第三章 ：研究結果
第五節 ：HMJ-53A 作用在 Kv 通道之鈍化閥門
由以上結果可知HMJ-53A並非直接堵塞通道外孔作用。因此，
HMJ-53A加快電流衰退，有可能是作用在鈍化閥門關閉階段上，並
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讓人懷疑是否作用在選擇性過濾器本身上而加快其壓縮，增加C型 鈍化速度；換句話說，或許HMJ-53A作用是直接經由增加C型鈍化 速度。
更仔細去探討，在N2A細胞上，到底HMJ-53A如何影響Kv通道之 鈍化作用；所以，加入HMJ-53A後，觀察Kv電流的穩定狀態之鈍化 是否有受影響呢 (Fig. 9A)？在加入HMJ-53A此組，比未加HMJ-53A 此組，其穩定狀態之鈍化曲線左移12 mV（未加及已加HMJ-53A，
分別為V1/2 = -21.2 ± 2.5 mV和-33.0 ± 2.3 mV; p<0.05）；不管如何，
HMJ-53A並未改變其斜率(未加及已加HMJ-53A，分別為6.9 ± 1.3 and 5.9 ± 1.2；p>0.05)。而另一點引人注意，在未加HMJ-53A組別 中，鈍化現象在較強烈的去極化下 (> +50 mV)逐漸減慢，此結果稱 之為U型鈍化 (U-type inactivation)（Klemic, 2001; Kurata, 2002, 2005），而此鈍化作用，為何在極端的去極化中，會減弱其鈍化作 用，現今對於其主要的機制尚未明白。在已加HMJ-53A此組中，已 看不到U型鈍化，顯示對鈍化之抗拒作用，已被HMJ-53A克服。這 樣的結果可進一步支持HMJ-53A作用在鈍化閥門之假說。
另一方面，HMJ-53A是否會影響鈍化閥門的恢復呢？用dual-pulse 方式去檢視有或沒有加入HMJ-53A的Kv電流恢復的情況 (Fig.10)。
讓人意外的發現，有否加入HMJ-53A對Kv電流之恢復的速率沒有影
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響，兩者皆須要好幾秒才能完全恢復，而恢復速率最佳的fit方式為 double-exponential；快速恢復中，未加及已加HMJ-53A τ 分別為187
± 55 和 142 ± 38 ms (p > 0.05; n= 6-7)，而在慢速恢復中，未加及 已加HMJ-53A， τ 分別為3115 ± 982和1542± 810 ms（p > 0.05; n = 6-7）。從這些結果中得知，HMJ-53A加快鈍化閥門關閉的速度，
但卻不阻礙其恢復情形。
第六節：HMJ-53A不會影響Kv 通道上之活化閥門
此實驗中，再深入研究，在N2A細胞中，是否HMJ-53A會影響Kv 通道中的活化閥門？從電壓依賴曲線圖 (-70mV至+70mV)中，可知 Kv通道之活化閥門並無受到HMJ-53A影響 (Fig.9B)（未加及已加 HMJ-53A，分別為V1/2 = 12.8 ± 3.2 mV和15.2 ± 1.6 mV；p>0.05），
並且HMJ-53A也不影響斜率(未加及已加HMJ-53A，分別為11.1 ± 0.5 和 13.9 ± 1.4; p>0.05)。
在Fig.9C中，比較未加及已加HMJ-53A組之活化kinetics，得知並 無分別。從Fig.9D的量化曲線圖顯示，Kv電流被更強之去極化刺激 時，隨之增加活化速率；已加HMJ-53A組別中，可得知在不同的去 極化刺激下，與未加HMJ-53A組別比較並不會改變其活化速率。由 以上結果可得知，HMJ-53A不會影響Kv通道之活化閥門。
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第七節：HMJ化合物其結構與產生加速鈍化閥門關閉之
相關性
綜合以上的結果，得知 HMJ-53A 有選擇性的作用在 Kv 通道上之 鈍化閥門，而加速其關閉。在 Fig11 表示數個 HMJ 衍生物，抑制穩 定狀態電流之濃度依賴性 (concentration-dependence)。而到底 HMJ 化合物的結構中，到底是哪一個部分(moiety)會造成這樣的作用呢？
在此實驗中，假如增加或減短 HMJ-53A 其中的 CH2CH3，是否會影 響作用的強度？而依 CH2CH3的短長，分別有 HMJ-1、HMJ-29A、
HMJ-53A 及 HMJ-73A（見圖 A、B）。
在記錄 N2A 電流時，給予連續去極化+30mV，加入 HMJ-1 (30 μM)，
並無抑制穩定狀態之電流。再進一步證實，在 N2A 細胞上，給予 連續去極化+30mV，再加入不同濃度之其它 HMJ 化合物，而看其 對穩定狀態電流之影響。得之 HMJ-29A 之 IC50為 17.5 μM，並從 Hill plot 獲得 Hill 係數為 2.3。HMJ-53A 結果見 Fig2。HMJ-73A 之 IC50為6.5 μM，Hill 係數為 1.9。
從以上結果得知 HMJ-1 不影響 Kv 電流。而 HMJ-29A 為中度影 響 Kv 電流，HMJ-53A 及 HMJ-73A 為強度影響 Kv 電流 (Fig. 11)。
所以，綜合以上結果，與我們的假設符合，可以得知 HMJ-53A 的 結構中，CH2CH3為主要影響鈍化閥門的關閉加速之結構。