TRAIL 誘導 A 型流感病毒感染之 A549 及 HL-CZ 細胞凋亡

3.1.1 rhTRAIL 蛋白對 A 型流感病毒感染之 A549 細胞及 HL-CZ 細

胞型態上的影響

經感染及未感染 A 型流感病毒之 A549 及 HL-CZ 細胞，分別予 以不同濃度 (20 ng/ml、100 ng/ml)之人類重組 TRAIL 蛋白處理，作 用24 及 48 小時後，以倒立式像位差顯微鏡觀察型態上的變化。(圖 1) A 型流感病毒及 rhTRAIL 均會誘發 A549 細胞凋亡型態，當我們單

獨給予細胞rhTRAIL 或只感染 A 型流感病毒時，當病毒或蛋白作用 的24 小時後，我們可以觀察到少數、輕微凋亡的細胞型態產生 (細 胞變圓、皺縮)。經 48 小時後，多數細胞皺縮，甚至有凋亡小體、漂 浮的細胞殘骸產生。然而同時給予rhTRAIL 及感染 A 型流感的細胞，

作用24 小時便可以觀察到細胞凋亡的型態產生，隨著予以的 rhTRAIL 濃度的增加，凋亡的現象會更明顯。作用 48 小時後，細胞明顯皺縮、

空泡化，凋亡小體出現頻率增加，多數細胞已成漂浮的死細胞、細胞 破裂的殘骸碎片。根據細胞型態上的觀察，(圖 6) HL-CZ 細胞對 rhTRAIL 誘發的凋亡現象並不敏感，剛我們僅給予 HL-CZ 細胞 rhTRAIL 時，隨著濃度的增加、作用時間的拉長，予以蛋白的細胞和

作為控制組的Mock 細胞並無太大的差異。同樣的，當我們給予 HL-CZ 細胞rhTRAIL 及感染 A 型流感，作用 24 小時便可以觀察到細胞凋亡 的型態產生，隨著予以的rhTRAIL 濃度的增加，凋亡的現象會更明 顯。作用48 小時後，細胞明顯皺縮、空泡化，凋亡小體出現頻率增 加，多數細胞已成漂浮的死細胞、細胞破裂的殘骸碎片。綜合以上的 結果，rhTRAIL 會加速促使 A 型流感病毒感染的細胞形成凋亡的形 態。

3.1.2 利用流式細胞儀分析，rhTRAIL 蛋白對 A 型流感病毒感染之

A549 細胞及 HL-CZ 細胞細胞周期之影響，誘導凋亡的程度

分別給予經感染及未感染 A 型流感病毒之 A549 及 HL-CZ 細胞 不同濃度(20 ng/ml、100 ng/ml)的 rhTRAIL 於 24、48 小時後，觀察 A549 及 HL-CZ 細胞週期知變化、週期分佈的情形。細胞週期分佈的 情形，細胞週期所佔每一個時期比例以百分比顯示。

結果顯示，(圖 2、圖 3) 當 A 型流感病毒感染 A549 細胞 48 小時後，

均會造成細胞週期的G2 期比例下降，S 期的細胞分佈比例上升，形 成細胞停滯在S 期 (S phase arrest)。當予以不同濃度 rhTRAIL 48 小 時後，在A549 細胞此現象有更加明顯的趨勢，rhTRAIL 促使 A 型流 感病毒感染之A549 細胞 G2 phase 下降比例增加，而細胞停滯在 S 期 比例上升。(圖 7、圖 8)然而在 HL-CZ 細胞，其 S 期停滯的變化之差

異則較為緩和，rhTRAIL 促使 A 型流感病毒感染之 HL-CZ 細胞 G2 phase 下降比例增加，而細胞停滯在 S 期 (S phase arrest)分佈上升 。 而Sub G1 期分佈的情形：隨著予以 rhTRAIL 蛋白的濃度增加、作用 的時間拉長，Sub G1 期的細胞分佈的比例亦有逐波而上的趨勢，當 我們給予正常細胞或A 型流感病毒感染細胞不同濃度 rhTRAIL 蛋 白，(圖 3) 可發現予以重組蛋白 TRAIL 濃度較高的細胞，其 Sub G1 比例大於濃度較低者；經A 型流感病毒感染者會大於正常細胞。然 而rhTRAIL 造成此差異的現象，由結果可發現，其中(圖 8) HL-CZ 細胞又相較於A549 細胞的變化緩和。由以上的結果顯示，rhTRAIL 會促使A 型流感病毒感染的細胞週期停滯在 S 期 (S phase arrest)，促 使凋亡細胞 (sub G1) 比例的增加。

3.1.3 利用 Annexin V-FITC 特異性染色檢測，rhTRAIL 蛋白 對 A

型流感病毒感染之 A549 細胞及 HL-CZ 細胞凋亡分析

分別給予經感染及未感染 A 型流感病毒之 A549 及 HL-CZ 細胞 不同濃度(20 ng/ml、100 ng/ml)的 rhTRAIL 於 24、48 小時後，以 AnnexinV 特異性染色，觀察 A549 及 HL-CZ 細胞其正常細胞、凋亡 細胞、壞死細胞分佈的情形。細胞分佈的情形，細胞分佈所佔每一個 象限比例以百分比顯示。結果顯示，(圖 4)受感染的 A549 細胞，隨著 予以rhTRAIL 蛋白的濃度增加、作用的時間拉長，第二 (壞死細胞或

凋亡晚期細胞) 及第四項限 (凋亡細胞) 的細胞分佈的比例有上升的 趨勢，當我們給予正常或A 型流感病毒感染細胞不同濃度 rhTRAIL 蛋白，(由圖 5)可發現予以 rhTRAIL 濃度較高的細胞，其凋亡細胞的 比例大於濃度較低者；經A 型流感病毒感染者會大於正常細胞，呼 應細胞週期Sub G1 的結果。然而(圖 9、圖 10) HL-CZ 細胞相較於 A549 細胞，受到rhTRAIL 的影響較為緩和。以上結果呼應細胞週期 Sub G1 的結果，rhTRAIL 會促使 A 型流感病毒感染的細胞凋亡比例的增加。