第五章 討論
第五章 討論
82
luciferase reporter assay 報導基因結果顯示，TZD (PPAR-γ 活性促進劑) 可以誘導 HBP1 -2kb promoter 的活性，相對地，GW9662 (PPAR-γ 活性抑制劑) 抑制了 (Phosphoenolpyruvate carboxykinase)和 FATP (fatty acid transport protein)。PPRE 的序列為(AGGTCA-N-AGGTCA)，目前已知的 PPAR 目標基因約有20幾個(81)， 或許，HBP1可能是另一個PPAR γ的目標基因。臨床上治療糖尿病的藥物 Thiazolidinediones (TZDs) 類藥物可經由活化PPAR γ來降低胰島素阻抗進而改 善血糖，或許，HBP1的調節可應用於未來治療代謝症候群與糖尿病患者上。
為了進一步確認 HBP1是PPAR γ的活化標的基因，定序出 HBP1 起動子 上的 PPRE 位置將課不容緩，另外，亦可使用染色質免疫沉澱法 chromatin immunoprecipitation assay (CHIP) 證明在細胞內中PPAR γ與 內生性 HBP1 啟 動子的交互結合作用，同時，在細胞外試驗中，利用電泳層析分析實驗方法 ( Electrophoretic Mobility Shift Assays, EMSA) ， 分析PPAR γ蛋白是否與特定序列 的HBP1 啟動子結合，更直接地，我們可利用 PPAR γ siRNA 將脂肪細胞的 PPAR γ 降解，如此一來，如果PPAR γ直接調控 HBP1 promoter，PPAR γ siRNA將造成 HBP1 的表現下降。
近年來，蔬菜及水果中的天然化學成分 (photochemical )，無論在流行病學
第五章 討論 到相當之重視。quercetin 調控脂肪細胞的研究指出，quercetin 抑制 3T3-L1 脂肪 細 胞 分 化 可 能 與 細 胞 凋 亡 （ apoptosis ） 的 調 控 有 關 ， 向 下 調 控 PARP
（Poly-ADP-ribose polymerase）及 Bcl-2 蛋白質，增加 caspase-3、Bax 等蛋白質 的表現，促進細胞凋亡(68)。同樣地，最近的一篇研究指出，添加 10、50 及 100 μM 的 quercetin 促使 casapse-3、casapse-9 活性增加，導致 3T3-L1 成熟脂肪細 胞凋亡比率增加，並降低脂肪細胞脂質生合成，有效減少脂肪粒數目及大小，另 外，quercetin 之添加亦會降低 phospho-extracellular signal-related kinase (P-ERK)、
c-Jun N-terminal kinase (JNK) 蛋白質之表現，顯示 quercetin 可經由 MAPK 訊息 傳遞路徑造成脂肪細胞凋亡之發生，而降低脂肪細胞的分化。最近的研究亦發現，
H2O2 促使 3T3-L1 MCE 期細胞週期的進行，進而促進脂質生合成，而當給予抗 氧化劑(50 μM genistein、50 μM resveratrol)後則導致 MCE 期細胞週期停滯和 分化不完全，因此，我們觀察 quercetin 是否造成 3T3-L1 MCE 期細胞週期停滯，
進而抑制脂肪細胞分化。如預期地，本實驗結果提供了 quercetin 抑制脂肪細胞 分化的另一個機制，那就是，quercetin 促使 MCE 期細胞週期停滯於 G1 的作用，
進而抑制脂質生合成。
同時，quercetin 也活化 MCE 期 HBP1 mRNA 表現，報導基因分析發現，
quercetin 也具有活化 HBP1 -2kb promoter 的能力，進而促使 MCE 期細胞週期生 長停滯，導致轉錄因子 CEBP/ β 和 C/EBPδ mRNA 的表現下降，進而抑制脂肪細 胞分化 。
第五章 討論
84
最後，為了進一步驗證 HBP1在脂肪分化所扮演的生理功能，在未來研究上，
將建立穩定表現 HBP1 Knockdown 的前脂肪細胞老鼠模式，此實驗結果，將強 力背書 HBP1為脂質生合成之一重要指標，也為HBP1將來成為防治肥胖的潛在 標的基因之可行性提供了有力的分生證據。