目前許多證據指出阿茲海默氏症與氧化壓力及粒線體功能失調 導致的細胞凋亡相關(Picone et al., 2014)。而 Aβ 胜肽引發自由基及氧 化壓力傷害，會加速神經脂質過氧化、蛋白質氧化、DNA 氧化等，
進一步誘發阿茲海默氏症(Butterfield, 1997; Butterfield et al., 2001, 2007)。甘草查爾酮 A 能促進粒線體新生及降低氧化壓力(Chen et al., 2014) ，而 香 豆 素 亦具 抗氧化 功能 及抑制乙醯膽鹼脂酶活性能 力 (Kontogiorgis et al., 2007; Anand et al., 2012)。因此，透過甘草查爾酮
A、香豆素及其衍生物來降低 Aβ 聚集對神經細胞的毒性，將或許是
預防及治療阿茲海默氏症的新策略。
在細胞實驗部分，利用Aβ 蛋白連接一段 Linker 後再連接 GFP，
其Aβ 蛋白摺疊會藉由 Linker 影響 GFP 之構形(Waldo et al., 1999)，
使 Aβ-GFP 螢光亮度受到 Aβ 胜肽的折疊與溶解度影響，因此當 Aβ 蛋白錯誤摺疊或聚集時，將導致 Linker 後的 GFP 蛋白也錯誤折疊而 降低螢光亮度。Aβ-GFP 在細菌細胞誘導表現後，藉分析細胞螢光亮 度是否增加，來檢測此化合物是否有助於Aβ 蛋白正常折疊(Kim et al.,
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2006)。先前本實驗室已建構 Aβ-GFP 重組質體以及可添加多西環素 (Doxycycline)誘導表現 Aβ-GFP 的 Tet-On 293/SH-SY5Y 細胞平台(黃 鉦翔, 2012)。本研究先以 DPPH 測試了解化合物捕捉自由基(Free radical)之能力，並利用 Thioflavin T 螢光分析探討化合物降低 Aβ 聚 集的功效。其次利用誘導表現 Aβ-GFP 的 293 細胞，透過化合物前處 理後分析細胞螢光亮度，檢測化合物是否能達到降低胞內活性氧化物 含量、細胞內凋亡蛋白酶-3 (Caspase-3)活性等功效，並進一步使用表 現Aβ-GFP 的 SH-SY5Y 細胞分析神經軸突生長(Neurite outgrowth)情 形、細胞內凋亡蛋白酶-3 蛋白表現量及細胞內乙醯膽鹼脂酶活性，確 認化合物是否具有神經保護作用。最後使用西方轉漬法(Western blotting)揭示化合物作用之訊息傳遞途徑。由於薑黃素(Curcumin) (圖 一 D)為已知有潛能的 Aβ 聚集抑制物(Zhao et al., 2012)，本研究以薑 黃素處理作為實驗正控制組。
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貳、 研究目的
先前實驗室已建構可誘導表現 Aβ-GFP 的 Tet-On 293/SH-SY5Y 細胞平台，進一步檢測順天堂中草藥水萃物時，發現脹果甘草及活性 成分甘草查爾酮 A 前處理可增強 Aβ-GFP 的螢光通量。由於甘草查爾 酮 A 的 IC50細胞毒性較高，尚有改善的空間，因此本實驗室與本校 化學系林文偉老師實驗室合作，合成甘草查爾酮 A 衍生物：LM-004、
LM-006、LM-026，及以查爾酮及香豆素為基底之衍生物：LM-016、
LM-031。本研究將透過 DPPH 自由基檢測及 Thioflavin T 螢光分析等 體外實驗，分析甘草查爾酮 A、香豆素及其衍生物等化合物捕捉自由 基及降低Aβ 聚集的功效，並透過 Tet-On 293/SH-SY5Y Aβ 聚集細胞 平台，藉由測試上述化合物前處理後，Aβ-GFP 螢光通量、細胞內活 性氧化物含量、細胞內凋亡蛋白酶-3 活性/蛋白表現量、神經突生長、
乙醯膽鹼脂酶活性等，來評估上述化合物，是否能幫助Aβ 摺疊、降
低Aβ 聚集引發的活性氧化物及細胞凋亡、抑制乙醯膽鹼脂酶活性及
促進神經突生長等。除此之外，本研究亦利用蛋白表現分析以揭示上 述化合物所調控之訊息傳遞途徑。本研究預期甘草查爾酮 A、香豆素
及其衍生物能減緩Aβ 聚集，提供臨床上治療阿茲海默氏症的新的參
考策略。
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