4-2.2 觀察 Fluconazole 壓力下 Ergosterol 對白色念珠菌巨觀形 態之影響
屬於Azole 類藥物的 Fluconazole 會抑制麥角固醇 (Ergosterol) 生合 成中 Cytochrome P450 系統的酵素 14α-demethylase，使得 Ergosterol 的合成受到抑制。因此在培養基中加入 Ergosterol，觀察是否能使在 Fluconazole 藥物壓力下所產生的 Peapod 存活、發芽。
4-2.2.1 解剖顯微鏡觀察菌落形態
在YEPD/PB 和 YEPD/PB/0.2% Ergosterol 培養基進行抗生素感受性 試驗。此二種培養基進行Fluconazole 的抗生素感受性試驗後，均可產生 明顯的抑制圈，抑制圈內和抑制圈上的菌落顏色為較深的酒紅色，抑制圈
Ergosterol 培養基，P1 區的菌落呈現較扁平、不規則的形態；P2 區的菌 落較立體、成規則的圓形；P3 區和 Control 區的菌落形態較類似，只有顏 色的差異。抑制圈內 (含抑制圈上) 的 P1 和 P2 菌落較小，而抑制圈外的 P3 和 P4 菌落較大。 (Figure 4-8、4-9)
Figure 4-6 抗生素感受性試驗
圖A 的培養基為 YEPD/PB；圖 B 為 YEPD/PB/0.2% Ergosterol。以此二 種培養基進行 Fluconazole 抗生素感受性試驗後，均可產生明顯的抑制 圈，抑制圈內和抑制圈上的菌落顏色為較深的酒紅色，抑制圈邊緣為顏 色較淺的粉紅色，甚至為白色，離加藥紙錠 (paper disc) 距離越遠，顏 色越淡
Figure 4-7 抗生素感受性試驗分區示意圖
將整個培養基分成四個區域，抑制圈內部為 P1，抑制圈上為 P2，抑制
YEPD/Phloxine B +/- Ergosterol
P1 P2
P3 Control FLU
A B
Figure 4-8 以解剖顯微鏡觀察於 YEPD/PB 培養基上進行之抗生素感受性試驗
Figure 4-9 以解剖顯微鏡觀察於 YEPD/PB/0.2% Ergosterol 培養基上進行之 抗生素感受性試驗
無論培養基中是否含有 Ergosterol，菌落的形態相似。P1 區菌落呈現較 扁平、不規則的形態；P2 區菌落較立體、成規則的圓形；P3 區和 Control 區的菌落形態較類似，只有顏色的差異。抑制圈內 (含抑制圈上) 的 P1 和P2 菌落較小，而抑制圈外的 P3 和 P4 菌落較大
P1
P2
P3 Control
P1
P2
P3
Control
4-2.2.2 觀察特殊菌落形態之相關性
由於無法獲得具有存活力的Peapod，因此只能藉由其生成之結果回 推Flucnazole 造 成 菌 落 形 態 不 同 與 Peapod 出 現 機 率 之 相 關 性 。 在 Fluconazole藥物處理後，塗盤 (plating) 於YEPD/PB、YEPD/PB/0.1%
Ergosterol和YEPD/PB/0.2% Ergosterol培養基中，比較四個區域P1、P2、
P3和Control的菌落形態，結果發現在YEPD/PB培養基中，大部分的菌落 為形態正常，較大的菌落，而P1、P2偶有形態變異的小菌落出現，但出 現比例非常低。 (Figure 4-10)
而在YEPD/PB/0.1% Ergosterol的培養基中，雖然大部分仍是形態正 常較大的菌落，但在第2週的P1形態變異的小菌落之比例遠高於正常較大 的菌落。在YEPD/PB/0.2% Ergosterol培養基中，不論週數，P1或P2形態 變異的小菌落比例大幅增加，甚至高於正常較大的菌落。 (Figure 4-11、
4-12)
實驗結果顯示，在Peapod存在的抑制圈內 (P1、P2) 中，形態變異 的 小 菌 落 比 例 較 抑 制 圈 外 (P3 、 Control) 高 。 此 外 ， 也 發 現 在 含 有 Ergosterol的培養基上塗盤後生長的菌落形態呈現多樣性，除了有正常較 大的菌落和形態變異的小菌落外，還有具多重菌絲的 (hyper-filamentous) 菌落形態。 (Figure 4-13)
統整以上結果，白色念珠菌標準菌株SC5314受Fluconazole藥物處理 後 之 抑 制 圈 內 可 找 到Peapod 的 存 在 (Figure 4-5) 。 無 論 是 否 含 有 Ergosterol，將Fluconzole處理之培養基分成P1、P2、P3和Control四個部 份，則可發現抑制圈內 (含抑制圈上) 的P1和P2菌落較小，而抑制圈外的 P3和P4菌落較大 (Figure 4-8、4-9)。另將其塗盤至含有不同Ergosterol 濃度的培養基中，發現在Peapod存在的抑制圈 (P1、P2)，菌落形態呈現 多樣性，間接證明Peapod可能是白色念珠菌減數分裂後所造成的結果，
而Peapod可能是C. albicans的有性器官。 (Figure 4-10、4-11、4-12、4-13)
Figure 4-10 Fluconazole藥物處理後於YEPD/PB培養基中菌落形態比例 圖A、B、C、D分別代表第1、2、3、4週。在YEPD/PB培養基中，大部 分的菌落為形態正常的較大菌落，而P1、P2偶有形態變異的小菌落出 現，但出現比例非常低