第二章 實驗材料與方法
第三節、 高空 T 型迷宮(Elevated T Maze)
國
立 政 治 大 學
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N a tio na
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第二章 實驗材料與方法
第一節、 實驗動物
本論文所使用之實驗動物為 C57BL6 公小鼠,購自於國家實驗國家實驗中心 以及台大動物實驗中心。年齡約為 6 至 8 週大的成鼠,動物房之室內溫度維持 在 22±1°C,晝夜循環燈控設定為 12/12 小時,早上 8 點至下午 8 點為白晝,飼 養期間給予適當的飼料與飲水,並且每天測量其體重與飲食的變化。
第二節、 飲食操弄
我將 6 至 8 週大的小鼠分為三組 : 第一組為控制組別(control),在飲食操弄期 間每天給予充分的飲食(fed ad libitum)。第二組為卡路里節制組別,其飲食量為 控制組別的 60%(Halagappa et al., 2007) ,且在每天約下午 5:00pm 給予餵食。第 三組為高脂肪組別,其食物為高脂肪食物,即脂肪(fat)比例為 40%。三組小鼠 都在 8 週以上的飲食控制後,進行實驗操弄。在飲食控制期間,每天記錄小鼠 體重和飲食的改變。
第三節、 高空 T 型迷宮(Elevated T Maze)
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二、 學習測量方法
在每次實驗前,均會把實驗小鼠放在實驗房間半個小時,以讓小鼠適應實驗 環境,減少對於實驗結果的影響。接下來把小鼠放在 enclosed arm 最裡端,讓 其有 300 秒的時間可以自由的探索。每當小鼠的四肢都離開了 enclosed arm 來 到 open arm,實驗就中斷,並且把小鼠放回去鼠籠,休息 30 秒,然後再一次放 在 enclosed arm 最裡端開始第二次的實驗。以上述的條件,每隻小鼠在一天之 內要訓練到整個 300 秒都待在 enclosed arm 為止,並記錄其所花的訓練次數。
除此之外,如果小鼠只是延伸身體到 open arm,只有一隻或兩隻腳掌踏入到 open arm,然後立即回到原先的位置,則記錄為一次嘗試(try)。以嘗試的頻率 (frequency of tries) 可 以 算 出 危 險 指 標 (risk index) , 其 算 法 為 :
當危險指標為 1 時,代表小鼠沒有進入到 open arm;反之當危險指標為 0 時,
則小鼠有進入到 open arm。根據過去的文獻(De-Mello and Carobrez, 2002),危 險指標可以反應出小鼠學習表現的好壞。危險指標越高,學習表現越好,反之 則越差。
三、 記憶測量方法
在小鼠學習完後 24 小時,再把其放回 enclosed arm,並且記錄在 300 秒內其 待在 enclosed arm 的時間(秒),以及嘗試的次數。在記憶測量階段僅實施一次的 測量以代表記憶能力的表現。
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圖一、Elevated T Maze 裝置示意圖。首先將小鼠放在 enclosed arm 底端,在 300 秒內小鼠可以自由的探索。一但小鼠四肢都踏入 open arm,則把小鼠拿起 並放回至鼠籠 30 秒,等待下次的實驗。在一天之內小鼠必須要學會在完整的 300秒內都待在 enclosed arm 裡,才算是學習完成,最後以學習所花的次數來作 為判斷學習能力好壞的依據。在學完後 24 小時,再把小鼠放回到 enclosed arm,
並且記錄待在裡面的時間,作為判斷記憶能力表現好壞的依據。此圖參考 (Zangrossi Jr and Graeff, 1997)繪製而成。
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