第三章 材料與方法
第五節、 血液檢測
一、基本血液生化值與荷爾蒙分析項目與方法
於實驗第0 週及第 6 週及一年後，收集空腹靜脈血液。於實驗前 一天晚間十二點以後禁食，採樣於早上八點進行，檢驗生化值包括血 糖、血脂值如：血清總膽固醇、三酸甘油酯、低密度脂蛋白膽固醇以 及高密度脂蛋白膽固醇，肝功能如 GOT、GPT 等以及禁食脂泌素，
胰島素。血漿脂泌素的測定以 ELISA 法測量，以 HOMA-IR 測量胰 島素抗性。
二、血脂質分析
血脂值分析：血清總膽固醇、三酸甘油酯、低密度脂蛋白膽固醇 以及高密度脂蛋白膽固醇，以市售試劑套組利用自動分析儀進行分析 其測定方法如下：
（1）三酸甘油酯
利用酵素法（GOD/PAP）分析，取 10μL 血清加入 1000μL 三酸 甘油酯試劑，37℃水浴 5 分鐘，使酵素水解血清中的三酸甘油酯，最 後使用分光光度計於波長 500nm 下測定，與標準品比對，經計算後 可得三酸甘油酯的濃度。
（2）血清膽固醇
採用enzymatic colorimetric method，取 10μL 血清加入 1000μL 膽 固醇試劑，37℃水浴 5 分鐘，以膽固醇脂解酶將膽固醇脂水解分解成 為膽固醇及游離脂肪酸，再以膽固醇氧化酵素氧化產生過氧化氫，在 經由過氧化酵素催化下作用，可產生紅色化合物，在 500nm 波長下 測定吸光度，與標準品比對，經計算後可得血清膽固醇的濃度。
（3）血清高密度脂蛋白膽固醇
利用酵素作用及比色測定之原理，先取定量的血清加入適當的沉 澱劑，將乳糜微粒、極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白沉澱，在 500nm 波長下測定吸光度，與標準品比對，經計算後可得高密度脂蛋白膽固 醇的濃度。
（4）低密度脂蛋白膽固醇
以酵素呈色直接法測定低密度脂蛋白，使用日本第一化學藥品公 司產品，利用自動分析儀測量。
三、肝臟功能分析
肝臟檢測血清中麩胺酸草醯乙酸轉胺酶（Glutamate oxaloacetate transaminase, GOT）和麩胺酸丙酮酸酸轉胺酶（Glutamate pyruvate transaminase, GPT）。
（1）麩胺酸草醯乙酸轉胺酶（Glutamate oxaloacetate transaminase,
GOT）
天門冬胺酸轉胺酶利用酵素率法（Enzymatic rate method）分析。
這 個 反 應 中 天 門 冬 胺 酸 轉 胺 酶 催 化 可 逆 反 應 將 L-asparate 與 α-ketoglutarate 轉成 oxaloacetate 和 L- glutamate，而 oxaloacetate 與 NADH+H+在 malate dehydrogenase（MDH）之氧化作用下形成 malate 和NAD +，檢體與試劑的比例是1：11，再利用分光光度計分析，NADH 在 340nm 有較高的吸光值，經酵素轉變成 NAD +後其吸光值降低在 340nm 波長下，測定吸光值降低速度，即可算出天門冬胺酸轉胺酶的 活性。
（2）麩胺酸丙酮酸轉胺酶（Glutamate pyruvate transaminase, GPT）
丙酮酸轉胺酶是利用動力學速率法（kinetic rate method）分析。
這 個 反 應 中 丙 酮 酸 轉 胺 酶 催 化 可 逆 轉 胺 反 應 將 L-alanin 與 α-ketoglutarate 轉成 pyruvate 和 L- glutamate，而 pyruvate 與 NADH+H+ 在lactate dehydrogenase（LDH）之氧化作用下形成 lactate 和 NAD +。 檢體與試劑的比例是1：11，再利用分光光度計分析，NADH 在 340nm 有較高的吸光值，經酵素轉變成 NAD +後其吸光值降低，在 340nm 波長下，測定吸光值降低速度，即可算出麩胺酸丙酮酸轉胺酶的活性。
四、血糖
利 用 RANDOX glucose Kit （ GOD/PAP ） 分 析 原 理 ， 是 利 用 D-glucose 與 glucose oxidase（GOD）反應後會產生 H2O2，在 peroxidase
（POD）催化下 H2O2會與 4-amonophenazone+phenol 反應呈紅色產 物，在利用分光光度計在 500nm 的波長下，與標準溶液的吸光度對 照，可測得葡萄糖濃度。
五、胰島素
利用 Coat-A-Cout Insulin 試劑來分析，並且使用放射性免疫法
（RIA）定量。標示 1 管 12×75 ㎜ uncoated total counts tube 和 1 管 12×75 ㎜ uncoated NSB tube。標示 14 管 insulin Ab-Coated tubes standard A 至 G。6 管 control 和 patient sample 吸取 200μL 的 standard、
control 以及 patient sample 至各管中加入 1mL 125I-insulin 至各管中，
震盪均勻。在室溫下（15-28℃），培育 22 小時，除了 total 管外，其 他各管移去上清液。倒乾後，放入 gamma couter 內測試 1 分鐘，紀 錄測試值。
六、脂泌素
ELISA 法檢驗(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)利用抗原與 抗體結合的專一性，加上酵素的呈色反應，來顯示特定蛋白質是否存 在。檢測時，先將待測檢體固定在介面上（非專一性的結合），加入 利用對脂泌素具專一性的抗體捕捉脂泌素，再加入酵素連結抗體與對 脂泌素具專一性的抗體結合，然後加入酵素的受質（substrate），經 過一段時間的作用，酵素會催化受質反應而呈現顏色或產生螢光，最 後在介面上特定位置若有呈色或螢光保留，即表示有脂泌素存在。
第六節、統計方法
實驗之結果以SAS 統計軟體進行分析，以 Paired t - test 比較減重 前後脂泌素、體重、體脂重、體脂率及血液檢測值與一年後體重復胖 差 異 ； 並 以 Pearson correlation coefficient ， Spearman rank order correlation 分析脂泌素與體重、體脂重、體脂率間之相關性。以御廚 皇軟體，Paired t - test 統計減重一年前及一年後之飲食變化；以 Paired t - test 比較一年前及一年後之食物狀況及身體活動狀況變化。所有數 值以Mean± SD，所有數據之比較皆以 p < 0.05 表示有統計上之意義。