本研究分為二大部分。 (圖 1、圖 2)
第一部分、藉由二倍體和單倍體染色體的不同，以紫外光 (UV) 照射 後之生存曲線分析由顯微操作器分離出之菌株的倍數體，並篩選出營養要 求 (auxotrophic) 菌株，藉由不同性別、不同營養要求菌株的成功交配前、
後之倍數體變化，證明白色念珠菌可經由單倍體完成有性世代。 (genetic changing)，即同型合子化的轉換過程，再經由表觀遺傳上的轉換 (epigenetic switching)，轉換成 opaque phase，方能進行交配，這將是尋 找其有性世代之關鍵。
Anderson 等人於 1987 年所發表之實驗系統，在含有 Phloxine B 的 Lee’s medium 中發現白色念珠菌 opaque phase 的菌落會呈現粉紅色，而 這 些 同 型 合 子 化 的 菌 落 確 認 為 二 倍 體 的
MTLa (a1/a1) 或 MTLα
(α1α2/α1α2)，其細胞形態不同於 white phase 的橢圓球狀結構，為較長型 的結構，而此系統將 wjhite-opaque switching 的轉換機率由 10-4
提升至 10-3
(Anderson and Soll, 1987; Slutsky et al., 1987; Soll, 2004)。於本實 驗室先前研究中發現白色念珠菌在 Fluconazole、Terbinafine 的壓力刺激 下，含有Phloxine B 的 Lee’s medium 或 PDA 中，於抑制圈內產生紅色菌落，將單一紅色菌落再藉由塗盤篩選與PCR 分析，發現為高頻率 (機率 為10
-1
) 同型合子化之 opaque 菌落，分析其交配基因型發現，其包含 a1、α1α2、a1/α1 和 a1/α2 四種情況 (歐聰億, 2007; 鄭瑋寧, 2008)，除此之 外，也發現其細胞含有一種以上之形態，大致可分為fat cell、long cell 和 mycelium cell (圖 3)，因此推測混雜菌株中 a cell 可能與 α cell 進行交配，
回到 a/α cell 的細胞，便造成 a/α cell 與較多仍未完全進行交配的 a cell 或α cell 混合生長的情況，也暗示混雜菌落可能為減數分裂之產物。由於 屬於Azole 類藥物的 Fluconazole 會抑制麥角固醇 (Ergosterol) 生合成中 Cytochrome P450 系統的酵素 14α-demethylase，使得 Ergosterol 的合成 受到抑制 (Kelly et al., 1997)，也間接造成鮫鯊烯 (Squalene) 的累積，
因此於培養基中加入 Squalene，觀察其對白色念珠菌之影響。本實驗室 以此三系統進行研究。 (圖 4)
而本研究的部份除了觀察受Fluconazole 藥物處理之系統中探討白色 念珠菌可能之有性器官細胞形態外，並探討於 Fluconazole 藥物壓力下，
Ergosterol 對細胞形態之影響，除此之外，也將探討 Squalene 對白色念 珠菌細胞形態之影響。
第一部分、白色念珠菌倍數體測定與營養要求菌株篩選
(粗框部分為本研究部分) 圖 1 實驗架構圖之白色念珠菌倍數體測定與營養要求菌株篩選
第二部分、白色念珠菌形態觀察
圖 2 實驗架構圖之白色念珠菌形態觀察
圖 3 在 Fluconazole 或 Terbinafine 壓力下產生不同於一般酵母菌型的細胞形態 右圖為細胞形態較圓胖的 fat cell；中圖為具有長菌絲形態的 mycelium
cell；左圖為細胞形態較長型的 long cell；橫標代表之長度為 10 μm
圖 4 白色念珠菌之同型合子化 (Homozygosis) 之三種途徑
系統I 為 Anderson 等人於 1987 年發表之實驗系統，為含有 Phloxine B 的Lee’s medium (Anderson and Soll, 1987) ；系統 II 為本實驗室提出 之實驗系統，為Fluconazole 或 Terbinafine 藥物壓力下之含有 Phloxine B 或可加入Ergosterol 的 PDA medium；系統 III 為含有 Squalene 之 PDA medium