色定量結果

(A)飼糧處理 12 週後。(B) 飼糧處理 20 週後。

Figure 23. The level of hepatic lipid accumulation of 14-week-old Japanese quails in response to different concentration of C. militaris and G.lucidum included in daily diet.

after 12-week-treated. (A) hepatic triacylglycerol content and (B) the quantification of oil red O staining area. n=12. Mean ± S.E.M. *P<0.05 vs. control.

2.7 20 週處理下的肝臟組織 H&E 染色結果及油紅染色結果 (Gano 0.5%)及靈芝 2%組(Gano 2%)的油紅染色區域不亞於控制組；不過在 北蟲草 1%組及靈芝 1%組中可以看到其油紅染色面積少於控制組。

整體而言，14 週齡的日本鵪鶉在五種飼糧處理 20 週後，其肝臟中脂質 堆積的狀態，在 H&E 染色及油紅染色的結果中，可以看到相似的趨勢，而 以下則針對上述分析，以肝臟三酸甘油酯含量檢測結果及油紅染色定量結果 進行輔助說明。

2.8 20 週處理下的肝臟三酸甘油酯(TAG)含量結果及油紅染色定量結果

圖二十四、14週齡日本鵪鶉在北蟲草及不同濃度的靈芝處理20週後其肝臟切片經H&E染色的結果。 (A)控制組。(B) 北蟲草1%組。(C)靈芝0.5%組。(D)靈芝1%組。(E)靈芝2%組。 Figure 24. H&E staining of liver of 14-week-old Japanese quails in response to different concentration of C. militaris and G.lucidum added in daily diet after 20-week-treated. (A) control group (B) C. militaris 1% group (C)G.lucidum 0.5% group (D) G.lucidum 1% group and (E) G.lucidum 2% group.

(放大倍率200x)

圖二十五、14週齡日本鵪鶉在北蟲草及不同濃度的靈芝處理20週後其肝臟切片經油紅染色的結果。 (A)控制組。(B) 北蟲草1%組。(C)靈芝0.5%組。(D)靈芝1%組。(E)靈芝2%組。 Figure 25. Oil red O staining of liver of 14-week-old Japanese quails in response to different concentration of C. militaris and G.lucidum added in daily diet after 20-week-treated. (A) control group (B) C. militaris 1% group (C)G.lucidum 0.5% group (D) G.lucidum 1% group and (E) G.lucidum 2% group.

(放大倍率200x)

圖二十六、飼糧中不同濃度的北蟲草及靈芝在 20 週處理下對 14 週齡日本鵪鶉 在肝臟脂質堆積程度的影響。(A)肝臟內三酸甘油酯含量。

(B)油紅染色定量結果

(A)飼糧處理 12 週後。(B) 飼糧處理 20 週後。

Figure 26. The level of hepatic lipid accumuation of 14-week-old Japanese quails in response to different concentration of C. militaris and G.lucidum included in daily diet.

after 20-week-treated. (A) hepatic triacylglycerol content and (B) the quantification of oil red O staining area. n=12. Mean ± S.E.M. *P<0.05 vs. control.