Kv 通道之 C 型（慢性）鈍化現象的分子機制作用，目前並不是 完全了解，而現今已知其作用機制為：Kv 通道上的選擇性過濾器 或是其附近位置被壓縮，而導致孔洞變小，而使鉀離子無法順利通 過孔洞 (Kurata and Fedida, 2006；Hille, 2001)。而在藥理學中，作 用於 C 型（慢性）鈍化閥門之探針藥是很重要的。C 型（慢性）鈍 化現象，調節神經細胞的興奮性並產生動作電位之輪廓及頻率，是 非常重要；但是，至目前為止，特定針對於 C 型（慢性）鈍化現象 之機制探討的藥物是很缺乏的。
所以，在此研究中發現在N2A (neuroblastoma)細胞上，HMJ-53A 能加速Kv電流慢性鈍化現象。我們證實 HMJ-53A在N2A細胞中Kv 通道產生此作用，是在細胞外並非細胞內 (Fig.4)。而Fig.5之結果，
可以是由於兩種可能性：第一個，HMJ-53A之作用是在Kv通道關閉 階段；第二個，HMJ-53A之作用是在Kv通道開啟階段。假設作用於 開啟階段時，當HMJ-53A作用在Kv通道上時，會造成活化速率變慢，
且足以阻礙防止電流至最高峰。但從結果上可知，不可能為後者的 假設，因為從Fig.9C,D可知，活化kinetics並不會受到HMJ-53A的影 響。
在Fig.5的結果上說明，假設當通道剛開啟，HMJ-53A直接堵住通
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道上外孔，並部分重疊正在活化的電流；對於這樣的想法，需提出 的一個假設為：第一階段，HMJ-53A快速地直接堵住孔洞，且在一 開始活化後非常快速的堵住孔洞，而之後第二階段中，在細胞持續 極化情況下，相對以緩慢的速度繼續接近其結合位置，隨之產生越 明顯的電流下降情形。假如前述的第二個階段存在，很有可能表示 有一個drug-channel結合的位置，而此位置是靠去極化（或通道打開）
才暴露出來的。
所以，在我們的研究中去進一步探討，HMJ-53A與通道相互作用，
是否與各種不同程度的去極化有關呢？然而，當有HMJ-53A作用 時，在不同程度的去極化下，電流衰退的速度是不變的 (Fig. 6)。
再者，HMJ-53A抑制Kv電流的百分比也是非電壓依賴性的 (Fig.7A)。
還有，假如HMJ-53A直接堵住通道上孔洞，則將會與鉀離子在通道 之孔洞內相遇；假如降低細胞內鉀離子濃度，HMJ-53A將會更強地 阻礙鉀離子的流出。然而，從結果中得知，HMJ-53A (10 μM)對於 抑制Kv電流的百分比或加速C型鈍化，皆不因為大幅度降低細胞內 鉀離子濃度而受影響 (Fig.7B,C)。
由以上我們的結果可知，HMJ-53A的作用不太可能是直接堵塞通 道洞孔所造成的；這樣的結果更能顯示HMJ-53A作用在鈍化閥門。
可讓我們想像，當Kv通道在關閉狀態，HMJ-53A已經鈍化通道，因
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此讓我們得知，HMJ-53A阻斷Kv通道是在關閉狀態，當Kv通道打 開後，HMJ-53A加速鈍化閥門的關閉。
在Shaker (Kv1)通道及一些哺乳類動物相似Shaker之通道中，提升 細胞外鉀離子濃度和從細胞外加入TEA，會阻礙C型鈍化 (Choi et al., 1991; Fedida et al., 1999; Lopez-Barneo et al., 1993; Molina et al., 1997)。無論如何，在N2A細胞上，Kv通道中的C型鈍化速率，並不 會受到TEA (3 mM)的影響 (Fig. 8)。這樣的結果，或許是因為在N2A 細胞中，並無哺乳類動物相似Shaker之通道存在。而在我們實驗中，
則顯示HMJ-53A能作用於Kv2.1，而加速C型鈍化 (Fig. 3)。
但是有趣的是，HMJ-53A不會使Kv通道回復的速率減慢 (Fig. 10)，
這也表示，在復極化階段，HMJ-53A非常快速的離開Kv通道。基於 HMJ-53A抑制電流的Hill 係數3.5 (Fig.2)，表示HMJ-53A在Kv通道 上，有數個結合位置；因此我們提出一個觀點，在Kv通道上，
HMJ-53A作用於某一個結合位置，而產生closed channel block，而 HMJ-53A作用於其他結合位置，而加速慢性鈍化。所以，在復極化 期間，HMJ-53A離開後者之結合位置比較快，而不減慢及影響通道 的恢復時間。
關於HMJ-53A與鈍化閥門之間的相互作用，HMJ-53A導致穩定狀 態之鈍化曲線左移12 mV。在未有HMJ-53A的N2A細胞上，可以記
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錄一個明顯的U型鈍化之Kv電流。因此，在較強的去極化中 (> +50 mV)，鈍化閥門不容易關閉。有文獻指出，Kv1.5、Kv2.1和Kv3.1，
會表現U型鈍化 (Klemic et al., 2001; Kurata et al., 2005; Kurata et al., 2002)；這或許表示N2A細胞中，存有一個或著一些這樣的通道，才 產生這樣的U型鈍化。
在極端的去極化下，Kv通道難以鈍化，而因此表現之U型鈍化，
其分子機制至今還不清楚。而HMJ-53A能克服此U型鈍化 (Fig. 9A)，
更能證明HMJ-53A能加劇鈍化閥門的關閉。
HMJ-53A是否能影響細胞質內的活化閥門作用呢？在此我們提 供了證據，去顯示HMJ-53A對於Kv通道上活化的電壓依賴性和 kinetics並不影響 (Fig. 9B – D)。綜合以上結果，作用於Kv通道的鈍 化閥門的HMJ-53A是一個新穎的藥物。
目前已有幾篇報導指出，有幾種化合物可以增加鈍化閥門速度。
KN-93是目前已知作用在細胞外，而能提升Kv通道上慢性鈍化的速 度 (Ledoux et al., 1999; Rezazadeh et al., 2006)；但此藥物的作用及 影響，沒有完全之可逆性且會作用在活化閥門：活化曲線有輕微的 左移現象，並且Boltzmann斜率有明顯的下降。 (Rezazadeh et al., 2006)。而亞麻油酸 (Linoleic acid)也能在Kv1.5和Kv2.1中，加速慢 性鈍化，而其作用在細胞外而非細胞內 (McKay and Worley, 2001)；
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況且，亞麻油酸會影響活化閥門，使活化曲線左移和加速活化 kinetics (McKay and Worley, 2001)。因此，在我們的研究中發現，
HMJ-53A的作用是完全可逆的和有選擇性的作用在鈍化閥門上的。
故在往後的研究中，HMJ-53A將可以作為深入探討Kv通道之鈍化閥 門之理想藥物。
Quinidine目前已知能導致C型鈍化加速 (Wang et al., 2003)，但 quinidine此作用須經由細胞內allosteric的動作且須通道先開啟而才 能把電流阻斷。此外，4-aminopyridine是一個作用在細胞質內的Kv 通道阻斷劑，但卻被證實出能抑制Shaker通道之C型鈍化，但其機 轉不甚清楚 (Claydon et al., 2007)。
最後，我們要問的，是否HMJ-53A可作用在細胞膜上或細胞內而 激發蛋白質激酶，進而影響鈍化閥門？從我們的結果得知，加入 staurosporine至N2A細胞後，不會改變細胞本身的電流衰退，或者也 不影響加入HMJ-53A後的C型鈍化速度。而這些否定的結果可以讓 我們確定HMJ-53A並不是作用在細胞膜上而再經由某些磷酸化訊 息傳遞路徑，去調控C型鈍化。而從HMJ-53A不能在細胞內影響Kv 電流的實驗中，意味著HMJ-53A的作用，並不是經由調控細胞內的 因子或是擾亂細胞膜上脂質(lipid)的平衡而造成的 (Oliver et al., 2004)。
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往後之研究方向，我們想繼續探討在 HMJ 系列衍生物的結構上，
大幅度地加長 CH2CH3，看其能否加倍增強鈍化之能力？我們也想 深入探討 HMJ 衍生物，對於其它已知存在神經細胞上之 Kv 通道，
例如：Kv1.1 或 Kv1.2…等之影響 (Sheng et al., 1993; Sheng et al., 1994; Shimada et al., 2007)。另一方面，當 HMJ-53A 在高濃度情況 下（例如：100μM），是否會對 Kv 通道上之其它動作有影響，而 在 HEK 細胞株上表達 Kv4.3，去深入探討是否高濃度的 HMJ-53A 會影響 Kv 通道上之 N 型鈍化呢？
我們想再深入研究一個有趣的問題，在生理層面，當神經細胞受 損時，例如：神經退化疾病；此 HMJ 衍生物其是否有神經保護之 功能呢？而作為一種神經保護嶄新之用藥呢？這是往後我們想再 深入探討之方向。