肝臟的生理作用包括儲存及過濾血液的功能、參與體內大部分代謝 系統有關的代謝作用，以及負責膽汁形成及排泄的功能。血液方面，
平均每分鐘有1450mL 的血液流經肝臟，其中約有 1100mL 來自門靜 脈，而約有 350mL 來自肝動脈。此外，肝臟中的 kuffer cells 的吞噬 作用很強，可以在門靜脈血液流經肝竇狀隙前去除其中99%以上包括 由腸道來的細菌。代謝方面，肝臟具有很高的代謝效率，並能與身體 的其他代謝系統協同作用。其主要作用包含對碳水化合物、脂肪與蛋 白質的代謝作用，亦包括藥物、荷爾蒙及礦物質的代謝。另外，膽紅 素的代謝又牽涉到紅血球的破壞、血紅素的運送，以及膽汁的形成與 分泌等作用[65]。由此可看出，肝臟作用的範圍相當廣泛，因此可說肝 臟是人體相當重要的器官。
然而肝臟相關的疾病很多，包括病毒性肝炎、藥物性肝炎、肝纖維 化、肝硬化與肝癌等，長期以來便為醫學界所關注的對象。根據統計，
在民國80~93 年之間，慢性肝病及肝硬化更一直位於國人的十大死因 之內。因此除了積極尋求治療藥物，研究指出，肝臟具有驚人的再生 能力，且肝細胞再生在許多肝臟疾病中都扮演著重要的修復角色，因 此肝再生便成為肝臟相關研究的重要議題。
然而因為許多藥物誘導之肝損傷模型常會造成肝細胞壞死、炎細胞 浸潤、細胞再生時間點不一等，加上部分肝切除所誘導的細胞再生環 境單純且時間點明確，因此部分肝切除的模式是最常被用來評估肝細 胞再生能力的研究題材。
相似的實驗模式已廣泛地被運用於肝再生實驗，例如，單一劑量之 Triiodothyronine(T3)可加強 70%部分肝切除後的肝再生作用[66]。Fish oil 和 Vitamin E 等可增加肝細胞之 GSH 與 SOD，亦有明顯之促進 70%
部分肝切除後肝細胞再生的能力[67]。另外，100 和 200 mg/kg 之 Sida cordifolia 水抽取物可刺激大鼠 67%部分肝切除後的肝再生作用[68]。
以及100 mg/kg 之 Hyptis pectinata 葉的水抽取物亦可刺激大鼠 67%部 肝細胞再生的作用多表現出較對照組、Silymarin 組與四物湯組為佳，
但大多未達統計意義。一般而言，2/3 部分肝切除後 7~10 天可恢復原 有肝臟質量。而在本次實驗當中，部分肝切除後 168 小時時，四君子 湯在肝重/體重比、PCNA GF、PCNA LI 與 BrdU LI 等指標上雖較各 組為高，但統計上並無明顯差異。
這暗示四君子湯對於已恢復原有重量之肝臟應無明顯的促進肝細
胞再生之作用，但進一步的試驗可再藉由延長實驗天數、延長 BrdU
水飛薊素(Silymarin)是 Silybum marianum(milk thistle)種子的萃取 物，其最早於西元前四百年就已被當做藥用植物來使用，而於十六世 紀時開始被用來治療肝膽相關疾病。而 Silymarin 是一種複雜的混合 物，其具有四種 flavonolignan 的異構物成分，包括 silybin、isosilybin、
silydianin 和 silychristin，其中 silybin 是含量最多(60~70%)亦是最主 要的活性成分[70]。實驗室研究已經證明 Silymarin 具有代謝及細胞調 節 (metabolic and cell-regulating effects)、抑制 5-lipoxygenase 路徑、
清除 R-OH 形式活性氧(ROS)與參與 DNA 表現的作用。另外雖然缺 乏嚴謹或明確的結果，但一些臨床研究依然顯示出 Silymarin 對於 Amanita phalloides 毒蕈中毒的死亡率、tacrine 的清除率、病毒性肝炎 與酒精性肝臟疾病等皆有一定的益處[71]。
本實驗指出，部分肝切除後72 小時時，Silymarin 在肝重/體重比、
PCNA LI 和 BrdU LI 都顯示出較對照組有更佳的肝再生促進作用，但 尚未達統計意義。而在血清學方面，部分肝切除後3 小時時，Silymarin 在 GOT、GPT、T-Bilirubin、γ-GT 和 ALP 等方面都較對照組為低，
然亦未達顯著差異。
而與四君子湯相較之下，四君子湯和Silymarin 在部分肝切除後 72
小時的肝重/體重比相近。而在 PCNA GF、PCNA LI 與 BrdU LI 等方 面，雖未達統計意義，但四君子湯卻都顯示出具較佳的肝再生促進作 用。另外於部分肝切除後 168 小時時，四君子湯在肝重/體重比、PCNA GF、PCNA LI 與 BrdU LI 等方都顯示出較 Silymarin 為佳的肝再生促 進作用，但其中僅肝重/體重比達統計意義。
在本實驗中發現，預防性投與四君子湯之大鼠，經 2/3 部分肝切除 後之肝再生作用明顯，各項增殖指標亦優於對照組、Silymarin 組與 四物湯組。而中醫理論認為，氣屬陽，血屬陰，氣主煦之，血主濡之。
氣與陽有促進機體生氣蓬勃之作用，四君子湯臨床上亦常運用於胃氣 虧虛、中氣不足之證。因此四君子湯是否會因促進個體氣機運行而影 響肝細胞之蛋白質合成、細胞體積改變、酵素活性改變和細胞再生的 區域(zone)不同等作用，進一步促進或參與肝細胞再生之作用則應再 深入研究與探討。
在肝再生相關分子機轉方面，最近的研究指出，肝再生的相關分子 機轉包含兩個重要的部份，一為 cytokine network、一則為 growth factors。Cytokine network 與肝再生的啟動有關，通常於部分肝切除 後會立即反應，與其相關的因子有TNFα、IL-6 和 NFκB 等。另外，
growth factors 則與接下來細胞週期的進行有關，而與其相關的因子則 有HGF、EGF 和 TGFα 等[7](圖 5.1) (圖 5.2)。相關的分子亦包括，在 部分肝切除後 24 小時內，肝細胞之凋亡(aptosis)降低一個星期。而 Fas ligand 亦在部分肝切除後 3 天內降低，而於 5~7 天後明顯上升。
Bcl-2 則在部分肝切除後 24 小時出現高峰值，而在 5 天後降低等[72]。
圖 5.1 肝細胞再生相關分子簡圖。摘自 David Zakim, Thomas D.
Boyer. Hepatology: a textbook of liver disease. Saunders 2003
圖5.2 肝再生相關分子與細胞週期的關係。摘自 Nelson fausto, et al.
liver regeneration. Hepatology, 2006; 43(2): s45-s53
而研究亦指出，四君子湯並可促使IL-2、IL-4、IL-5、TNF-α、IgE 低下，且淋巴細胞 IL-4、IL-5、CD2 mRNA 表現較弱患者之各項指標 恢復正常[39]。而四物湯能促進小鼠脾臟細胞分泌 IL-6 及提高 IL-6 mRNA 的表現[57]，且可促進 LPS 刺激巨噬細胞進而產生 IL-1 的活性
[59]。這些研究的結果是否與四君子湯促進肝再生的作用有關，仍應進
總膽紅素(Total Bilirubin)可顯示出溶血、肝細胞受損或膽管阻塞的 狀況[75]。而在部分肝切除後肝再生 3 小時時各組的差異頗大，但與對
另外，雖然 PCNA 免疫組織化學染色法可區分出細胞週期中的特 異階段，然而本次實驗中發現 PCNA 免疫組織化學染色的結果差異 頗大，由淺褐色至深褐色間要明確區分各個細胞週期的差異確屬不 易。因此不僅染色技術的純熟度會影響染色結果，檢體判讀的純熟度 亦會影響實驗結果。另外，本次實驗結果亦發現，BrdU 標記之細胞 較其他類似試驗為低，可能的原因推斷應與BrdU 注射的時間較晚(犧 牲前30 分鐘)有關。